動物疫病監(jiān)測采樣中出現(xiàn)的問題與采樣要求

丁媛媛/江蘇省昆山市動物衛(wèi)生監(jiān)督所 215300

楊建生/江蘇省昆山市畜牧獸醫(yī)站 215300

動物疫病防控工作直接關(guān)系到畜牧業(yè)的健康發(fā)展，而采樣工作直接影響動物疫病的監(jiān)測結(jié)果，監(jiān)測結(jié)果對動物疫病防控工作、重大動物疫病防控決策以及防控措施的制定有重要的指導(dǎo)意義，有著舉足輕重的地位。

基層動物疫病監(jiān)測采樣存在許多問題，例如采樣不規(guī)范、采樣流程沒有無菌操作、采樣部位不合適、樣品保存與運(yùn)輸不恰當(dāng)?shù)纫幌盗袉栴}直接影響監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性。雖然各地獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測能力不斷提升，但在復(fù)雜的動物疫病形勢下，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性是現(xiàn)階段的首要目標(biāo)。

1 常見的采樣問題

1.1 樣品溶血現(xiàn)象樣品溶血現(xiàn)象很普遍，采血工作大多由村級防疫員完成，由于各種原因，溶血現(xiàn)象或多或少均存在，但如果大部分血樣均溶血，導(dǎo)致樣品質(zhì)量不合格。產(chǎn)生溶血現(xiàn)象的原因主要有以下幾個方面，一是抽血速度過快，血液快速通過采血針頭時容易導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂；二是在冬天采血時，圈舍與室外溫差大，采血后立即將血液放置在室外，快速冷卻也容易造成紅細(xì)胞破裂；三是在血樣受到劇裂震蕩導(dǎo)致溶血；四是注射器或采血器已被污染。五是采血操作不當(dāng)，反復(fù)穿刺導(dǎo)致血腫，收集到的血液為血腫部分的血液。六是血液的保存和運(yùn)輸不合理，全血樣品儲存溫度過高或過低均會導(dǎo)致溶血。

1.2 樣品被污染樣品被污染的情況通常是由于未進(jìn)行無菌操作導(dǎo)致的，在進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定或病毒分離鑒定時，如果樣品被污染可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。而對于免疫抗體的檢測影響不大。

1.3 組織病料不新鮮在動物疫病診斷時常常遇到畜禽死亡很久后才采集組織病料的情況，這樣的組織病料對于細(xì)菌分離鑒定和病理切片是沒有價值的，例如畜禽死亡后一段時間，腸道細(xì)菌或某一器官感染的細(xì)菌會擴(kuò)散至全身，因此分離到的細(xì)菌不一定是導(dǎo)致死亡的病原菌，不新鮮的組織病料做細(xì)菌分離會干擾診斷。

1.4 樣品類型或采樣部位不正確根據(jù)各種病原菌及病毒對組織嗜性的不同，以及發(fā)病的臨床經(jīng)過和畜禽的特點(diǎn)，不同的疾病診斷時，采用的樣品類型是不同的，例如在進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測時，通常采用血清樣品；在進(jìn)行健康活禽高致病性禽流感監(jiān)測時，采取的是氣管-泄殖腔雙棉拭子。再如牛口蹄疫病原學(xué)的監(jiān)測時，如果有臨床癥狀，出現(xiàn)水泡，可以采水泡液或水泡皮，如果是健康牛群，可以采集O-P 液。如果樣品類型或采樣部位不正確，直接影響檢測的結(jié)果。

1.5 樣品數(shù)量過少或單個樣品量不足樣品數(shù)量過少或單個樣品量不足是常見的問題，在進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測或疫病診斷時，采集的畜禽樣品數(shù)量應(yīng)達(dá)到一定比例，例如存欄的10%以上，有的疾病篩查甚至要求達(dá)到100%，如果樣品數(shù)量過少，監(jiān)測結(jié)果只能代表少數(shù)，不能代表整個群體。另一個方面是單個樣品量不足，在進(jìn)行疫病監(jiān)測時，一份血樣通常需要做多個疫病的檢測，例如一份雞的血清樣品，可能需要同時開展高致病性禽流感H5 亞型、H7 亞型及新城疫免疫抗體的檢測，如果血清過少，將不能完成所有檢測。

