基質(zhì)金屬蛋白酶9在妊高癥患者胎盤中表達水平與圍產(chǎn)兒結(jié)局的相關性研究

朱立莖，李廈潔，梁麗華

(東莞市石碣醫(yī)院，廣東 東莞 523290)

0 引言

病人發(fā)生妊娠期高血壓這一疾病，將會對母嬰的身體健康造成不良的影響，并會引發(fā)妊娠期并發(fā)癥，還會對胎兒的健康生長產(chǎn)生限制等諸多不種的影響。在近幾年的醫(yī)療機構(gòu)研究中表明，發(fā)生這一病情與滋養(yǎng)細胞侵入子宮部位螺旋動脈較淺，胎盤的血管構(gòu)造中生理性結(jié)構(gòu)障礙有著密切的關系，而滋養(yǎng)細胞為母體子宮中的內(nèi)膜以及肌層的有效浸潤是人體胎盤不斷形成的重要環(huán)節(jié)。而基質(zhì)金屬蛋白酶在人體胎盤的發(fā)育和著床過程中起著十分重要的作用?；|(zhì)金屬蛋白酶發(fā)生調(diào)控失調(diào)時，將會引發(fā)人體細胞滋養(yǎng)細胞的侵襲能力出現(xiàn)異?，F(xiàn)象，如果侵襲力較弱時，則將會出現(xiàn)妊娠期孕婦高血壓等相關疾病，其中基質(zhì)金屬蛋白酶特別的重要。在有關的研究中顯示，正常情況下足月的妊娠孕婦和妊娠期發(fā)生高血壓疾病的病人，其胎盤滋養(yǎng)細胞當中和血清當中的有效表達，來研究探討基質(zhì)金屬蛋白酶在妊娠期發(fā)生高血壓疾病中的發(fā)病原理及作用。胎盤的正常發(fā)育對正常妊娠的維持至關重要，胎盤結(jié)構(gòu)或功能異常可導致某些妊娠并發(fā)癥。正常妊娠的維持是胚胎與母體之間極其復雜的相互協(xié)調(diào)過程，絨毛外滋養(yǎng)層細胞(EVT)的正常侵蝕是妊娠順利進行的重要環(huán)節(jié)之一，近年來研究表明，滋養(yǎng)層細胞侵蝕過淺可導致妊娠期高血壓疾病(HDCP)的發(fā)生。HDCP患者在胎盤形成過程中存在著螺旋小動脈血管重鑄異常的現(xiàn)象，其絨毛外滋養(yǎng)細胞浸潤能力下降，范圍縮小，浸潤僅達蛻膜段，子宮螺旋動脈未經(jīng)歷正常妊娠時的變化卻保持著相對狹窄的管徑和對縮血管物質(zhì)的反應，從而造成了胎盤缺血。滋養(yǎng)層細胞對子宮螺旋動脈侵蝕不足，使胎盤植入過淺，導致胎盤血流灌注不足即胎盤缺陷，最終引發(fā)母體系統(tǒng)性血管內(nèi)皮損傷，從而表現(xiàn)出HDCP的臨床癥狀。滋養(yǎng)細胞的侵襲行為受子宮旁和滋養(yǎng)細胞自分泌的多種因子介導，其中基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)尤其是基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (MMP-9)對細胞外基質(zhì)的降解是滋養(yǎng)細胞侵襲的限速步驟。

1 資料與方法

1.1 研究對象

妊高癥的入選標準：①妊娠高血壓疾病診斷標準按照《2012年妊娠高血壓疾病診療指南》；②單胎妊娠；③孕婦以往均無任何原發(fā)性心臟病，肝病，腎病等病史，無高血壓病家族史；④自愿接受試驗并配合試驗檢查；⑤年齡在18-40歲。根據(jù)上述標準，選取我院婦產(chǎn)科2019年8月至2020年10月孕婦，選取其中符合要求的有妊高癥孕婦45例，再選取同期15名正常孕婦為對照組。兩組孕婦年齡，孕周，孕次，產(chǎn)次等一般臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 研究方法

