牛瘟病毒的診斷

姚雪軍/廣東省梅州市平遠(yuǎn)縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 514600

范育美/廣東省梅州市平遠(yuǎn)縣中行鎮(zhèn)人民政府 514600

牛瘟病毒是最早記錄的家畜病原，據(jù)記載很可能早在4 世紀(jì)起源于亞洲。在18～19 世紀(jì)，歐洲流行毀滅性的牛瘟。在19 世紀(jì)末期（1887～1897年），撒哈拉沙漠以南的非洲發(fā)生了牛瘟大流行，造成大量牛群和特定野生動物的死亡。1920 年牛瘟在歐洲暴發(fā)促 成 了OIE（Office International des epizootied）的成立。現(xiàn)在OIE 是動物傳染性疾病的機構(gòu)，負(fù)責(zé)全球動物疾病的監(jiān)管，促進以科學(xué)為基礎(chǔ)的國際貿(mào)易。1992 年 Drs gordon scott 和 Alain Provost 這樣描述牛瘟，“最可怕的牛瘟是一個臭名昭著的傳染病，它改變了歷史的進程。從他的家鄉(xiāng)里海盆地，一個世紀(jì)接一個世紀(jì)，牛瘟席卷了整個歐洲和亞洲，由此造成的災(zāi)難、死亡和毀滅比羅馬帝國衰落，查理曼大帝征服歐洲，法國大革命，俄羅斯的貧困，非洲殖民地等更嚴(yán)重?！边@很好地總結(jié)了牛瘟的歷史影響。

1902 年，牛瘟病毒是第一個發(fā)現(xiàn)的濾過性病毒。進化分析表明牛瘟病毒是原型麻疹病毒，推測麻疹病毒是早在5000～10000 年前引起犬瘟熱和人類麻疹的病毒。截至2008 年，才樂觀地認(rèn)為在世界范圍內(nèi)從家畜中消滅了牛瘟。這是全球努力協(xié)調(diào)合作的結(jié)果，涉及積極監(jiān)測、動物撲殺、限制運輸和強制疫苗接種計劃。

1 臨床特征和流行病學(xué)

牛瘟是牛和其他偶蹄動物高度傳染性疾病，宿主范圍包括家牛水牛、牦牛、綿羊和山羊。在亞洲，家養(yǎng)豬也能表現(xiàn)臨床癥狀，而且被認(rèn)為是牛瘟病毒的重要儲存宿主。在野生動物中，牛羚、非洲大羚羊、疣豬、大羚羊、條紋羚、長頸鹿、鹿、不同種類的羚羊、河馬和非洲水牛都易感。盡管在臨床癥狀上感染譜很廣，但表現(xiàn)最嚴(yán)重的是非洲水牛、牛羚和長頸鹿，一些物種如羚羊和河馬總是表現(xiàn)溫和或亞臨床癥狀。很可能所有偶蹄動物易感，但不是所有易感動物都表現(xiàn)明顯的臨床癥狀。其他物種，包括嚙齒動物，兔子和雪貂均為易感動物，但可能不會影響自然感染的流行病學(xué)。散在暴發(fā)的臨床癥狀與感染病毒的毒力和宿主動物的易感性有關(guān)。在牛和其他易感野生或家養(yǎng)反芻動物，牛瘟的典型臨床表現(xiàn)為急性發(fā)熱性疾病，易感宿主的發(fā)病率達100%，死亡率可能達到50%（一般25%～90%）。一些非洲固有品種牛對牛瘟高度易感，而其他品種的牛死亡率較低（低于30%）。在3～5d 的潛伏感染期后是疾病的前驅(qū)期，伴隨體溫急劇升高、產(chǎn)奶量下降、呼吸困難和停止采食。然后是結(jié)膜、口腔和鼻黏膜充血，并有大量的漿液和黏液性眼鼻分泌物。急性期典型表現(xiàn)為口腔黏膜上皮形成假膜、腐爛和潰瘍，炎癥部位壞死的上皮細(xì)胞出現(xiàn)干酪樣壞死灶，由于吞咽困難，動物通常會出現(xiàn)流涎。其次是嚴(yán)重的出血性腹瀉及其引起的虛脫。最后是體溫下降的過程，在此期間，感染動物可能死于脫水和休克。幼年動物易于出現(xiàn)嚴(yán)重臨床癥狀。易感動物感染特定的毒株，某些宿主如黑斑羚、河馬的隱性感染不出現(xiàn)明顯的臨床癥狀。綿羊和山羊感染后的癥狀也不是很明顯。溫和型感染的臨床癥狀較少，一般為黏膜損傷，很少或不出現(xiàn)腹瀉，并且死亡率很低。

