尖銳濕疣人乳頭瘤病毒感染與妊娠結(jié)局關(guān)系及外周血Th1/Th2細(xì)胞因子變化

王海霞 曾 霞 王 娟

1.四川省自貢市第一人民醫(yī)院(643000)；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院無錫分院

尖銳濕疣是因人乳頭瘤病毒(HPV)感染引起的病變，具有治療時(shí)間長、易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，嚴(yán)重影響患者生殖健康[1]。研究表明[2]，HPV基因分型多樣化，致病能力分為低危型和高危型，可通過垂直傳播感染胎兒，但關(guān)于HPV感染亞型與妊娠結(jié)局的關(guān)系尚未明確。既往研究顯示[3]，HPV可通過多種機(jī)制免除免疫監(jiān)視，使機(jī)體無法發(fā)揮免疫應(yīng)答反應(yīng)，其中以Th1、Th2為代表的細(xì)胞免疫失衡是HPV逃逸重要機(jī)制。雖有研究顯示妊娠會(huì)削弱尖銳濕疣HPV感染患者Th1型反應(yīng)，加重病情，但對(duì)妊娠結(jié)局無明顯影響[4]。而關(guān)于尖銳濕疣HPV感染亞型對(duì)Th1/Th2細(xì)胞因子的變化影響機(jī)制尚未明確。本文分析HPV感染亞型與妊娠結(jié)局的可能關(guān)系以及Th1/Th2細(xì)胞因子的變化。

1 資料和方法

1.1 資料

回顧性分析2010年2月—2020年10月本院收治的妊娠期合并尖銳濕疣HPV感染孕婦122例(HPV組)、健康產(chǎn)婦121例(對(duì)照組)臨床資料，符合《赫爾辛基宣言》的倫理審查。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合尖銳濕疣臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入院前1個(gè)月有激素類藥物用藥史；②合并惡性腫瘤或急慢性傳染病。

1.2 檢測方法

1.2.1試劑和儀器美國ABI公司生產(chǎn)的PCR擴(kuò)增儀(9700型號(hào))；上海羅氏有限公司提供HPV DNA試劑盒和多功能流式電針儀(Luminex200型號(hào))；深圳亞能生物科技公司提供HPV核酸分型檢測試劑盒，可檢測17種高危亞型(HPV82、68、66、59、58、56、53、52、51、45、39、35、33、31、26、18、16)、10種低危亞型(HPV83、81、61、55、44、43、42、40、11、6)、混合型(HPV6+11、18+11)。

1.2.2樣本采集充分暴露孕婦宮頸，常規(guī)取材后放入離心、封閉。胎兒娩出后，立即取新生兒生殖器和口咽部分泌物，放于離心管內(nèi)保存，均在24h內(nèi)檢測完畢：①提取PCR反應(yīng)模板：離心棄上清，加入核酸50μl，混勻提取液，溫育10min，再次離心處理，加入上清液5μl作為HPV DNA模板。②PCR擴(kuò)增：Taq酶0.8μl、引物5μl、擴(kuò)增反應(yīng)液10μl、PCR反應(yīng)模板5μl，反應(yīng)條件95℃預(yù)變形5min，再反應(yīng)15s(95℃)，反應(yīng)30s(60℃)，72℃延伸3min，循環(huán)30個(gè)；③核酸雜交：選取3μl擴(kuò)增產(chǎn)物，加入22μl微球雜交液，溫育10min(85℃)，保溫30min(40℃)；④熒光素標(biāo)記：加入鏈霉親和素75μl，保溫15min；⑤分析結(jié)果：使用多功能流式點(diǎn)陣儀檢測，配套軟件分析。陽性質(zhì)控成功標(biāo)識(shí)，對(duì)照珠蛋白信號(hào)超過500；陰性質(zhì)控，低于背景信號(hào)值；亞型陽性：HPV亞型>2.5倍背景信號(hào)值，且探針信號(hào)>150，其中有≥2種型感染為多型感染。