抽取實驗組與對照組娩出30min內(nèi)的胎盤組織1g，注意避開壞死和鈣化區(qū)，立即置入立即置于-20攝氏度冰凍保存，Western blot測定組織中MMP-9的表達水平。試劑一抗(Anti-MMP-9 單克隆抗體)、試劑二抗(鼠抗兔IgG)均購自武漢博士德公司，1% NP-40裂解液購自上海江萊生物科技有限公司。試驗方法：將大約500mg組織樣本加入到400uL 1%NP-40裂解液中(上海江萊生物 科技有限公司)混勻，加入一定量的蛋白酶抑制劑后于4攝氏度、10000r/min下離心5min，測定上清液中的蛋白濃度。量取含蛋白20ug的上清液，加入到8%SDS聚丙烯酰胺凝膠中進行垂直電泳測定，然后轉(zhuǎn)至硝化纖維素膜上進行轉(zhuǎn)印。硝化纖維 素膜與Anti-MMP9 抗體(BA0573，boster)于4℃下過夜孵育(1：200)。利用等級資料的秩和檢驗進行統(tǒng)計分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。應用Pearson法，分析其與圍產(chǎn)兒1min Apgar評分及體質(zhì)量的相關性，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 實驗組與對照組胎盤中MMP-9的表達及比較

結(jié)果判定：通過灰度值計算得到MMP-9的量，其含量處于總體水平5%之下的樣本判定為陰性(-), 5% ～ 15%判定為弱陽性(+), 16% ～ 50%判定為陽性(++), ＞50%判定為強陽性(+++)。兩組比校，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。即妊高癥患者胎盤中MMP-9的含量顯著低于正常胎盤含量。

表1 MMP-9在妊娠期高血壓疾病患者與正常妊娠患者胎盤母面中的表達及比較

2.2 圍產(chǎn)兒結(jié)局及其相關性

實驗組圍產(chǎn)兒1min Apgar及出生體重均低于對照組，組間差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。見表2。Pearson相關性分析處理結(jié)果顯示胎盤MMP-9蛋白表達均與圍產(chǎn)兒結(jié)局正相關(P＜0.05)。

表2 2組圍產(chǎn)兒結(jié)局比較(±s)

表2 2組圍產(chǎn)兒結(jié)局比較(±s)

指標 實驗組(n=45) 對照組(n=15)1min Apgar評分(分) 8.18±1.50 9.64±0.52出生體質(zhì)量(g) 2104.32±361.23 3468.47±483.20

3 討論

3.1 基質(zhì)金屬蛋白酶屬于滋養(yǎng)細胞所產(chǎn)生的重要水解酶,其分泌量的下降將會對胎盤著床以及血管重鑄產(chǎn)生重要的影響，從而發(fā)生胎盤供血或供氧不足現(xiàn)象。出現(xiàn)胎盤缺血和缺氧將會對其局部產(chǎn)生氧化應激反應，可能引起脂質(zhì)過氧化以及絨毛間隙的白細胞發(fā)生活化導致血管發(fā)生內(nèi)皮損傷等問題,最終將會導致發(fā)生妊娠高血壓等疾病。在近些年的有關研究發(fā)現(xiàn),出現(xiàn)妊娠期的高血壓與妊娠早期滋養(yǎng)細胞的侵襲有著密切關聯(lián),其主要機制表現(xiàn)為:妊娠期高血壓病人的滋養(yǎng)層細胞在浸潤子宮螺旋動脈時僅可以達蛻膜層,因植入過淺導致相對狹小的動脈血管管徑和對縮血管的出現(xiàn)過極的反應,從而引發(fā)胎盤中的血流灌注情況不足,最終導致母體的系統(tǒng)性血管內(nèi)皮發(fā)生損傷,表現(xiàn)為妊娠期高血壓疾病的出現(xiàn)等臨床癥狀。在有關的研究中，通過查看正常胎盤以及先兆子癇性胎盤中的螺旋動脈,可以檢測到在正常胎盤的螺旋狀動脈壁中的厚度隨著妊娠期的發(fā)展而會變薄,而螺旋動脈的血管薄壁上有著滋養(yǎng)細胞的浸潤,而對于先兆子痼時，螺旋動脈的血管壁較厚,螺旋小動脈血管中幾乎看不到滋養(yǎng)細胞,較多的細胞滋養(yǎng)細胞離此部分血管會有較長的距離,這樣螺旋動脈血管很難實現(xiàn)生理重鑄,以致發(fā)生胎盤缺氧和灌注不足。妊娠期高血壓作為一種常見的產(chǎn)科疾病,據(jù)臨床統(tǒng)計，我國發(fā)病率約10%。多發(fā)于孕20周后,臨床主要病癥比較復雜,主要表現(xiàn)為血壓升高,尿蛋白含量增加,抽搐、昏迷以及心力衰竭等癥狀,可能會造成臟器功能的損害,如果患者終止妊娠期會使病情有所好轉(zhuǎn)。妊娠期高血壓也是一種比較嚴重的妊娠并發(fā)癥,病理變化主要表現(xiàn)為全身小動脈痙攣狀態(tài),血管內(nèi)皮損傷、血管內(nèi)皮功能缺失是其中的中心發(fā)病環(huán)節(jié)。

