p16/ Ki67 雙染檢測在分流宮頸LSIL/ HSIL及預(yù)測LSIL 轉(zhuǎn)歸中的臨床應(yīng)用價(jià)值

張 娟

山東省淄博市婦幼保健院婦科，山東淄博 255000

宮頸癌是臨床上較為常見的一種婦科惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率及致死率，以浙江省2010—2014年數(shù)據(jù)為例，發(fā)病率占全部癌癥發(fā)病率2.81%，居各部位癌癥發(fā)病的第10 位，死亡發(fā)病比例為0.18∶1，嚴(yán)重威脅到患者的生命安全[1]。在宮頸癌發(fā)生前，患者宮頸組織會(huì)經(jīng)歷一系列病變過程，包括低度鱗狀上皮內(nèi)病變（low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）與高度鱗狀上皮內(nèi)病變（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL），及早確診并選擇合理的治療方案可有效降低治療難度，提升治療效果，因此，在診斷時(shí)采用有效的檢測方案具有重要意義[2]。宮頸組織學(xué)檢查是臨床針對(duì)宮頸疾病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于患者接受程度較低，無法進(jìn)行普及，隨著醫(yī)學(xué)檢查手段的發(fā)展，臨床提出對(duì)患者進(jìn)行p16/Ki67 雙染檢測，以期獲得較好的診斷效果，更好的對(duì)宮頸LSIL 與HSIL 進(jìn)行分流，并預(yù)測LSIL 轉(zhuǎn)歸情況[3-4]。本研究選取300 例宮頸疾病患者作為研究對(duì)象進(jìn)行p16/Ki67 雙染檢測。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年2月山東省淄博市婦幼保健院婦科收治的300 例宮頸疾病患者作為研究對(duì)象，年齡18～77 歲，平均（47.50±29.50）歲。根據(jù)宮頸細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果將患者劃分為未見上皮內(nèi)瘤樣病變及惡性細(xì)胞（no intraepithelial neoplasia and malig nant cells，NILM）、無明確診斷意義的鱗狀上皮細(xì)胞病變（atypical squamous cells of undetermined significance，ASCUS）、LSIL 以及非典型鱗狀細(xì)胞不除外高級(jí)別上皮內(nèi)病變及以上（atypical squamous cells with squamous intraepithelial lesions several times higher cannot be excluded，ASU-H+）四組；根據(jù)宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果不同分為宮頸炎、LSIL、HSIL 以及宮頸癌四組。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入條件： ①所有患者均接受組織病理活檢確診[5]，且確診屬于原發(fā)性宮頸疾?。虎诨颊咭押炇鹬橥鈺?。

排除條件：①近期接受了相關(guān)治療的患者；②患有其它惡性疾病的患者； ③懷孕或處于哺乳期的患者；④存在自身免疫疾病的患者；⑤存在精神疾病，無法配合本次研究者。

1.2 方法

所有患者均接受組織學(xué)診斷、細(xì)胞學(xué)診斷以及p16/Ki67 雙染檢測。

組織學(xué)診斷： 醫(yī)護(hù)人員采集所有患者宮頸組織，參照病理活檢操作規(guī)范以此進(jìn)行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、裱片、HE 染色后，由3 名高年資的病理學(xué)醫(yī)師進(jìn)行診斷。

細(xì)胞學(xué)診斷： 醫(yī)護(hù)人員采集患者宮頸上皮細(xì)胞，將其固定于95%乙醇后進(jìn)行巴氏染色，利用TBS 診斷系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。

p16/Ki67 雙染檢測：由醫(yī)護(hù)人員對(duì)患者宮頸標(biāo)本進(jìn)行切片，利用全自動(dòng)免疫組化染色儀（品牌：瑞士羅氏Roche，型號(hào)：Bench Mark XT）進(jìn)行染色，試劑盒選用美國Ventana Medical Systems 生產(chǎn)的p16/Ki67 單克隆抗體雞尾酒試劑，采用免疫組織化學(xué)染色法進(jìn)行檢測。判定陽性標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞內(nèi)同時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)棕染與細(xì)胞核紅染；判定陰性標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞內(nèi)未同時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)棕染與細(xì)胞核紅染。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

