曲普瑞林對(duì)初產(chǎn)母豬定時(shí)輸精效果的影響

王龍巖，秦玉圣，于 博，白佳樺，許曉玲，洪秦王，宋玉清，劉 彥，李俊杰

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定 071000；2.北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100097；3.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，北京 102206；4.河北省種豬繁育技術(shù)創(chuàng)新中心，河北張家口 075800）

規(guī)?；i場(chǎng)中初產(chǎn)母豬占比達(dá)20%以上，其利用率和繁殖性能決定著整個(gè)豬群的生產(chǎn)能力。但初產(chǎn)母豬在哺乳期間因泌乳導(dǎo)致蛋白質(zhì)和能量負(fù)平衡，會(huì)引起體重和背膘急劇降低、生殖激素分泌紊亂、斷奶-發(fā)情間隔延長(zhǎng)、發(fā)情持續(xù)期縮短、排卵數(shù)量減少、胚胎存活率降低等一系列影響繁殖性能的問(wèn)題。此外，也有高達(dá)60%的初產(chǎn)母豬在斷奶后不能自然發(fā)情，降低了母豬利用率，增加生產(chǎn)成本。定時(shí)輸精技術(shù)利用外源生殖激素對(duì)母豬發(fā)情、排卵進(jìn)行調(diào)控，并在預(yù)定時(shí)間配種，該技術(shù)不僅能提高母豬利用率和繁殖性能，而且能使豬場(chǎng)實(shí)現(xiàn)全進(jìn)全出的批次化生產(chǎn)，有助于豬群的生物安全防控。目前，國(guó)內(nèi)母豬定時(shí)輸精程序中誘導(dǎo)同步排卵激素為戈那瑞林（Gonadotropin-Releasing Hormone，GnRH）。與GnRH相比，GnRH類似物具有穩(wěn)定性強(qiáng)、半衰期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，國(guó)外研究人員在誘導(dǎo)母豬同步排卵方面已采用曲普瑞林、布舍瑞林和戈舍瑞林等GnRH類似物做了一些研究，證實(shí)母豬配種前6～10 h使用曲普瑞林可有效刺激促黃體素（Luteotropic Hormone，LH）濃度升高，提高母豬排卵集中度；Knox等研究表明，注射200 μg曲普瑞林可使經(jīng)產(chǎn)母豬24 h內(nèi)排卵率達(dá)88%；Knox等將曲普瑞林制成陰道凝膠（Triptorelin Gel，TG），發(fā)現(xiàn)凝膠濃度為1.2%時(shí)，誘導(dǎo)排卵集中度效果最好，LH峰值更高，并且對(duì)母豬繁殖性能無(wú)不良影響。為提高初產(chǎn)母豬利用率，本研究采用曲普瑞林誘導(dǎo)初產(chǎn)母豬同步排卵并實(shí)施定時(shí)輸精，探究其應(yīng)用效果，為曲普瑞林在生豬生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)在河北省某規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行，隨機(jī)選取81頭健康、產(chǎn)仔性能相近的大白×長(zhǎng)白二元雜交斷奶初產(chǎn)母豬，參與試驗(yàn)的母豬依據(jù)豬場(chǎng)飼喂標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼喂，自由飲水。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 戈那瑞林（寧波三生生物科技有限公司）、孕馬血清促性腺激素（PMSG，寧波三生生物科技有限公司）、曲普瑞林（陜西西安恒宇醫(yī)藥有限公司）、生理鹽水（河北仁厚商貿(mào)有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 母豬哺乳期為21d，斷奶當(dāng)天記為“第0天”，斷奶時(shí)間為16:00。對(duì)照組（n=17頭）：母豬斷奶后，每天08:00、16:00驅(qū)趕性欲良好的公豬進(jìn)行發(fā)情鑒定，如上午發(fā)情，則當(dāng)天下午、第2天上午進(jìn)行深部輸精；如下午發(fā)情，則第2天上午、下午進(jìn)行深部輸精。生理鹽水組（n=18頭）、戈那瑞林組（n=20頭）和曲普瑞林組（n=26頭）母豬分別在斷奶后24 h肌肉注射1 000 IU PMSG，間隔72 h后分別肌肉注射生理鹽水2 mL、戈那瑞林100 μg、曲普瑞林200 μg，間隔24 h和40 h分別進(jìn)行深部輸精。

1.4 輸精配種 所用精液來(lái)自豬場(chǎng)自養(yǎng)杜洛克公豬。輸精前對(duì)精液品質(zhì)進(jìn)行檢查，精子活率≥70%、畸形精子率≤18%方可使用。

1.5 卵泡發(fā)育檢測(cè) 從各組中隨機(jī)選擇3頭母豬，使用B超儀（HS-1600，日本）對(duì)卵泡發(fā)育進(jìn)行監(jiān)測(cè)，其中，斷奶后第1～3天每天09:30用B超監(jiān)測(cè)1次；第4～6天每天09:30、15:30、23:30分別進(jìn)行1次B超監(jiān)測(cè)。

