胃癌組織中再生基因、轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

練火軍 魏 穎 楊 靜

1.江西省上饒市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江西上饒 334000；2.江西省上饒市人民醫(yī)院病理科，江西上饒 334000

胃癌是常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率與病死率均居高不下，特別是在東亞發(fā)展中國家其發(fā)病率攀升趨勢明顯，現(xiàn)階段胃癌已經(jīng)成為全球重要衛(wèi)生問題[1]。該病起病隱匿，患病初期，因個體重視度不高，導(dǎo)致疾病診出時，往往已處于中晚期，且存在合并轉(zhuǎn)移、侵襲的可能，治療欠及時，患者預(yù)后往往不達(dá)預(yù)期[2]。轉(zhuǎn)移與侵襲是導(dǎo)致患者不良預(yù)后的主要原因。隨著醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)ξ赴┘膊∵M(jìn)展分子水平的不斷深入探索，發(fā)現(xiàn)諸多蛋白如轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白（vestigial-like family member 4，VGLL4） 及促生長因子如再生基因（regeneration gene 1α，REG1α）在胃癌的發(fā)生、進(jìn)展過程中有著舉足輕重的地位[3]。本研究旨在通過觀察胃癌組織中REG1α、VGLL4 表達(dá)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，分析胃癌組織中REG1α、VGLL4 表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性，以指導(dǎo)臨床治療，旨在改善患者預(yù)后。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2019年10月至2020年10月上饒市人民醫(yī)院收治的82 例胃癌患者作為研究對象，根據(jù)患者是否合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為轉(zhuǎn)移組（55 例）與未轉(zhuǎn)移組（27 例）。轉(zhuǎn)移組中，男30 例，女25 例；年齡34～82 歲，平均（60.65±9.46）歲；賁門腫瘤34 例；非賁門腫瘤21 例；分化程度[5]：低分化38 例，中高分化17例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41 例；臨床分期[6]：Ⅰ～Ⅱ期26 例，Ⅲ～Ⅳ期29 例。未轉(zhuǎn)移組中，男17 例，女10 例；年齡33～82 歲，平均（59.45±8.52）歲；賁門腫瘤18 例，非賁門腫瘤9 例；分化程度：低分化19 例，中高分化8 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20 例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期12 例，Ⅲ～Ⅳ期15 例。兩組的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合胃癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；臨床各方面無丟失和缺損；在本院行胃癌根治術(shù)者；未合并其他臟器嚴(yán)重疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并免疫、血液系統(tǒng)異障礙者；合并神經(jīng)功能異常者；合并胃部分切除術(shù)病史者；凝血功能差。

1.2 方法

主要試劑：鼠抗人REG1α 單克隆抗體，購自美國Neomarkers 公司；兔抗人VGLL4 單克隆抗體，購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。鏈酶菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接（streptomyces avidin peroxidase linkage，SP）試劑盒、胰蛋白酶及二氨基聯(lián)苯氨酶底物顯色試劑盒均購自福州邁新公司。標(biāo)本準(zhǔn)備：各組織標(biāo)本均脫水，經(jīng)10%甲醛固定，二甲苯透明；常規(guī)石蠟包埋，5 μm 連續(xù)厚切片。然后根據(jù)SP 免疫組化染色法對REG1α、VGLL4 蛋白進(jìn)行檢測，檢測過程嚴(yán)格按照說明進(jìn)行。一抗陰性對照使用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行代替。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

比較兩組REG1α、VGLL4 陽性表達(dá)率，并分析上述蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。REG1α、VGLL4表達(dá)結(jié)果判斷[7]：根據(jù)染色強度、陽性細(xì)胞百分比判定。①染色強度：陽性標(biāo)準(zhǔn)為在細(xì)胞核或細(xì)胞漿內(nèi)出血棕黃色或褐色顆粒。無色記0 分，灰黃色記1 分，金黃色記2 分，棕褐色記3 分。②陽性細(xì)胞率計算：從每張切片中隨機選取5 個高倍視野并計算、觀察陽性細(xì)胞數(shù)，陽性細(xì)胞率=陽性細(xì)胞數(shù)/觀察細(xì)胞數(shù)×100%。0 分：無陽性細(xì)胞，1 分：陽性細(xì)胞<10%，2 分：陽性細(xì)胞10%～50%，3 分：陽性細(xì)胞＞50%～75%，4 分：陽性細(xì)胞>75%?？偡e分：上述2 項評分的乘積。陽性：總積分>4 分。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Pearson 相關(guān)性分析對REG1、VGLL4 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性進(jìn)行分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組REG1α、VGLL4 表達(dá)情況的比較

轉(zhuǎn)移組REG1α 陽性表達(dá)率高于未轉(zhuǎn)移組，VGLL4 陽性表達(dá)率低于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組REG1α、VGLL4 表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 REG1α、VGLL4 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，REG1α 表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，VGLL4 表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）（表2）。

表2 REG1α、VGLL4 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

3 討論

胃癌是人類第二位常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于肺癌，70%以上的胃癌患者確診時已是中晚期，預(yù)后較差[8]。胃癌主要是遺傳、環(huán)境、社會等多種因素共同作用的結(jié)果，而轉(zhuǎn)移與侵襲是導(dǎo)致患者不良預(yù)后的主要原因。胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程是一個多因素、多步驟作用的結(jié)果，諸多研究考慮在此過程中，是否可通過調(diào)控某種分子的表達(dá)，來延緩或者阻斷淋巴癌轉(zhuǎn)移，繼而控制病情進(jìn)展，為治療爭取時間窗口，以改善患者預(yù)后[9-10]。

REG1α 是新發(fā)現(xiàn)的生長因子，主要存在并集體于胃黏膜中，正常情況下表達(dá)低，只有在胃黏膜遭受各種理化因子損害時表達(dá)，具有修復(fù)黏膜的作用[11]。周群燕等[12]發(fā)現(xiàn)REG1α 的表達(dá)在正常胃黏膜、萎縮胃黏膜及胃癌組織中出現(xiàn)進(jìn)行性加重現(xiàn)象，表明REG1α 極大可能在癌變過程中發(fā)揮舉足輕重的作用，但具體機制尚不清楚。國外報道指出，REG1α 在低分化胃癌中呈高表達(dá)，而高表達(dá)REG1α 者預(yù)后較差[13]。但目前有關(guān)在胃癌組織中上調(diào)的機制尚未明確，但認(rèn)為可能與胃泌素、白細(xì)胞介素-6、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)[14]。VGLL4 是新近發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，諸多研究顯示，VGLL4 在多種信號通路中發(fā)揮重要作用[15-17]。且VGLL4 可通過特殊通路競爭性阻斷某種信號通路，繼而在細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等方面產(chǎn)生作用，最終達(dá)到控制腫瘤生長的目的。韓新影等[18]指出，VGLL4 在抑制胃癌疾病進(jìn)展中具有重要作用。本研究轉(zhuǎn)移組REG1α 陽性表達(dá)率高于未轉(zhuǎn)移組，VGLL4 陽性表達(dá)率低于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；Pearson 相關(guān)分析結(jié)果顯示，REG1α 表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，VGLL4 表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），提示胃癌組織中REG1α 表達(dá)增高、VGLL4 表達(dá)下降可能提示胃癌發(fā)生轉(zhuǎn)移。然而本研究樣本量偏少，實驗結(jié)果可能存在偏倚，后期有待進(jìn)一步擴大樣本深入研究。

綜上所述，REG1α、VGLL4 可作為評估胃癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有效指標(biāo)，且其表達(dá)情況與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在顯著相關(guān)性。