圈養(yǎng)東北虎細小病毒感染的診斷與治療

孫春玲，王一鳴，齊曉新，李顥哲，馮 磊，王 海，郭晶晶，隋京京，李華濤

(1. 青島森林野生動物世界公園有限公司，山東 青島 266500 ； 2. 青島農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，山東 青島 266109)

東北虎(Pantheratigrisaltaica)是現(xiàn)存世界上最大的貓科動物之一，已被列入世界自然保護聯(lián)盟(Intermation Unionfor Conservation of Nature, IUCN)瀕危物種紅色名錄[1]。東北虎在維持健康自然的生態(tài)系統(tǒng)中占據(jù)不可替代的重要地位，近些年來，環(huán)境資源減少，疫源疾病盛行，使其數(shù)量不斷下降，東北虎的保護性研究顯得尤為重要[2-4]。

貓細小病毒(Feline parvovirus,FPV)又稱貓泛白細胞減少癥病毒、貓傳染性腸炎病毒或貓瘟熱病毒，該病毒引起的傳染病臨床表現(xiàn)多以突發(fā)高熱、頑固性嘔吐、腹瀉、脫水、循環(huán)障礙及白細胞急劇減少為主要特征[5-6]。本病毒除感染家貓外，還能感染其他貓科動物(如虎、豹)、鼬科動物(貂)及浣熊科動物(小浣熊)，其感染范圍廣，致病性強，對野生動物的保護構成極大的威脅[7-8]。

2019年12月，本園出現(xiàn)1例東北虎感染貓細小病毒并急性死亡的病例，隨后，相繼發(fā)現(xiàn)多例東北虎感染貓細小病毒。介紹該病例的臨床表現(xiàn)與診治情況，以及其他東北虎感染貓細小病毒的治愈方法如下，以期為我國圈養(yǎng)東北虎疫病防控與診療提供參考。

1 發(fā)病情況

2019 年12月14日，本園1只9月齡東北虎突然出現(xiàn)精神沉郁、鼻鏡干燥、食欲廢絕、嘔吐、腹瀉等癥狀?；蓟I吐物初期為未消化完全的肉塊，后期為黃綠色黏液；糞便初期為黃色黏液狀，后期呈粉紅色水樣甚至血樣，氣味腥臭?；蓟⒀杆傧荨⒈幻鑱y、四肢末梢冰冷、趴臥不動，于發(fā)病后第4天死亡。2019年12月16日，同館舍6只(30 m2)9～12月齡東北虎相繼發(fā)病，虎群館舍通風良好，日常飼養(yǎng)以雞肉、牛肉為主，活躍度高，未進行免疫接種。患虎發(fā)病后均有食欲廢絕、精神萎靡、嘔吐、腹瀉等癥狀，經(jīng)診斷治療后，患虎大群恢復正常，單只虎從發(fā)病到治愈最長不超過2周。

2 診斷

2.1 臨床檢查 最早發(fā)病的1只患虎高熱不退，體溫高達40 ℃，其余患虎隨治療進程出現(xiàn)反復發(fā)熱現(xiàn)象。患虎出現(xiàn)口腔可視黏膜蒼白，眼窩下陷，皮膚拉起回彈緩慢，腹式呼吸，心臟聽診有心內(nèi)性雜音，肺部濕啰音明顯，腹部觸診有痛感。

2.2 實驗室檢查

2.2.1 血液學檢查 死亡東北虎發(fā)病第3 天進行了血常規(guī)、血生化和血氣的檢測。血常規(guī)檢測采用邁瑞B(yǎng)C-2800檢測，同時人工鏡檢復核。生化采用富士NX500iVC檢測。血氣采用雅培i-STAT1檢測。結果顯示，血常規(guī)檢查中白細胞總數(shù)下降嚴重，淋巴細胞、中性粒細胞有不同程度下降，見表1。血生化檢查中谷丙轉氨酶、總膽紅素升高；肌酐、尿素氮、無機磷升高，見表2。血氣檢查中低鈉、低鉀、低氯，見表3。其余病虎于發(fā)病第2天進行血常規(guī)、血生化檢查，血常規(guī)檢查中白細胞總數(shù)和淋巴細胞下降，血生化檢查中谷丙轉氨酶、總膽紅素升高。

表1 死亡東北虎血常規(guī)指標檢查結果Table 1 Results of blood routine indexes of dead Panthera tigrisaltaica

表2 死亡東北虎血生化指標檢測結果Table 2 Results of blood biochemical indexes of Panthera tigrisaltaica