牛瘟病毒一旦在種群中定植后，引起的癥狀更加溫和。牛瘟病毒地方性致弱可能與弱毒株的傳播能力更強和易感動物的免疫力有關(guān)。由于幼畜母源抗體的減弱，牛瘟在疫區(qū)會持續(xù)存在。牛瘟病毒也可通過亞臨床感染的野生動物作為病毒宿主感染牛而持續(xù)存在。病毒在地方性動物疾病疫源地感染易感動物后毒力會迅速增強。牛瘟病毒可通過感染動物的分泌物傳播，在急性發(fā)熱期會大量排毒。病毒在環(huán)境中易失活因此牛瘟在疫源地主要通過易感動物與感染動物的直接接觸傳播。病毒也可通過空氣和污染物傳播。病毒可在病死尸體中存活數(shù)天。由于感染牛在臨床癥狀現(xiàn)前的潛伏感染期內(nèi)大量排毒，因此急性感染但未出現(xiàn)臨床癥狀的動物可將病毒引入無病原地區(qū)。通過進口亞臨床感染的綿羊、山羊和其他反芻動物和野生動物也可將病毒引入未感染地區(qū)。亞臨床感染的各品種的豬可作為牛的傳染源，但只有亞洲品種的豬和疣豬感染牛瘟病毒后會出現(xiàn)臨床癥狀。

2 診斷

牛瘟經(jīng)常與牛病毒性腹瀉、牛惡性卡他熱以及早期的牛傳染性鼻氣管炎、口蹄疫等引起的黏膜充血、腐爛或潰瘍相混淆。特異性PCR 檢測可以解決這些相似疾病的診斷問題。RT-PCR 可迅速將牛瘟病毒與其他反芻獸病毒區(qū)別開。多種不同的細(xì)胞系都可用于分離牛瘟病毒，一般是用原代腎細(xì)胞培養(yǎng)。病毒中和試驗、ELISA 試驗可用于評價某一特定地區(qū)牛瘟病毒的流行情況，只有未免疫的動物對于評價牛瘟根除計劃是否成功才具有意義。

3 免疫與防控感染

牛瘟病毒后存活的牛對牛瘟病毒具有終生免疫力。臨床癥狀出現(xiàn)后6～7d 產(chǎn)生中和抗體，感染后3～4周抗體滴度達到最高。隨著分子分型的出現(xiàn)，已確定3 種不同基因型的牛瘟病毒，兩種來源于非洲，一種來源于亞洲。所有毒株血清型都相同，因此，可以使用單一毒株的疫苗。目前，3 型局限于亞洲，2 型在東非和西非，1 型僅出現(xiàn)在埃塞俄比亞和蘇丹。自2007 年4 月起，包括亞洲和非洲等國家在內(nèi)的所有國家都沒有向OE 報告過牛瘟感染疫情。肯尼亞是非洲最后一個宣布成為非疫源地的非洲國家。這份報告的依據(jù)是該地區(qū)在過去的兩年沒有出現(xiàn)臨床疾病，并且活疫苗已經(jīng)停止使用。為確保野生儲主不感染家養(yǎng)動物，疫病檢測必須繼續(xù)進行。

沒有牛瘟的國家，為防止引入此病毒制定了獸醫(yī)公共衛(wèi)生法則。禁止從疫源國家進口生肉和肉制品，動物園在引入這些國家的動物之前要進行檢疫。在牛瘟流行國家與很可能引入此病毒的國家可以使用弱毒活疫苗。早期的疫苗是在兔（兔化疫苗）、雞胚（雞胚化疫苗）或山羊（山羊化疫苗）內(nèi)傳代產(chǎn)生的。20 世紀(jì)60 年代培養(yǎng)出了細(xì)胞培養(yǎng)弱毒疫苗（TCRV），從此在非洲廣泛使用并成功根除非洲的牛瘟。由于這種疫苗具有終生免疫保護力，并且生產(chǎn)成本低廉，因此該疫苗的應(yīng)用十分有效。事實上，細(xì)胞苗仍是防控牛瘟的最好疫苗，但它易失活，并且需要維持冷鏈運輸，而冷鏈運輸在一些發(fā)生過牛瘟的國家也是一個棘手的問題。由于感染的動物數(shù)量減少為了便于血清學(xué)監(jiān)測，疫苗已停止使用。由于疫苗感染所引起的免疫反應(yīng)不能與野毒感染相區(qū)分，因此標(biāo)記疫苗的研制是十分必要的，但由于現(xiàn)有技術(shù)的存在，牛瘟似乎已被根除，因此并沒有廣泛應(yīng)用。