①比較宮頸細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果不同的患者接受p16/Ki67 雙染檢測后結(jié)果為陽性的概率。②比較宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果不同的患者接受p16/Ki67 雙染檢測后結(jié)果為陽性的概率。③分析p16/Ki67 雙染檢測對(duì)宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果為HSIL 與宮頸癌患者的診斷效能，即將宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算p16/Ki67 雙染檢測診斷HSIL 與宮頸癌的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值。敏感度＝真陽性患者例數(shù)/（真陽性＋假陰性）患者例數(shù)×100%，特異度＝真陰性患者例數(shù)/（真陰性＋假陽性）患者例數(shù)×100%，陽性預(yù)測值＝真陽性患者例數(shù)/（真陽性＋假陽性）患者例數(shù)×100%。④分析p16/Ki67 雙染檢測與宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果為LSIL 患者之間的關(guān)系，即對(duì)LSIL 患者隨訪1年時(shí)間，統(tǒng)計(jì)LSIL 轉(zhuǎn)歸情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)選用SPSS21.0 軟件分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，比較用檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，多組間率的兩兩比較采用Bonferroni 方法矯正，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=原α 水平/比較次數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 宮頸細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果不同的患者p16/Ki67 雙染檢測陽性率的比較

ASCUS 組與LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.022，P=0.312）；NILM組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASCUS 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=42.024，P＜0.001）；NILM 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于LSIL 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義（χ2=54.121，P＜0.001）；NULM 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=96.928，P＜0.001）；ASCUS 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=40.175，P＜0.001）；LSIL 組p16/Ki67 雙 染 檢 測 陽 性 率 低 于ASU-H+組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=29.685，P＜0.001）（表1）。

表1 宮頸細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果不同的患者p16/Ki67 雙染檢測陽性率的比較[n（%）]

2.2 宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果不同的患者p16/Ki67 雙染檢測陽性率的比較

HSIL 組與宮頸癌組p16/Ki67 雙染檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.929，P=0.087）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于LSIL 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=17.085，P＜0.001）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于HSIL 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=92.582，P＜0.001）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于宮頸癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=95.575，P＜0.001）、LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于HSIL 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=67.404，P＜0.001）、LSIL 組p16/Ki67雙染檢測陽性率低于宮頸癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=87.131，P＜0.001）（表2）。

表2 宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果不同的患者p16/Ki67 雙染檢測后出現(xiàn)的差異[n（%）]

2.3 宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果為HSIL 與宮頸癌患者的p16/Ki67 雙染檢測的診斷效能

p16/Ki67 雙染檢測診斷結(jié)果顯示HSIL 與宮頸癌陽性的患者共145 例，靈敏度為91.20%，特異度為82.23%，陽性預(yù)測值為78.62%（表3）。

表3 宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果為HSIL 與宮頸癌患者的p16/Ki67 雙染檢測的診斷效能