表3 死亡東北虎血氣指標檢測結果Table 3 Results of blood gas indexes of dead Panthera tigrisaltaica

2.2.2 膠體金快速診斷 使用韓國安捷貓泛白細胞減少癥快速診斷試紙，從直腸采取患病東北虎糞便，加入配套稀釋液中，混勻靜置后吸取上清液加入試紙條加樣孔中1～2滴，10 min后FPV檢測結果顯示，發(fā)病幼虎和病死幼虎均呈陽性。

2.2.3 病原PCR檢測 參考文獻[9]報道的引物序列和反應條件，對病死幼虎剖檢腸內(nèi)容物和發(fā)病幼虎糞便病料進行聚合酶鏈式反應(Polymerase chain reaction,PCR)擴增檢測。結果顯示，使用細小病毒通用引物擴增的t1、t2樣本均在750 bp左右擴增出1條特異條帶，與預期片段大小相符。使用貓細小病毒特異性引物的m2樣本在750 bp左右擴增出1條非常微弱的條帶，與預期片段大小相符。其他引物未擴增出特異條帶。表明死亡幼虎和發(fā)病幼虎的腸道中含F(xiàn)PV核酸，見圖1。對陽性PCR結果測序，序列與GenBank中的FPV序列進行比對分析。結果顯示，該序列與GenBank中登陸的FPVK49VP2堿基序列相似度為99.86%。

圖1 感染幼虎的PCR擴增結果Fig.1 PCR amplification results of infected cubsM：DL-2 000 DNA marker； m：貓細小病毒特異性引物； t：細小病毒通用引物； 1：發(fā)病幼虎糞便； 2：病死幼虎腸內(nèi)容物M:DL-2 000 DNA marker; m:Cat parvovirus specific primers; t:Universal primers for parvovirus; 1:Feces of sick cubs; 2 Intestinal contents of dead cubs

2.2.4 特殊檢查 采用X線檢查方法對患病東北虎仰臥位、側臥位的胸腹部進行檢查，結果顯示，患虎氣道擴張(圖2a)，支氣管叢擴張，肺紋理增粗(圖2b)，肺野透明度降低(圖2c)；心包有少許積液、心臟前緣抬起(圖2d)；胃腸道積氣明顯(圖2e)。

圖2 感染幼虎X線檢查結果Fig.2 X-ray examination results of infected cubsA：胸腔； B：腹腔； a：氣道擴張； b：肺紋理增粗； c：肺野透明度降低； d：心包積液； e：腸道積氣A:Thoracic cavity; B:Enterocoelia; a:Expansion of tracheal tubes; b:Lung texture thickening; c:Decreased opacity of lung field; d:Pericardial effusion;e:Intestinal pneumatosis

3 病理剖檢

3.1 組織器官剖檢 患病東北虎于發(fā)病第4天死亡，死亡后第一時間進行尸體剖檢，結果顯示，該東北虎心包積液，心腔呈擴張狀態(tài)，心肌增厚(圖3a)，切面濕潤，富含血液；肺臟大面積出血淤血、水腫(圖3b)，質地稍變硬，切面濕潤；肝臟腫大，邊緣鈍圓(圖3c)，暗紅色和土黃色相間；胃腸積氣，胃、十二指腸、空腸、回腸、直腸均有不同程度出血(圖3d)；腎臟腫大，被膜緊張，顏色呈土黃色，切開皮質髓質均有散在出血點(圖3e)；脾臟體積增大，邊緣鈍圓，呈黑紅色(圖3f)。

圖3 死亡東北虎組織器官剖檢結果Fig.3 Results of pathological autopsy of dead Panthera tigrisaltaicaA：心臟； B：肺臟； C：肝臟； D：腸道； E：腎臟； F：脾臟； a：心肌增厚； b：出血淤血； c：腫大邊緣鈍圓； d：出血； e：散在出血點； f：體積增大A:Heart; B:Lung; C:Liver; D:Intestine; E:Kidney; F:Spleen; a:Thickening of the heart muscle; b:Bleeding and congestion; c:Margin of enlargement was obtuse and rounded; d:Bleeding; e:Diffuse bleeding; f:Volume increase

