邢 月,王寶維*,葛文華,凡文磊,孔 敏,張名愛,王煥森,劉晨龍,汪 超,王巧莉
(1.青島農(nóng)業(yè)大學優(yōu)質(zhì)水禽研究所,國家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系營養(yǎng)與飼料研究室,山東青島 266109;2.重慶市畜牧科學院,重慶 402460,3.青島普興生物科技有限公司,青島 266113)
維生素D是種禽必需的脂溶性維生素之一,具有促進腸道鈣磷吸收作用,進而影響蛋殼形成、骨骼鈣化等。維生素D添加水平對蛋禽生產(chǎn)性能、血清鈣磷水平、蛋殼品質(zhì)等非常重要,過高和過低都會產(chǎn)生不良影響。田曉曉研究表明,添加維生素D可顯著提高鵝血清鈣、脛骨鈣含量、脛骨強度。王寶維等研究表明,添加維生素D組1~4周齡青農(nóng)灰鵝的血清鈣含量較不添加組顯著提高。高英衛(wèi)發(fā)現(xiàn),缺乏維生素D會直接影響蛋雞鈣吸收能力,使產(chǎn)蛋率下降、軟殼和破殼蛋增多??禈返妊芯勘砻?,產(chǎn)蛋后期蛋雞添加維生素D可提高蛋殼強度、蛋殼厚度。前期研究發(fā)現(xiàn),維生素D對種鵝的生產(chǎn)繁殖、生殖激素水平都有顯著影響。本試驗以產(chǎn)蛋期五龍鵝為研究對象,進一步探究不同水平維生素D對種鵝蛋品質(zhì)、血液生化指標及二者相關(guān)性、蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響,以期確定種鵝飼糧中維生素D的適宜添加水平。
1.1 試驗設(shè)計及飼糧 選擇體況相近的34周齡五龍鵝種鵝180只,隨機分為6組(0、100、200、300、400、500 IU/kg組),每組6個重復,每重復1只公鵝和4只母鵝。試驗預試期1周,正試期10周。試驗鵝由青島農(nóng)業(yè)大學優(yōu)質(zhì)水禽研究所育種基地提供,試驗用維生素D(有效成分500 000 IU/g)為浙江博朗藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。試驗用基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1994)家禽營養(yǎng)需要量中推薦的種鵝飼糧營養(yǎng)水平設(shè)計配方。種鵝的飼糧組成和營養(yǎng)成分見表1。
表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分(風干基礎(chǔ))
1.2 飼養(yǎng)管理 試驗種鵝采用開放式地面平養(yǎng),全期自由采食和飲水。試驗前對鵝舍進行充分沖洗和嚴格消毒,試驗期內(nèi)每周消毒2次。
1.3 蛋品質(zhì)測定 試驗結(jié)束前1周每天收集種蛋,各組每重復共收集10枚種蛋,每組60枚,共360枚,用于測定蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼顏色、蛋白高度、蛋黃顏色、蛋殼強度、蛋殼厚度、哈市單位、蛋黃比率等蛋品質(zhì)指標。蛋品質(zhì)指標測定與計算方法按照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》(NY/T823-2004)進行。
1.4 血清生化指標測定 飼養(yǎng)試驗結(jié)束時,各組每重復抽取體重相近的鵝2只,每組12只,共72只,翅靜脈采血10 mL,3 000 r/min離心制得血清樣品,分裝,-40℃冷凍保存。白蛋白和堿性磷酸酶活性含量采用比色法測定,總蛋白含量采用考馬斯亮藍法測定,鈣含量采用甲基百里香酚藍比色法測定,磷含量采用磷鉬酸法測定。以上試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。
1.5 蛋殼超微結(jié)構(gòu)的觀察 蛋品質(zhì)測定后蛋殼保留,用去離子水洗凈,置于陰涼處自然風干。制備蛋殼樣品,采用掃描電子顯微鏡[JEOL 7500F,JEOL(SEM)Oxford(EDS),日本電子株式會社]觀察拍照。