1.2.3Th1/Th2細(xì)胞因子檢測取靜脈血，制備處理血樣(采用磷酸鹽緩沖液及淋巴細(xì)胞分離液)，Th2、Th1細(xì)胞分別為CD4+IL-4+抗體、CD4+IFN-γ+抗體，采用美國BD公司提供的FACSC ALIUR流式細(xì)胞儀檢測Th2、Th1所占比，檢測結(jié)果由CELL QUESR軟件得出。

1.3 觀察指標(biāo)

①分析孕婦、新生兒HPV感染分型；②對(duì)比兩組孕婦及不同HPV感染分型者分娩方式和妊娠結(jié)局(呼吸窘迫、胎兒生長受限、早產(chǎn)、胎膜早破、產(chǎn)后出血率)；③對(duì)比兩組孕婦、不同HPV感染分型孕婦Th1/Th2細(xì)胞因子。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 一般情況

HPV組年齡(26.7±2.7)歲(22～32歲)，孕次(2.5±0.4)次(1～4次)，產(chǎn)次(1.2±0.1)次(0～2次)。對(duì)照組年齡(26.7±2.4)歲(21～33歲)，孕次(2.4±0.3)次(1～4次)，產(chǎn)次(1.3±0.1)次(0～2次)。兩組孕婦一般資料無差異(P>0.05)。

2.2 孕婦HPV分型

HPV組122例，孕晚期(孕29～34周)檢測HPV陽性19例(15.6%)，孕中期(孕14～28周)檢測HPV陽性71例(58.2%)，孕早期(孕<14周)檢測HPV陽性32例(26.2%)。孕35～40周復(fù)查時(shí)，122例均顯示陽性，共10種基因分型，混合型2種，HPV基因感染率9.8%(12/122)；低危型2種，HPV基因感染率13.1%(16/122)；低危型6種，HPV基因感染率77.1%(94/122)。見表1。

表1 HPV組孕婦HPV感染分型

2.3 新生兒HPV分型

HPV組122例孕婦分娩的新生兒，出現(xiàn)高危型HPV感染37例(30.3%)，低危型6例(4.9%)，混合型4例(3.3%)。見表2。

表2 分析兩組新生兒HPV感染分型

2.4 孕婦妊娠結(jié)局

HPV組剖宮產(chǎn)率高于對(duì)照組，早產(chǎn)、胎膜早破、呼吸窘迫、胎兒生長受限、產(chǎn)后出血率低于對(duì)照組(均P<0.05)。見表3。

表3 兩組孕婦妊娠結(jié)局比較[例(%)]

2.5 不同HPV感染分型孕婦妊娠結(jié)局

不同HPV感染分型孕婦的分娩方式、母嬰結(jié)局均未見差異(P>0.05)。見表4。

表4 HPV組不同HPV感染分型孕婦妊娠結(jié)局比較[例(%)]

2.6 兩組Th1/Th2細(xì)胞因子

HPV組血清Th1、Th1/Th2水平低于對(duì)照組，Th2高于對(duì)照組(P<0.05)，但不同HPV感染分型孕婦血清Th1/Th2細(xì)胞因子水平無差異(P>0.05)。見表5。

表5 不同感染HPV孕婦血清細(xì)胞因子比較

2.7 HPV感染與細(xì)胞因子相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman法分析，HPV感染率與Th1、Th1/Th2呈負(fù)相關(guān)性，與Th2呈正相關(guān)性(P<0.05)；HPV感染分型與Th1、Th2、Th1/Th2不存在相關(guān)性。見表6。

表6 HPV感染與Th1/Th2細(xì)胞因子相關(guān)性分析

3 討論

HPV根據(jù)致癌危險(xiǎn)性和致病力強(qiáng)度分為高危型、低危型[6]。HPV感染主要通過母嬰及間接、直接接觸傳播，雖大部分患者在感染HPV后會(huì)在短期消失，但妊娠期女性可因?yàn)闄C(jī)體免疫功能降低，體內(nèi)血供豐富、性激素水平較高，更易發(fā)生HPV感染。