3.2 病理組織學檢查 H.E.染色后顯微鏡下觀察組織病理學變化，見心肌炎性細胞浸潤(圖4a)，肌束間隙增大(圖4b)；腎小球萎縮(圖4c)，腎小管結構紊亂，炎性細胞浸潤(圖4d)；脾臟充血淤血(圖4e)；肺臟損傷嚴重，肺泡出血淤血(圖4f)；部分肺泡破裂結構損傷，中性粒細胞大量浸潤(圖4g)；肝臟細胞間隙增寬，部分出現(xiàn)充血淤血(圖4h、4k)；小腸黏膜絨毛結構紊亂，斷裂脫落(圖4m)。

圖4 死亡東北虎病理組織切片結果(40×)Fig.4 Organ tissue section examination of dead Panthera tigrisaltaica(40×)A：心臟； B：腎臟； C：脾臟； D：肺臟； E：肝臟； F：小腸； a、d和g：炎性細胞浸潤； b：肌束間隙增大； c：腎小球萎縮； e、f、h和k：出血淤血； m：腸絨毛脫落A:Heart; B:Kidney; C:Spleen; D:Lung; E:Liver; F:Small intestine; a,d and g:Inflammatory cell infiltration; b:Muscle bundle space was enlarged; c:Glomeruloatrophy; e,f,h and k:Bleeding and congestion; m:Shedding of intestinal villi

4 治療

根據(jù)臨床癥狀、剖檢結果和實驗室診斷確診為群發(fā)性的東北虎貓細小病毒感染。制定綜合治療方案，采取抗病毒，增強機體免疫力，防止繼發(fā)感染，強心補液，調(diào)節(jié)機體水鹽代謝和酸堿平衡，對癥治療嘔吐、腹瀉和出血等胃腸道癥狀。治療處方如下。

皮下注射重組貓干擾素ω，30×104IU/(kg·bw)，1次/d，連用3～5 d；肌內(nèi)注射諾蘭素(主要成分為黃芪甲苷)0.1 mL/(kg·bw)，1次/d，連用5～7 d。肌內(nèi)注射諾威寧(硫酸頭孢喹肟注射液)0.08 mL/(kg·bw)，1次/d；醋酸潑尼松龍，每只虎每日肌內(nèi)注射30 mg，根據(jù)病程長短，適當調(diào)節(jié)用藥天數(shù)。遇到高燒不退，感染嚴重的患虎，聯(lián)合用藥阿米卡星，10 mg/(kg·bw)肌內(nèi)注射。嘔吐腹瀉嚴重的患虎，根據(jù)機體脫水程度，適當進行體液補充，一般補液量為50～80 mL/(kg·bw·d)。5%葡萄糖+三磷酸腺苷二鈉[每只虎20 mg/(kg·bw·d)]+輔酶A(每只虎每日200單位)+肌苷注射液[400 mg/(kg·bw·d)]，補充能量，提高機體細胞代謝能力，輔助治療白細胞減少癥。根據(jù)生化、血氣指標，進行鈉離子、鉀離子、鈣離子、氯離子的補充調(diào)整，促使電解質平衡。若機體發(fā)生代謝性酸中毒，適量輸入碳酸氫鈉進行調(diào)節(jié)?；蓟I吐時，肌內(nèi)注射止吐寧(復方格拉司瓊注射液)，0.1 mL/(kg·bw)，1次/d?；蓟⒏篂a便血時，肌內(nèi)注射酚磺乙胺，每只虎400 mg/(kg·bw)，2次/d，止血；靜脈滴注奧美拉唑鈉，每只虎40 mg/(kg·bw·d)，1次/d，修復胃腸道黏膜；肌內(nèi)注射鈷胺素，每只虎1 mL/(kg·bw·d)，1次/d，預防及治療貧血；灌服蒙脫石散收斂，同時使用布拉迪酵母菌調(diào)整胃腸道菌群。

第1只發(fā)病虎初期高燒，食欲廢絕，漸進性出現(xiàn)嘔吐塊狀物及黃色稀便癥狀，臨床采用肌內(nèi)注射退燒藥和抗生素治療，但治療效果不明顯。發(fā)病第3天對該虎進行血液學檢查、膠體金及PCR診斷，確診為貓細小病毒感染，于發(fā)病第4天救治無效死亡。與此同時，同館舍多只東北虎發(fā)病，第一時間對其余虎進行臨床及實驗室檢查，確診為貓細小病毒感染后，以抗病毒，增強免疫，抗菌，防止繼發(fā)感染為主，配合對癥治療，加強護理，最終其余患虎嘔吐、腹瀉等臨床癥狀消失，飲食欲恢復，精神逐漸活躍，全部治愈。