1.6 統(tǒng)計分析 采用SPSS 22.0軟件的單因素方差分析的Duncan′s多重比較和對比方法,分析飼糧不同維生素D添加水平的影響及各項指標間的差異及線性與二次的值。其中,<0.05表示差異顯著,<0.01表示差異極顯著。數(shù)據(jù)以均值和標準誤差表示。采用SPSS 22.0軟件的相關(guān)性分析中的雙變量法,對繁殖性能和血清生殖激素進行相關(guān)性分析,<0.05和<0.01分別為相關(guān)性顯著和極顯著水平。
2.1 維生素D水平對產(chǎn)蛋期種鵝血清生化指標的影響由表2可知,300、400 IU/kg組血清鈣含量高于0 IU/kg組(<0.05),0、500 IU/kg組血清磷含量低于200、300、400 IU/kg組(<0.01);400 IU/kg 維生素D組血清鈣、磷含量均最高。飼糧中添加不同水平維生素D對總蛋白、白蛋白及堿性磷酸酶含量影響不顯著。
表2 維生素D3水平對產(chǎn)蛋期種鵝血清生化指標的影響
2.2 維生素D水平對種蛋品質(zhì)的影響 由表3可知,各組間蛋殼顏色、蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位及蛋黃比率差異不顯著。400、500 IU/kg組蛋重高于0、100 IU/kg組(<0.05);200、300、400 IU/kg組蛋形指數(shù)大于0、100 IU/kg組(<0.01);0 IU/kg組蛋殼強度低于其他各組(<0.01);0、100 IU/kg組蛋殼厚度低 于400和500 IU/kg組(<0.01)、200和300 IU/kg組(<0.05)。
表3 維生素D3水平對種蛋品質(zhì)的影響
2.3 蛋品質(zhì)與血清鈣磷含量相關(guān)性分析 由表4可知,隨飼糧維生素D添加水平的變化,蛋重、蛋殼強度與血清鈣、磷含量顯著正相關(guān),蛋形指數(shù)、蛋殼厚度與血清鈣、磷含量的相關(guān)性不顯著。血清鈣含量與蛋重、蛋殼強度顯著正相關(guān);血清磷含量與蛋殼強度顯著正相關(guān)。
表4 維生素D3水平對產(chǎn)蛋期種鵝蛋品質(zhì)與血清鈣磷含量相關(guān)性的影響
2.4 維生素D水平對種蛋蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響 如圖1可見,蛋殼結(jié)構(gòu)包括4層,由外至內(nèi)分別為表面角質(zhì)層、垂直晶體層、柵欄層及乳突層,內(nèi)部為殼膜包裹的胚胎結(jié)構(gòu)。如表5可知,0 IU/kg組垂直晶體層厚度低于其他各組(<0.01);300、400、500 IU/kg組乳突層厚度大于0和100 IU/kg組(<0.01)、200 IU/kg組(<0.05);400、500 IU/kg組蛋殼總厚度大于0和100 IU/kg組(<0.01)、200和300 IU/kg組(<0.05)。結(jié)果表明,隨飼糧維生素D添加水平增加,種鵝蛋殼的垂直晶體層和乳突層厚度顯著增加,而表面角質(zhì)層和柵欄層雖無顯著性變化,但是蛋殼總厚度增加。
表5 維生素D3水平對產(chǎn)蛋期種鵝蛋殼各層結(jié)構(gòu)厚度的影響
圖1 各組蛋殼斷面超微結(jié)構(gòu)(150×)
3.1 維生素D水平對產(chǎn)蛋期種鵝血液生化指標的影響在血液生化研究方面,王爽研究指出,在維生素D低于3 000 IU/kg時,隨著維生素D水平的增加,生長前期北京鴨的血液鈣含量呈明顯上升趨勢,磷含量逐漸下降,在250 IU/kg 維生素D水平時,堿性磷酸酶含量可以達到最高。解俊美研究表明,隨維生素D添加水平的增加,蛋雛鴨血清總蛋白、白蛋白含量呈先增高后降低的趨勢。田曉曉等研究指出,飼糧添加維生素D可顯著提高血清鈣含量,對磷、堿性磷酸酶含量無顯著影響。結(jié)合本試驗結(jié)果,維生素D水平對血清鈣磷的吸收代謝存在一定影響,可能因環(huán)境、物種及生長發(fā)育等不同,其結(jié)果表現(xiàn)不同。
