953例乳腺癌患者CK5/6、EGFR和AR的表達(dá)與臨床病理分析

金玉，王艷輝，楊樂欣，任麗

（天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，國(guó)家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津市“腫瘤防治”重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市惡性腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300060）

乳腺癌是全球女性高發(fā)的惡性腫瘤，2020年全球乳腺癌新發(fā)病例226萬(wàn)，取代肺癌成為世界第一大癌[1]。免疫組化指標(biāo)在乳腺癌的診斷和治療中起著積極的指導(dǎo)作用。細(xì)胞角蛋白5/6（CK5/6）是一種基底細(xì)胞角蛋白，特異性表達(dá)于上皮細(xì)胞胞質(zhì)，用于判斷細(xì)胞的類型和分化程度。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）是細(xì)胞增殖和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受體，與腫瘤細(xì)胞增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡的抑制有關(guān)[2]。雄激素受體（AR）屬于核類固醇激素受體家族，起著細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子的作用，已成為乳腺癌中潛在的治療靶點(diǎn)，但目前對(duì)于AR的研究不充分[3]。本次研究旨在回顧性分析953例乳腺癌CK5/6、EGFR、AR的表達(dá)與臨床病理分析的關(guān)系，為臨床治療提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象本研究回顧性分析了2020年5月23日—2020年12月31日于天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院確診為乳腺癌的953例患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范》[4]中乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理檢查確診。（2）女性，單側(cè)初次病變。（3）術(shù)前未進(jìn)行化療、放療及內(nèi)分泌治療。（4）臨床資料及病理資料完整無(wú)缺失。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）高血壓、心臟病、糖尿病、青光眼等基礎(chǔ)疾病患者。（2）雙乳腫物、雙乳癌或此前有乳腺腫物切除的患者。（3）其他腫瘤患者。（4）智力障礙或其他嚴(yán)重精神疾病患者。（5）肝臟、腎臟或其他婦科疾病患者。

1.2 病理結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)（1）ER/PR狀態(tài)的判定標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤細(xì)胞核著色程度≥1%為陽(yáng)性（+），＜1%或無(wú)著色為陰性（-）[5]。（2）人類表皮生長(zhǎng)因子受體2（Her-2）狀態(tài)的判定標(biāo)準(zhǔn)：免疫組織化學(xué)染色I(xiàn)HC（1+）或IHC（0）判定Her-2陰性；IHC（3+）判定Her-2陽(yáng)性；IHC（2+）進(jìn)一步通過FISH方法進(jìn)行Her-2基因狀態(tài)檢測(cè)，分別納入陰性組和陽(yáng)性組[6]。（3）Ki67狀態(tài)的判定標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)2011年St.Gallen國(guó)際乳腺會(huì)議確定標(biāo)準(zhǔn)[7]，Ki67的表達(dá)水平以陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)來(lái)計(jì)算，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜14%為低表達(dá)，≥14%為高表達(dá)。（4）CK5/6狀態(tài)的判定標(biāo)準(zhǔn)：CK5/6陽(yáng)性為在腫瘤細(xì)胞質(zhì)上出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒，標(biāo)本中隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡（400×）視野，陽(yáng)性細(xì)胞百分比≥5%表示抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)（+），＜5%表示抗體呈陰性反應(yīng)（-）[8]。（5）P53、EGFR和AR的判定標(biāo)準(zhǔn)：P53和AR定位于細(xì)胞核，EGFR定位于細(xì)胞膜。免疫組織化學(xué)結(jié)果判定依據(jù)DAKO HerceptTest評(píng)分系統(tǒng)，按照陽(yáng)性細(xì)胞占觀察細(xì)胞比例半定量分級(jí)：陽(yáng)性反應(yīng)≤10%為陰性（-），＞10%為陽(yáng)性（+）[9]。