5 護理

在治療過程中，除了實時監(jiān)測患虎體征及合理用藥外，還應加強日常護理。首先，增加至每日2次消毒滅菌，幼虎舍用戊二醛噴灑地面及墻壁，配合火焰消毒滅菌。本次疾病發(fā)生在冬季，采用浴霸燈增加館舍溫度，鋪木板、被褥用于隔離患虎與地面，綜合提升保溫措施。患虎食欲恢復前期，肉需剁碎混合雞蛋飼喂，少食多餐，盡量減小其胃腸負擔。

6 討論

近些年，引起東北虎發(fā)病死亡的病毒性傳染病逐年增多，其中，細小病毒作為引起東北虎發(fā)病死亡的重要病毒，已經(jīng)嚴重威脅到東北虎這一瀕危物種。FPV是細小病毒屬中感染范圍最廣、致病性最強的一種病毒，由此病毒引起的貓泛白細胞減少癥是一種急性、高度接觸性傳染病。邱薇等先后從虎體內(nèi)分離獲得多個FPV毒株[10]。靳小霞等收集2009—2011年共151只未經(jīng)免疫FPV疫苗的虎進行FPV抗體檢測，發(fā)現(xiàn)陽性率高達47.7%[11]，表明FPV在我國虎群中感染十分普遍。2005年9月—2006年3月，國內(nèi)某虎林園大型圈養(yǎng)貓科動物首次暴發(fā)貓泛白細胞減少癥，并導致部分東北虎的死亡，隨后2年的相同季節(jié)里仍有此病發(fā)生，且感染虎的年齡越來越小，甚至己經(jīng)從4日齡的幼虎體內(nèi)分離出該病毒。因此，加大細小病毒引發(fā)的疫病防治的研究對東北虎繁育保護工作變得尤為重要。針對東北虎FPV的防治措施，主要觀點還是圍繞疫苗免疫保護方面。王海軍等對2013—2014年在哈爾濱、長春及沈陽3家東北虎飼養(yǎng)繁育中心已經(jīng)免疫的東北虎進行FPV血清學調(diào)查，F(xiàn)PV抗體檢測陽性率均為100%，說明疫苗免疫效果較好[12]，但對已感染FPV發(fā)病的虎診斷與治療方法鮮有報道。

通過貓瘟臨床癥狀的初步診斷，進行了抗感染及對癥治療。第1只患虎治療無效死亡。經(jīng)過分析，幼虎死亡疑似虎源性FPV繼發(fā)感染控制不良引起菌血癥，加之其長時間未進食自限性消耗，最終引起多器官綜合衰竭死亡。值得注意的是，本園后發(fā)的病例經(jīng)過綜合治療均完全康復，由此可見，貓科動物感染細小病毒后，快速及時診斷對后期治療有很重要的作用，能極大提高治愈率。貓瘟膠體金試紙卡是目前最快的檢測方法，其靈敏度較高，容易出現(xiàn)假陽性，而PCR技術主要是針對病毒核酸進行檢測，準確性和靈敏度都很高，有條件自檢的建議通過自檢確診，需要送檢測機構檢測的可以在治療的同時送檢確診。

值得注意的是，脫水作為貓瘟感染的主要癥狀之一，在治療過程中要不斷進行補液，以平衡和預防酸堿中毒。要及時使用抗生素，預防由于患虎抵抗力低下引起的繼發(fā)感染，防止出現(xiàn)菌血癥等嚴重后果。由于病毒入侵患虎消化系統(tǒng)及治療期間應用的大劑量抗生素，導致患虎胃腸道有益菌群紊亂，需要服用調(diào)節(jié)腸道有益菌群的藥品，并與抗生素間隔0.5 h以上分開服用。另外，干擾素ω能誘導細胞產(chǎn)生多種抗病毒蛋白，從而抑制病毒在體內(nèi)復制[13]。黃芪甲苷能誘導機體產(chǎn)生干擾素，增強機體免疫機能，促進抗體形成，增強抗病能力[14]。

貓細小病毒感染作為一種危害嚴重的傳染病，更需要飼養(yǎng)者做好防治措施。應加強飼養(yǎng)管理，平時做好預防性消毒工作，貫徹自繁自養(yǎng)。要擬定和定期執(zhí)行預防接種和補種計劃，并進行定期殺蟲、滅鼠和糞便無害化處理。飼養(yǎng)管理過程中仔細觀察幼虎的狀況，發(fā)現(xiàn)異常盡快為其測量體溫，及早發(fā)現(xiàn)以有利于治療和恢復，并可以進行及時的隔離和消毒。