1.6 樣品不真實(shí)在基層動物防疫工作中，在進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測時常發(fā)現(xiàn)，某動物群體的免疫抗體要么全部合格，要么全部不合格，病原學(xué)檢測時發(fā)現(xiàn)某動物群體要么全部是陰性，要么全部陽性。通過調(diào)查、重新檢測及核實(shí)后，發(fā)現(xiàn)原因是村防疫員在采樣時將1 個動物的血樣分為幾份甚至幾十份。這種樣品不真實(shí)的情況時有發(fā)生。

1.7 采樣記錄不完整采樣記錄很重要，詳細(xì)的記錄有利于問題追溯和流行病學(xué)調(diào)查。但基層防疫員在采樣后往往未填寫詳細(xì)的采樣記錄。

2 常用樣品的采樣要求

2.1 免疫抗體檢測樣品通常采用血清樣品進(jìn)行免疫抗體檢測。血清樣品的采集比較簡單，采集畜禽全血，不需要添加任何抗凝劑，靜置凝固后析出的即為血清，可使用離心機(jī)進(jìn)行分離。血清樣品的采樣要求為不溶血、無污染、血清量足夠，血清可放置于4℃短時間冷藏或-20℃長期冷凍保存。并做好采樣記錄，將采樣登記表隨樣品保存及運(yùn)輸。

2.2 病原學(xué)檢測樣品病原學(xué)檢測樣品類型較多，其采樣要求及技術(shù)較為復(fù)雜。樣品采集要求無污染、采樣部位及樣品類型合理。例如禽咽喉-泄殖腔雙棉拭子，通常用于檢測健康活禽的高致病性禽流感，采樣時需要將一根滅菌的棉拭子伸入氣管，輕柔旋轉(zhuǎn)擦拭，另一根棉拭子插入泄殖腔（深約2～5 cm）輕柔旋轉(zhuǎn)以粘取糞便及黏膜組織。將兩支棉拭子放入同一離心管中，離心管中可提前放入含抗生素的緩沖液。再如牛羊O-P 液的采集，主要用于口蹄疫的檢測，采樣要求無污染，根據(jù)家畜的大小選擇合適的探杯，在采樣前對探杯進(jìn)行消毒后再用溫水進(jìn)行清洗，每采一頭家畜后均需要重復(fù)消毒和清洗步驟，取出6mL 左右O-P 液放入含有緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)液的的離心管中冷藏運(yùn)輸。

表1 常見病原學(xué)檢測采樣

3 結(jié)語

采樣是開展實(shí)驗(yàn)室檢測，了解畜禽免疫情況及疫病形勢的重要基礎(chǔ)，應(yīng)確保樣品的真實(shí)性、可行性及代表性。采樣的數(shù)量還應(yīng)滿足生物統(tǒng)計(jì)的意義。根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康暮筒煌膭游镆卟?，所采的樣品類型有所差異，采集的樣品?yīng)具有代表性和可行性，同時還要避免污染，例如在采集組織樣品時，應(yīng)先取心肝肺等實(shí)質(zhì)器官，再取消化道組織可避免交叉污染。而在采集牛、羊O-P 液時應(yīng)提前對家畜采取禁食5h。另外還應(yīng)根據(jù)血量的需求選擇合適的采血方法。在基層常常出現(xiàn)養(yǎng)殖場、養(yǎng)殖戶不配合采樣工作導(dǎo)致采樣難的情況，開展動物防疫的工作人員應(yīng)積極向養(yǎng)殖場、養(yǎng)殖戶宣傳動物疫病監(jiān)測的重要性，必要時運(yùn)用法律手段采取強(qiáng)制措施。

在完成采樣的技術(shù)操作外，采樣記錄也是采樣工作中尤為重要的一項(xiàng)，這是追溯樣品來源，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查的重要依據(jù)。采樣記錄應(yīng)含有相關(guān)的完整信息，盡量詳細(xì)，例如養(yǎng)殖名稱、地址、畜禽種類、免疫情況、聯(lián)系人及聯(lián)系方式，采樣的編號和名稱等，有畜禽死亡的還應(yīng)記錄臨床癥狀、用藥情況、飼養(yǎng)情況、發(fā)病及死亡情況。采集的樣品應(yīng)按照要求保存和運(yùn)輸，及時送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。

在進(jìn)行人獸共患病的監(jiān)測采樣時應(yīng)注意做好個人的生物安全防護(hù)，例如穿好防護(hù)服、手套、鞋套及口罩等。