1.6 血液采集與檢測(cè) 從各組中隨機(jī)選擇3頭母豬，分別在斷奶后第4天的15:00、17:30、18:30、19:30、20:30、21:30、22:30，第5天的08:00、17:00，第6天的17:00、第7 天的17:00，采用真空促凝采血管經(jīng)耳緣靜脈采血5 mL，然后在室溫、4 000 r/min離心25 min，吸取血清并分裝至1.5 mL離心管，做好標(biāo)記后于-20℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?。血清雌激素（E）、促黃體素（LH）濃度委托北方生物技術(shù)有限公司采用放射免疫法測(cè)定。

1.7 繁殖性能統(tǒng)計(jì)方法 繁殖指標(biāo)的計(jì)算參照如下公式：

發(fā)情率=發(fā)情母豬頭數(shù)/參繁母豬頭數(shù)×100%

參繁配種率=配種母豬頭數(shù)/參繁母豬頭數(shù)×100%

批次妊娠率=妊娠母豬頭數(shù)/參繁母豬頭數(shù)×100%

批次分娩率=分娩母豬頭數(shù)/參繁母豬頭數(shù)×100%

仔豬指數(shù)=窩產(chǎn)活仔數(shù)×批次妊娠率×100%[16]

1.8 統(tǒng)計(jì)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用 SPSS 22.0 進(jìn)行單因素方差分析，采用 Duncan′s 進(jìn)行多重比較和顯著性分析，結(jié)果使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；發(fā)情率、配種率、妊娠率等指標(biāo)采用卡方檢驗(yàn)，＜0.01表示差異極顯著，＜0.05表示差異顯著，＞0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 曲普瑞林對(duì)斷奶7 d內(nèi)母豬發(fā)情率的影響 由表1可知，曲普瑞林組母豬斷奶7 d內(nèi)發(fā)情率最高，但4組間差異不顯著。

表1 曲普瑞林對(duì)斷奶7 d內(nèi)母豬發(fā)情率的影響 %

2.2 曲普瑞林對(duì)初產(chǎn)母豬卵泡發(fā)育的影響 由圖1可知，斷奶后1～4天各組母豬卵泡直徑隨斷奶后時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，但曲普瑞林組母豬卵泡直徑在第4天達(dá)到最大（8 mm），高于其他3組（＜0.05），隨后開(kāi)始減小，并于第5天低于其他3組（＜0.05）。其他3組母豬卵泡直徑在第5天達(dá)到最大，隨后開(kāi)始減小。

圖1 斷奶母豬卵泡直徑隨時(shí)間的變化

2.3 曲普瑞林對(duì)初產(chǎn)母豬主要生殖激素濃度的影響 由圖2可知，隨著誘導(dǎo)同步排卵藥物處理后的時(shí)間變化，戈那瑞林組和曲普瑞林組母豬血漿中E濃度在注射后2 h分別達(dá)到峰值，濃度為54.77、51.39 ng/mL，隨后逐漸降低。LH濃度逐漸升高，戈那瑞林組和曲普瑞林組峰值分別出現(xiàn)在注射后4 h、5 h，濃度為10.22、10.26 ng/mL，兩組間無(wú)顯著差異。

圖2 激素濃度隨誘導(dǎo)同步排卵處理后時(shí)間的變化

2.4 曲普瑞林對(duì)初產(chǎn)母豬繁殖性能的影響 由表2可知，生理鹽水組、布舍瑞林組、曲普瑞林組母豬的參繁配種率高于對(duì)照組（＜0.01）；曲普瑞林組母豬的批次妊娠率高于對(duì)照組25.79個(gè)百分點(diǎn)（＞0.05）；曲普瑞林組母豬窩產(chǎn)總仔數(shù)高于生理鹽水組（＜0.01），窩產(chǎn)活仔數(shù)為10.13頭，與生理鹽水組相比差異不顯著。曲普瑞林組每100頭母豬提供的活仔數(shù)（仔豬指數(shù)）為857頭，較生理鹽水組提高144頭（＞0.05）。

表2 不同處理組母豬的繁殖性能

3 討 論

初產(chǎn)母豬的利用率和繁殖性能決定整個(gè)豬群生產(chǎn)能力和經(jīng)濟(jì)效益，減少初產(chǎn)母豬綜合癥的發(fā)生對(duì)提高母豬利用率及延長(zhǎng)使用年限至關(guān)重要。研究表明，基于PMSG誘導(dǎo)母豬卵泡發(fā)育同步化、GnRH誘導(dǎo)卵泡排卵同步化的定時(shí)輸精技術(shù)能夠提高母豬斷奶7 d內(nèi)的發(fā)情率、配種率。