1.3 分子分型標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）第8版乳腺癌TNM分期圖譜[10]進(jìn)行，即（1）Luminal A：ER（+）和（或）PR（+），Her-2（－），Ki67＜14%。（2）Luminal B：①Her-2陰性，ER（+）和（或）PR（+），Her-2（－），Ki67≥14%。②Her-2陽(yáng)性，ER（+）和（或）PR（+），Her-2（+），Ki67任意。（3）Her-2過表達(dá)：ER（－），PR（－），Her-2（+）。（4）三陰乳腺癌（TNBC）：ER（－），PR（－），Her-2（－）。三陰性乳腺癌可進(jìn)一步依據(jù)CK5/6（+）和（或）PR（+）分為基底細(xì)胞樣型TNBC（BL-TNBC），依據(jù)CK5/6（－）和PR（－）分為非基底細(xì)胞樣型TNBC（non-BL-TNBC）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示；比較采用χ2檢驗(yàn)，n＜5，則用Fisher’s檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析；CK5/6、EGFR和AR的獨(dú)立危險(xiǎn)因素用Logistic回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者臨床特征患者年齡23～77歲，平均年齡（49.55±10.11）歲，發(fā)病年齡主要集中于42～56歲，其中≤50歲535例（56.1%），＞50歲418例（43.9%）。初發(fā)左乳癌476例（49.9%），右乳癌477例（50.1%）。絕經(jīng)414例（43.4%），未絕經(jīng)539例（56.6%）。轉(zhuǎn)移292例（30.6%），未轉(zhuǎn)移661例（69.4%）。對(duì)乳腺癌分子分型進(jìn)行分類，其中Luminal A型占7.5%（71/953），Luminal B（Her-2陰性）占56.1%（535/953），Luminal B（Her-2陽(yáng)性）占14.3%（136/953），Her-2過表達(dá)型占10.5%（100/953），三陰乳腺癌占11.6%（111/953）。病理分型中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌占71.1%（678/953），其他病理分型占28.9%（275/953）。

2.2 免疫組化各指標(biāo)的表達(dá)及其相關(guān)性ER、PR、ki67和AR陽(yáng)性率高，分別為76.3%、64.2%、91.6%和80.5%。Her-2、P53、CK5/6和EGFR陽(yáng)性率低，分別為25.9%、38.3%、12.0%和19.6%。進(jìn)一步探究CK5/6、EGFR和AR的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，CK5/6和EGFR的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.52，P＜0.001）；CK5/6和AR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.488，P＜0.001）；EGFR和AR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.310，P＜0.001）。

組織分級(jí)個(gè)案缺失100例，臨床分期個(gè)案缺失165例，TNM個(gè)案缺失165例，其余病例信息均完整。研究發(fā)現(xiàn)，CK5/6的表達(dá)在不同的分子分型和組織分級(jí)中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而與年齡、乳腺癌初發(fā)位置、是否絕經(jīng)和病理分型差異無(wú)關(guān)。EGFR的表達(dá)除與年齡和乳腺癌初發(fā)位置無(wú)關(guān)外，其余均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。AR的表達(dá)在不同的分子分型和組織分級(jí)中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與其他因素?zé)o關(guān)（表1）。

表1 CK5/6、EGFR和AR的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]Tab 1 Relationship between the expression of CK5/6，EGFR，AR and clinicopathological characteristics[n（%）]

CK5/6、EGFR和AR的表達(dá)與臨床分期和TNM分期的關(guān)系表明，CK5/6、EGFR和AR的表達(dá)在不同的臨床分期中有差異（P＜0.05）。CK5/6和EGFR的表達(dá)與腫瘤是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與腫瘤大小和淋巴結(jié)無(wú)關(guān)。AR的表達(dá)與淋巴結(jié)數(shù)量有關(guān)（P＜0.05），而與腫瘤大小和是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（表2）。CK5/6、EGFR和AR的表達(dá)與各免疫組化的關(guān)系表明，CK5/6與ER、PR、Ki67和AR呈負(fù)相關(guān)，與P53呈正相關(guān)；EGFR與ER、PR、Ki67和AR呈負(fù)相關(guān)，與Her-2和P53呈正相關(guān)；而AR與ER和PR呈正相關(guān)，與Her-2和P53呈負(fù)相關(guān)。CK5/6和EGFR的表達(dá)呈正相關(guān)，CK5/6和AR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，EGFR和AR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（表3）。

表2 CK5/6、EGFR和AR的表達(dá)與臨床分期和TNM分期的關(guān)系[n（%）]Tab 2 Relationship between the expression of CK5/6，EGFR，AR and clinical stage，TNM stage[n（%）]

表3 CK5/6、EGFR和AR的表達(dá)與免疫組化指標(biāo)的關(guān)系[n（%）]Tab 3 Relationship between the expression of CK5/6，EGFR，AR and immunohistochemical indexes[n（%）]

2.4 CK5/6、EGFR和AR表達(dá)的多因素回歸分析分子分型中Luminal B型、高組織學(xué)分級(jí)和EGFR的陽(yáng)性表達(dá)是影響CK5/6表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.001）；Luminal B型和P53、CK5/6的陽(yáng)性表達(dá)是影響EGFR表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.001）；ER、PR、Her-2和Ki67的陽(yáng)性表達(dá)是影響AR表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.001），見表4～6。

表4 CK5/6表達(dá)與臨床病理因素的Logistic回歸分析Tab 4 Logistic regression analysis of CK5/6 expression and clinicopathological factors