3.2 MMP-9是一種基層蛋白質(zhì)水解酶，參與降解子宮內(nèi)膜細胞外基質(zhì)。其主要作用是能夠使細胞外基質(zhì)降解,與胎膜的破裂、胎盤的形成、孕婦的創(chuàng)傷修復、月經(jīng)周期的調(diào)控以及滋養(yǎng)葉細胞侵入子宮過程發(fā)生障礙有關,它還能有效調(diào)節(jié)蛋白酶以及組織細胞因子的活性,通過釋放內(nèi)皮血管生長因子來參與到血管的生成過程中。在妊娠過程中，胎盤絨毛的細胞滋養(yǎng)細胞逐漸遷徙成絨毛的基底層形成具有強大侵蝕功能的絨毛外滋養(yǎng)細胞。這種細胞會降解細胞外基質(zhì)，侵入子宮內(nèi)膜和子宮螺旋動脈。而MMP-9正是這一過程中重要的生化介質(zhì)。在體外培養(yǎng)實驗中發(fā)現(xiàn):妊娠7～11周，MMP-9的表達逐漸上升,在滋養(yǎng)細胞分泌的酶類中占主要優(yōu)勢。作為滋養(yǎng)細胞分泌的最有效的蛋白水解酶，MMP-9的分泌量與滋養(yǎng)細胞的侵襲能力和血管重鑄密切相關。由此推斷MMP-9的表達及活性的變化影響滋養(yǎng)細胞侵襲能力的變化，從而有可能導致滋養(yǎng)細胞對子宮內(nèi)膜侵入過淺，子宮螺旋小動脈重鑄障礙,血流灌注不足，胎盤缺血缺氧，最終出現(xiàn)臨床癥狀，并對圍產(chǎn)兒造成不利的影響。本研究提示妊高癥患者胎盤中MMP-9呈低表達，且MMP-9低表達水平會不利于圍產(chǎn)兒的發(fā)育。由此可見，胎盤中MMP-9水平與妊高癥及圍產(chǎn)兒結(jié)局具有相關性，可據(jù)此評估圍產(chǎn)兒結(jié)局并予以早期干預。

3.3 妊娠期高血壓疾病對新生兒出生結(jié)局的影響國內(nèi)外的研究均表明HDCP可以增加胎兒宮內(nèi)生長發(fā)育受限和小于胎齡兒發(fā)生的危險性。這兩者不僅是圍產(chǎn)兒死亡的重要原因，還會對嬰兒期乃至更加長的時間內(nèi)的身體發(fā)育和智能發(fā)育產(chǎn)生影響Ⅲ。對HDCP患者新生兒出生結(jié)局的研究，是長期研究的基礎。妊娠期的高血壓與新生兒出生結(jié)局有關的理論在幾十年前就被Taylor提出。妊娠期高血壓是全球第二位導致孕婦死亡的疾病，其引發(fā)的宮內(nèi)發(fā)育遲緩、胎盤早剝、早產(chǎn)等又對圍產(chǎn)結(jié)局產(chǎn)生不良影響。本次研究對象中病例組圍產(chǎn)兒1min Apgar及出生體重均低于對照組，Pearson相關性分析處理結(jié)果顯示胎盤MMP-9蛋白表達均與圍產(chǎn)兒結(jié)局正相關。

3.4 由于根據(jù)疾病嚴重程度分組樣本量少，所以在對比 Apgar及出生體重時把不同嚴重程度的妊高癥孕婦分娩的新生兒作為實驗組，本研究未深入分析胎盤中MMP-9含量與輕重度妊娠高血壓以及圍產(chǎn)兒結(jié)局的影響，只能說明MMP-9的表達與妊高癥和圍產(chǎn)兒結(jié)局具有一定的相關性。