3.2 維生素D水平對鵝種蛋品質(zhì)的影響 Kakhki等發(fā)現(xiàn),飼糧添加25-羥基維生素D可使不同鈣水平的蛋雞保持蛋殼質(zhì)量穩(wěn)定。張繼良等研究也指出,蛋雞飼糧添加活性維生素D及鋅、錳復合物可顯著提高蛋殼質(zhì)量。劉禹辰等研究表明,產(chǎn)蛋后期的蛋雞補充含有維生素D的液態(tài)維生素,可促進鈣的吸收,破殼率、砂殼蛋、軟殼蛋減少,蛋殼品質(zhì)得到改善??禈返妊芯恐赋?,與未添加維生素D組相比,添加維生素D組蛋殼重、蛋殼厚度和蛋殼強度都有顯著增強。楊濤研究表明,隨著維生素D水平的提高,蛋雞軟殼蛋、破蛋情況得到明顯減弱。王爽等研究指出,產(chǎn)蛋初期蛋鴨飼糧添加維生素D并未對蛋殼質(zhì)量產(chǎn)生影響,這與本研究結(jié)果不相符,可能與試驗期短、機體鈣磷儲備及物種不同有關(guān)。Navickis等研究指出,飼糧中添加適量的維生素D可提高蛋殼鈣含量和蛋殼厚度。劉旭研究指出,當維生素D添加水平為3 600 IU/kg時,烏骨雞蛋哈氏單位和蛋黃比率較高。黨曉鵬等研究指出,隨著尼克粉蛋雞飼糧中維生素D含量增加,蛋殼強度和蛋殼厚度有先增強后降低的趨勢。產(chǎn)蛋期種鵝飼糧中維生素D水平與蛋雞、蛋鴨飼糧維生素D水平是否存在較大差異,是否與采用開放式舍和密閉舍家禽接受陽光程度不同有關(guān),還有待于進一步研究。
3.3 維生素D水平對產(chǎn)蛋期種鵝血清鈣磷含量與種蛋品質(zhì)相關(guān)性的影響 鈣磷是蛋殼的主要組成成分。大量研究證明,機體所攝入、吸收和利用的鈣量對蛋品質(zhì)有重要影響,當鈣含量不足時,蛋殼中鈣沉積量減少,蛋品質(zhì)下降。高喜良研究發(fā)現(xiàn),低鈣飼糧會降低雞蛋品質(zhì)。Navickis等研究發(fā)現(xiàn),飼糧中添加適量維生素D可使蛋殼厚度增加,改善蛋品質(zhì)。黃福標等的研究表明,飼糧適宜鈣水平可改善蛋殼品質(zhì)。本試驗中,蛋品質(zhì)與血清鈣、磷含量呈正相關(guān),與前人研究結(jié)果一致。
3.4 維生素D水平對產(chǎn)蛋期種鵝蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響蛋殼是重要的保護結(jié)構(gòu),也是外界環(huán)境與蛋殼內(nèi)部環(huán)境進行物質(zhì)交流的重要屏障。研究維生素D添加量變化對蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響,對于改善蛋殼品質(zhì)具有重要意義。崔琳等研究表明,柵欄層決定蛋殼質(zhì)量。也有人認為,乳突層是鈣化開始部位,能夠直接影響其他各層的形成,對蛋殼質(zhì)量有決定意義。王佩倫研究表明,高強度雞蛋殼中乳突層中乳突顆粒排列規(guī)則、連接緊密,乳突層對于形成蛋殼和蛋殼延展性等有重要作用。本試驗結(jié)果表明,隨飼糧維生素D添加水平的變化,產(chǎn)蛋期種鵝蛋殼掃描電鏡下各層超微結(jié)構(gòu)均有增厚,其中乳突層厚度變化最為顯著。
3.5 產(chǎn)蛋期種鵝飼糧中維生素D的適宜添加量 本試驗條件下,血清鈣磷含量及蛋殼強度、蛋殼厚度存在顯著的二次關(guān)系,為對維生素D添加量進行更加準確地探究,對其做二次曲線擬合。
對0~500 IU/kg組鈣含量、磷含量、蛋殼強度、蛋殼厚度(Y)分別與維生素D添加水平(X)進行二次曲線擬合,建立回歸方程:
(鈣含量)=4.307+0.018-3.518E(=0.811,<0.001)
(磷含量)=7.778+0.018-2.397E(=0.914,<0.001)
(蛋殼強度)=4.745+0.003-3.700E(=0.696,<0.001)
(蛋殼厚度)=0.461+0.000362-4.299E(=0.906,<0.001)
由二次擬合曲線可得,維生素D添加水平在357.43 IU/kg時,血清鈣含量可取得最大值;添加水平為375.47 IU/kg時,血清磷含量可取得最大值;維生素D添加水平在405.405 IU/kg時,蛋殼強度可取得最大值,但此時<0.700,曲線擬合度低,故舍去;維生素D添加水平為421.03 IU/kg時,蛋殼厚度可取得最大值。綜上,維生素D添加量為350~450 IU/kg時,種鵝可獲得較好的蛋品質(zhì)。
本試驗結(jié)果表明,適宜維生素D水平可提高產(chǎn)蛋期種鵝血清鈣、磷含量;蛋殼強度和蛋殼厚度隨著維生素D添加量升高有增加趨勢;血清鈣磷含量與蛋重和蛋殼強度呈正相關(guān);維生素D對種鵝蛋殼結(jié)構(gòu)中的乳突層的影響最為顯著,進而影響蛋殼質(zhì)量。在開放式種鵝舍飼養(yǎng)條件下,飼糧中維生素D的建議添加水平為350~450 IU/kg。