4 開始消滅牛瘟

消滅牛瘟始于十八世紀(jì)動物檢疫程序的制定。在早期根除的歷史中，很多人更關(guān)心的是通過大規(guī)模疫苗接種來抑制這種疾病，而不是根除。20 世紀(jì)40 年代，聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織（糧農(nóng)組織）在東亞實施了許多控制方案；然而，第一個協(xié)調(diào)的國際牛瘟防治方案僅在1963 年至1975 年在非洲實施。非洲流行病局成立于1950 年，計劃在非洲消滅牛瘟。1960 年在尼日利亞卡諾舉行的非洲獸醫(yī)服務(wù)負(fù)責(zé)人會議承諾在非洲統(tǒng)一組織的主持下實施一個名為“聯(lián)合項目”的多國項目，得到許多個別國家援助方案的支持，特別是美國國際開發(fā)署（美援署）、國際組織和機構(gòu)。目的是讓每個國家連續(xù)三年每年為所有不同年齡的牛接種疫苗。此后，每個國家承諾每年為所有小牛接種疫苗。

最初有22 個國家參與了，其中17 個國家發(fā)生了牛瘟。到1979 年年底，只有一個國家，蘇丹，報道有這種疾病。許多國家既未能操作與官方疾病報告有關(guān)的監(jiān)測系統(tǒng)，也未能維持對幼崽的疫苗接種。在1 975 年接近于從非洲消滅牛瘟。在西非和東非野生有蹄類動物中繼續(xù)秘密流通，最重要的是，在西非和東非的塞內(nèi)加爾河流域的廣大牧區(qū)，持續(xù)存在著感染的蓄水池。

直到1994 年，一個致力于全球消滅的方案才被認(rèn)為是可行的；糧農(nóng)組織迎接了這一挑戰(zhàn)，設(shè)立了由設(shè)在羅馬的一個秘書處支助的全球凈化方案（GREP）。GREP 概念的關(guān)鍵在于，與其他早期的牛瘟倡議不同，它是有時限的，并為其完成設(shè)定了2010 年的最后期限。

5 疫苗的發(fā)展

1960 年牛瘟疫苗（TCRV）的研制是控制牛瘟的一個重要里程碑，推動了整個非洲消滅牛瘟。TCRV 是人類或獸醫(yī)史上最優(yōu)秀的疫苗之一。它對牛瘟病毒有保護作用，為牛提供終身免疫，從來不與任何不良反應(yīng)有關(guān)，單一的組織培養(yǎng)感染劑量具有免疫原性。這種疫苗使數(shù)以億計的依賴牲畜的人受益。疫苗的主要限制是需要嚴(yán)格的冷鏈—這是對現(xiàn)場疫苗接種計劃的重大障礙。利用原代牛腎細(xì)胞的生產(chǎn)工藝是污染物的潛在來源，也是大規(guī)模生產(chǎn)的制約因素。

TCRV 的生產(chǎn)是在非洲各地的國家實驗室建立的，但每年5 000 萬劑的需求以實現(xiàn)規(guī)模經(jīng)濟、保持生產(chǎn)質(zhì)量或?qū)ζ湓O(shè)施進行資本重組。

塔夫茨大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院和美國農(nóng)業(yè)部發(fā)起了一項開發(fā)TCRV 耐熱配方的研究方案。在兩年內(nèi)，該項目正在生產(chǎn)牛瘟疫苗，該疫苗在37℃下保留了國際規(guī)定的最低免疫劑量，最長可達8個月和在56℃的10d，新疫苗名為熱Vax，建議在冷鏈外儲存30d，并被要求在45℃保持最低滴度14d，足以擴大現(xiàn)場疫苗接種計劃的覆蓋范圍。由于向非洲生產(chǎn)設(shè)施轉(zhuǎn)讓了技術(shù)，因此在1992 年以前可在商業(yè)上獲得足以消滅牛瘟的熱Vax。

俄羅斯疫苗相關(guān)事件表明，使用減毒疫苗對牛瘟的根除構(gòu)成了威脅，盡管TCRV 從未被懷疑會恢復(fù)致病性。因此，及時停止接種成為全球可再生能源方案政策的一個關(guān)鍵要素。