分析本次結(jié)果，尖銳濕疣HPV感染孕婦主要以高危型16、18、58、52型感染及11、6型低危型為主，與楊洪學(xué)者[7]研究結(jié)果大致相似，說明高危型HPV更易引起女性持續(xù)性感染。但張宏偉[8]研究中孕婦HPV感染主要以低危型為主，與本次結(jié)果存在差異，可能與選取病例局限性有關(guān)，本研究收集為妊娠期合并尖銳濕疣HPV感染孕婦。本文比較孕婦和新生兒HPV感染分型時(shí)存在差異，新生兒感染高危型以16、35、39型為主，低危型以6、42型為主，有20例與孕婦感染亞型一致(42.6%)，27例不一致?？梢姴糠中律鷥嚎山?jīng)產(chǎn)道接觸、胎盤、羊水等途徑引發(fā)感染，而另一部分新生兒屬隱性感染，提示孕婦感染HPV易對(duì)新生兒形成隱性垂直感染；不同亞型HPV感染孕婦其不良妊娠結(jié)局未見差異。但仍建議HPV陽性孕婦行治療并觀察，盡可能減少妊娠不良結(jié)局，保證新生兒健康[9-10]。有研究表明[11]，HPV感染不僅可誘發(fā)宮頸癌、癌前病變、生殖器尖銳濕疣等疾病發(fā)生，還可導(dǎo)致新生兒喉乳頭狀瘤疾病發(fā)生。目前針對(duì)HPV感染是否影響妊娠結(jié)局仍處于爭論階段。本次結(jié)果顯示，HPV組陰道分娩率低于對(duì)照組，妊娠結(jié)局不良率高于對(duì)照組，說明尖銳濕疣HPV感染可在一定程度上影響妊娠結(jié)局。推測原因：一方面女性感染HPV后，各種相關(guān)蛋白酶極易出現(xiàn)釋放失衡，致使細(xì)胞外基質(zhì)降解，破壞宮頸完整性，從而導(dǎo)致胎兒生長受限、胎膜早破等不良結(jié)局；另一方面生殖道感染，可增加內(nèi)源性前列腺素合成，從而誘發(fā)胎膜早破、子宮收縮。因此做好孕前HPV篩查、積極干預(yù)，有利于優(yōu)生優(yōu)育[12-13]。李娟[14]學(xué)者佐證了本次研究結(jié)果，提出及時(shí)治療干預(yù)，可減輕對(duì)妊娠結(jié)局的影響。此外，本次分析不同HPV亞型對(duì)妊娠結(jié)局影響時(shí)未見到差異，說明HPV不同亞型對(duì)妊娠結(jié)局沒有造成直接影響。

有學(xué)者發(fā)現(xiàn)[15]，免疫失衡是HPV持續(xù)感染、免疫逃逸的關(guān)鍵途徑之一，當(dāng)HPV感染患者出現(xiàn)免疫反應(yīng)改變后， Th1型免疫反應(yīng)向Th2型轉(zhuǎn)變，目前已有研究證實(shí)高危型HPV可致使宮頸癌中Th1/Th2細(xì)胞因子改變，但較少研究對(duì)尖銳濕疣的影響。本次分析結(jié)果，相較于對(duì)照組，HPV組Th2水平更高，Th1、Th1/Th2水平更低，說明患有尖銳濕疣合并HPV感染孕婦更易出現(xiàn)Th1/Th2細(xì)胞因子變化。Th1型免疫應(yīng)答主要在控制腫瘤階段發(fā)揮作用，可抑制血管生成，激活細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞；Th2型免疫反應(yīng)揭示了在尖銳濕疣影響下，出現(xiàn)免疫抑制，需通過增強(qiáng)自發(fā)誘變或支持新疣體生長促進(jìn)尖銳濕疣不良進(jìn)展[16-17]。分析不同HPV感染亞型對(duì)Th1/Th2細(xì)胞因子影響時(shí)未見差異，說明HPV不同分型對(duì)Th1/Th2細(xì)胞因子影響不大，關(guān)于相關(guān)因子作為免疫靶向治療潛力還有待探索。

綜上所述，妊娠期合并尖銳濕疣HPV感染孕婦存在明顯Th1/Th2免疫失衡，但與HPV感染亞型無關(guān)，同時(shí)HPV感染也嚴(yán)重影響孕婦妊娠結(jié)局，存在一定相關(guān)性，但與感染亞型無直接相關(guān)性，因此建議女性孕期進(jìn)行HPV檢測，改善妊娠結(jié)局。