表5 EGFR表達(dá)與臨床病理因素的Logistic回歸分析Tab 5 Logistic regression analysis of EGFR expression and clinicopathological factors

表6 AR表達(dá)與臨床病理因素的Logistic回歸分析Tab 6 Logistic regression analysis of AR expression and clinicopathological factors

3 討論

乳腺癌作為女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，異質(zhì)性大，死亡率高，治療主要以手術(shù)切除和放化療為主。在乳腺癌的診斷和治療中，免疫組化的各項(xiàng)分子指標(biāo)發(fā)揮著重要作用。因此，進(jìn)一步對(duì)分子指標(biāo)進(jìn)行深入研究對(duì)于乳腺癌的靶向治療和聯(lián)合治療具有指導(dǎo)意義。

CK5/6作為上皮細(xì)胞的增殖分化密切相關(guān)的分子指標(biāo)，具有極高的保守性和組織分化特異性。本研究發(fā)現(xiàn)CK5/6的表達(dá)與分子分型、組織分級(jí)、臨床分期的差異以及是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，與年齡、乳腺癌初發(fā)位置、是否絕經(jīng)、病理分型差異、腫瘤大小和是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。Logistic回歸分析表明，在消除ER、PR、Her-2和AR等分子指標(biāo)的影響后，分子分型中Luminal B型、高組織學(xué)分級(jí)和EGFR的陽(yáng)性表達(dá)是影響CK5/6表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。與陶玉梅等[11]的報(bào)道基本一致。本研究中EGFR陽(yáng)性率低，EGFR的表達(dá)與是否絕經(jīng)、轉(zhuǎn)移及病理分型密切相關(guān)，而與累及淋巴結(jié)數(shù)量無(wú)關(guān)。研究顯示，EGFR的表達(dá)及表達(dá)強(qiáng)度與累及淋巴結(jié)的數(shù)目具有極高的關(guān)聯(lián)性[12]。Luminal B型和P53、CK5/6的陽(yáng)性表達(dá)是影響EGFR表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。CK5/6陽(yáng)性可使EGFR的陽(yáng)性表達(dá)增加3倍。AR與ER、PR具有相同的結(jié)構(gòu)，可作為乳腺癌中潛在的治療靶點(diǎn)，但目前對(duì)于AR的認(rèn)識(shí)遠(yuǎn)不如ER、PR充分[3]。本研究中AR在乳腺癌中呈高表達(dá)，陽(yáng)性率高達(dá)80.5%（810/953），與陳海霞等[13]研究一致，表明AR在乳腺癌中起重要作用。本研究中，AR的表達(dá)與分子分型、組織學(xué)分級(jí)、臨床分期和累及淋巴結(jié)數(shù)量有關(guān)，ER、PR、Her-2和Ki67的陽(yáng)性表達(dá)是影響AR表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。AR表達(dá)水平與預(yù)后的關(guān)系尚存在爭(zhēng)議[14-15]。

分子指標(biāo)間的相關(guān)性已在多項(xiàng)研究中被研究。TNBC可針對(duì)CK5/6和EGFR的陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)一步分為基底細(xì)胞癌和非基底細(xì)胞癌。已有研究發(fā)現(xiàn)CK5/6和EGFR共表達(dá)[11]。任新瑜等[16]發(fā)現(xiàn)兩者聯(lián)合檢測(cè)的敏感性和特異性達(dá)98.7%和100%。有研究認(rèn)為CK5/6可以替代EGFR，作為TNBC的獨(dú)立預(yù)后因素[8]。研究表明，低AR表達(dá)與高臨床分期和低核分級(jí)相關(guān)，而CK5/6的高表達(dá)預(yù)后差，CK5/6、AR和P53聯(lián)合可作為TNBC患者輔助化療的潛在預(yù)后標(biāo)志物[17]。有研究發(fā)現(xiàn)，AR表達(dá)與EGFR表達(dá)存在相關(guān)性，在AR陽(yáng)性的TNBC中觀察到磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）激活增加，表明AR可能是通過EGFR和PI3K/Akt信號(hào)通路在TNBC癌變中起作用[18]。

總之，乳腺癌中分子標(biāo)志物已引起廣泛關(guān)注，但目前對(duì)這些分子標(biāo)志物的了解還不夠充分。分子標(biāo)志物之間存在的相關(guān)性提示應(yīng)進(jìn)一步探究分子標(biāo)志物相互關(guān)聯(lián)的內(nèi)在機(jī)制；臨床可以選擇更為經(jīng)濟(jì)有效的檢查方式，減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)或多種分子標(biāo)志物共同檢測(cè)，提高乳腺癌診斷的準(zhǔn)確性，精準(zhǔn)治療，為腫瘤治療提供新的思路和方法。