在母豬發(fā)情周期中，卵泡期通常持續(xù)5～7 d，卵泡生長(zhǎng)發(fā)育受FSH和LH調(diào)節(jié)。PMSG屬于糖蛋白類激素，同時(shí)具有LH和FSH活性，但以FSH活性為主，對(duì)卵泡發(fā)育具有良好的促進(jìn)作用。研究表明PMSG可使母豬卵泡生長(zhǎng)至3～4 mm，若要進(jìn)一步發(fā)育，則需LH刺激。隨著卵泡的發(fā)育，顆粒細(xì)胞合成分泌E增加，母豬在公豬刺激下表現(xiàn)靜立發(fā)情。本研究中，與其他各組相比，曲普瑞林組母豬卵泡發(fā)育較快，E水平升高，發(fā)情率高于自然發(fā)情母豬。Knox等研究表明母豬斷奶后96 h陰道投藥曲普瑞林100 μg，可提高母豬發(fā)情率。Robert等研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)肌肉注射100 μg曲普瑞林能夠誘導(dǎo)后備母豬出現(xiàn)LH峰。本研究中，曲普瑞林組和戈那瑞林組母豬在促排卵藥物處理后4～5 h有相對(duì)明顯的LH峰，峰值濃度分別為10.26 ng/mL和10.22 ng/mL。Stewart等研究發(fā)現(xiàn)使用曲普瑞林處理母豬5 h后出現(xiàn)LH峰，峰值濃度為3.3 ng/mL，與本研究結(jié)果相比，使用曲普瑞林處理母豬后出現(xiàn)LH峰值時(shí)間接近，但峰值濃度差異較大，可能是國(guó)內(nèi)外檢測(cè)方法及靈敏度不同引起。

影響定時(shí)輸精效果的關(guān)鍵因素之一是GnRH注射時(shí)間，注射過(guò)早雖然可誘導(dǎo)LH峰出現(xiàn)，但此時(shí)卵泡發(fā)育不成熟，會(huì)誘導(dǎo)排卵失??；注射太晚，母豬內(nèi)源性LH峰已經(jīng)出現(xiàn)，則不能發(fā)揮誘導(dǎo)母豬集中同步排卵的作用。大量研究證實(shí)，斷奶后約96 h注射GnRH能夠誘導(dǎo)母豬集中排卵，并經(jīng)定時(shí)輸精后可維持母豬正常繁殖性能。Knox等研究發(fā)現(xiàn)200 μg曲普瑞林TG置于母豬陰道可誘導(dǎo)81%的母豬發(fā)生排卵，且在斷奶后96 h處理效果最好。雖然曲普瑞林凝膠陰道給藥能夠降低肌肉注射給藥對(duì)母豬造成的應(yīng)激刺激，但在規(guī)?；i場(chǎng)批次配種母豬數(shù)量較多時(shí)，TG給藥誘導(dǎo)排卵的方式效率較低，不僅工作量大而且可能引起生殖道感染。本研究在初產(chǎn)母豬斷奶后96 h，頸部肌肉注射200 μg曲普瑞林，母豬發(fā)情率高于自然發(fā)情母豬。本實(shí)驗(yàn)中，曲普瑞林組母豬卵泡直徑在第4天達(dá)到最大，隨后發(fā)生排卵，卵泡直徑減??；戈那瑞林組母豬卵泡直徑則在第5天開(kāi)始減小，表明曲普瑞林組不僅卵泡發(fā)育較快，排卵也較早。在定時(shí)輸精程序中，由于PMSG具有超數(shù)排卵的作用，并且經(jīng)GnRH刺激，成熟卵泡數(shù)量和排卵數(shù)會(huì)增加，因此，曲普瑞林組母豬窩總產(chǎn)仔數(shù)較高，但可能由于子宮空間與營(yíng)養(yǎng)供給限制，最終與對(duì)照組相比產(chǎn)活仔數(shù)差異不顯著。若定時(shí)輸精母豬妊娠后期飼喂N-氨甲酰谷氨酸、精氨酸等能夠提升母豬子宮血流的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可能會(huì)降低母豬死胎數(shù)，從而提升產(chǎn)活仔數(shù)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)每100頭母豬提供的活仔數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，曲普瑞林組仔豬指數(shù)為857頭，比對(duì)照組多255頭。此外，受非洲豬瘟疫情等影響，豬場(chǎng)可繁母豬數(shù)量急劇減少、試驗(yàn)?zāi)肛i成本增加，導(dǎo)致本實(shí)驗(yàn)中各組母豬樣本量較小，經(jīng)過(guò)2次定時(shí)輸精處理，母豬批次妊娠率、分娩率雖然在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異不顯著，但有提高趨勢(shì)。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果顯示，定時(shí)輸精程序中應(yīng)用GnRH類似物曲普瑞林誘導(dǎo)排卵可提高初產(chǎn)母豬批次妊娠率、批次分娩率、窩產(chǎn)總仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)，從而提高初產(chǎn)母豬的利用率。