2.4 LSIL 患者隨訪1年時(shí)間的轉(zhuǎn)歸情況

對(duì)宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果為LSIL 的74 例患者進(jìn)行1年隨訪，p16/Ki67 雙染檢測為陰性的患者出現(xiàn)病變進(jìn)展的概率為5.88%（3/51），低于p16/Ki67 雙染檢測為陽性的患者出現(xiàn)病情進(jìn)展的概率30.43%（7/23），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變指的是宮頸癌前病變過程，根據(jù)病變程度可分為LSIL 與HSIL。其中，LSIL 患者病變程度較低，具有可逆性，可通過物理治療逆轉(zhuǎn)正常，而HSIL 患者病變程度較高，臨床治療一般采用合理的術(shù)式切除病灶，因此對(duì)患者進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷，可幫助醫(yī)師選擇正確的治療方案，提高患者治療效果[6-7]。宮頸組織學(xué)檢查作為臨床診斷宮頸疾病的金標(biāo)準(zhǔn)，其需要獲取患者宮頸組織標(biāo)本，患者存在一定的排斥心理，無法得到臨床普及，而宮頸細(xì)胞學(xué)檢查敏感性較低，容易發(fā)生漏診和誤診情況，因此，迫切需要一種簡便、可靠的檢測手段提高對(duì)患者診斷的準(zhǔn)確性[8-10]。高紅敏等[11]研究發(fā)現(xiàn)，p16/Ki67 雙染檢測具有較高的靈敏度、特異度，且檢測標(biāo)本容易獲得，對(duì)患者機(jī)體損傷較小，結(jié)果易于觀察，可作為宮頸癌篩查的重要方法。在正常宮頸細(xì)胞當(dāng)中，p16 是一種宮頸癌前病變生物標(biāo)記物，而Ki67 則是核抗原與細(xì)胞增殖的標(biāo)志物，兩者的表達(dá)是相互排斥的，但當(dāng)細(xì)胞周期失調(diào)而致異常增殖時(shí)，兩者會(huì)出現(xiàn)同時(shí)表達(dá)的情況[12-14]。p16/Ki67 雙染檢測指的是對(duì)患者病變細(xì)胞進(jìn)行免疫組化雙染標(biāo)記，然后其中p16 抗體與Ki67 抗體的表達(dá)進(jìn)行檢測，當(dāng)兩者結(jié)果均為陽性時(shí)，提示為高級(jí)病變，從而為臨床判斷患者病情嚴(yán)重程度提供依據(jù)，使患者能夠合理的治療[15-17]。

本研究結(jié)果顯示，宮頸細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果顯示，ASCUS 組與LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；NILM 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASCUS 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；NILM 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于LSIL組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；NULM 組p16/Ki67雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；ASCUS 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于ASU-H+組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。HSIL 組與宮頸癌組p16/Ki67 雙染檢測陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于LSIL 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于HSIL 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；宮頸炎組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于宮頸癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）、LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于HSIL 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）、LSIL 組p16/Ki67 雙染檢測陽性率低于宮頸癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。p16/Ki67 雙染檢測診斷結(jié)果顯示HSIL 與宮頸癌陽性的患者共145 例，靈敏度為91.20%，特異度為82.23%，陽性預(yù)測值為78.62%。對(duì)宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果為LSIL 的74 例患者進(jìn)行1年隨訪，p16/Ki67 雙染檢測為陰性的患者出現(xiàn)病變進(jìn)展的概率低于p16/Ki67 雙染檢測為陽性的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示接受細(xì)胞學(xué)診斷后的四組患者以及接受組織學(xué)診斷的四組患者病情嚴(yán)重程度均為由低到高，而患者在接受p16/Ki67 雙染檢測后，其陽性率也呈現(xiàn)逐步提升的情況，p16/Ki67雙染檢測陽性率隨宮頸疾病患者病情嚴(yán)重程度的增高而增加，而p16/Ki67 雙染檢測陽性率在LSIL 與HSIL 兩組之間存在較大的差異，在HSIL 與宮頸癌等高級(jí)別病變的診斷中具有較高的靈敏度、特異度及陽性預(yù)測值，因此p16/Ki67 雙染檢測陽性率可作為LSIL 與HSIL 分流的依據(jù)，同時(shí)，對(duì)宮頸組織學(xué)診斷結(jié)果為LSIL 的74 例患者進(jìn)行1年隨訪，p16/Ki67雙染檢測為陰性的患者出現(xiàn)病變進(jìn)展的概率低于p16/Ki67 雙染檢測為陽性的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示p16/Ki67 雙染檢測能夠較好的預(yù)測LSIL 患者轉(zhuǎn)歸情況。黎法文等[18]研究結(jié)果顯示，p16/Ki67 雙染檢測結(jié)果的陽性率會(huì)隨著宮頸疾病患者的病情加重而不斷增加，并在LSIL 與HSIL 之間存在較大差異，可作為臨床分流LSIL 與HSIL 的重要手段，該結(jié)果與本研究結(jié)果一致，提示p16/Ki67雙染檢測可作為臨床診斷宮頸疾病嚴(yán)重程度的重要方法。

綜上所述，p16/Ki67 雙染檢測能夠?qū)m頸疾病嚴(yán)重程度進(jìn)行有效的診斷，能夠分流LSIL/HSIL，并對(duì)LSIL 的轉(zhuǎn)歸具有較高的預(yù)測價(jià)值，值得臨床推廣應(yīng)用。