甲噻誘胺原藥高效液相色譜分析方法研究

許艷秋，王廣成，謝樹林，陳丙坤，吳春先，高立明

(四川省農藥檢定所，成都 610041)

甲噻誘胺，化學名稱N-(5-甲基-1,3-噻唑-2-基)-4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-甲酰胺，CAS號：908298-37-3，分子式：C8H8N4OS2，結構式見圖1，是由南開大學創(chuàng)制開發(fā)的植物誘導抗病激活劑，其作用機制為誘導植物自身產生廣譜的抗病活性[1-2]。此物質主要用于防治病原真菌、細菌和病毒等引起的多種作物病害，尤其是對水稻稻瘟病、煙草病毒病、黃瓜細菌性角斑病和黃瓜霜霉病等作物病害有一定的防治效果[2-4]和很好的誘導抗病效果[4-6]。

目前，關于甲噻誘胺的殘留分析方法已有專利報道[7]，但甲噻誘胺原藥的分析檢測方法尚未見公開報道。因此，本文采用高效液相色譜儀建立了一種測定甲噻誘胺原藥質量分數的定量分析方法，具有操作快速、簡便的特點，精密度和準確度均能滿足定量分析的要求，可用于甲噻誘胺生產中的質量控制及其相關分析測試研究。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑和試劑

甲噻誘胺標準品，質量分數99.0% (廣安利爾化學有限公司)；甲噻誘胺原藥，質量分數96.46% (廣安利爾化學有限公司)；甲醇，色譜純(飛世爾科技公司)；磷酸，分析純(四川西隴化工有限公司)；超純水，自制。

1.2 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀配DAD檢測器(美國安捷倫科技有限公司)；AB204-S電子天平(瑞士梅特勒-托利多)；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm。

1.3 液相色譜操作條件

色譜柱為250 mm×4.6 mm (i.d.)不銹鋼柱，內填ZORBAX SB-C18，5.0 μm填充物；流動相為甲醇+0.1%磷酸水溶液(60∶40，體積比)，流速為1.0 mL/min；色譜柱溫度為30 ℃；檢測波長為265 nm；進樣體積為3.0 μL，采用外標法以峰面積定量。在該色譜條件下，甲噻誘胺保留時間約為5.8 min。典型色譜圖見圖1。

圖1 相同條件下甲噻誘胺標樣和原藥樣品的液相色譜圖

1.4 樣品準備

準確稱取(萬分之一天平)甲噻誘胺標準品0.05 g于50.00 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀釋后，定容至刻度線，搖勻后作標準樣品溶液儲存待用。另稱取甲噻誘胺原藥樣品0.05 g，采用同樣方法用甲醇溶液并定容至50.00 mL，作待測樣品溶液。

1.5 進樣分析

按上述儀器條件運行液相色譜，當信號基線保持平穩(wěn)且無明顯波動時，取用標準樣品溶液進樣分析，至連續(xù)2次進樣檢測的信號值變化小于1.5%后，以標準樣品、待測樣品、待測樣品、標準樣品的順序對甲噻誘胺含量進行測定。

1.6 結果計算

利用色譜工作站分別對標樣和待測樣中甲噻誘胺的峰響應信號面積進行積分，并將所得結果平均后，按下列算式計算待測樣中的甲噻誘胺質量分數ω(%)：

式中：A1、A2分別為標準樣品中和待測樣品前后兩針甲噻誘胺峰面積的平均值；m1、m2分別為稱取的甲噻誘胺標準品和待測樣品的質量(g)；ωs為標準品中甲噻誘胺的純度(%)。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

采用二極管陣列檢測器(DAD)，在210~400 nm吸收波長范圍內對甲噻誘胺標樣進行光譜掃描，結果顯示，甲噻誘胺在345 nm附近有最大吸收，在265 nm也有較大吸收，結合出峰峰形，選擇265 nm作為本方法的檢測波長。

2.2 流動相的選擇

流動相采用有機相和水相按一定比例配合組成，其中甲醇作有機相部分，水相部分在純水或0.1%磷酸水溶液中選擇。在2種不同的水相下分別對甲噻誘胺標樣進行預分析試驗，試驗發(fā)現0.1%磷酸水溶液有利于改善甲噻誘胺的峰形與分離效果。調節(jié)流動相中甲醇和磷酸水溶液的比例，當其體積比為60∶40，流速為1.0 mL/min時，甲噻誘胺得到了良好的分離。

2.3 分析方法的線性相關性

配制5個濃度分別為0.429 0、0.801 9、1.029 6、1.237 5、2.162 2 mg/mL的甲噻誘胺標準溶液，按照1.3節(jié)色譜條件進行測定。以甲噻誘胺的質量濃度為自變量，相應的峰面積為因變量，進行線性回歸分析，結果見圖2，在試驗質量濃度范圍內，甲噻誘胺的質量濃度與信號響應值之間呈現良好的線性關系，線性方程為y=4 977.3x+46.371，相關系數(R2)為1.000 0。

圖2 線性相關試驗的線性回歸圖

2.4 分析方法精密度

對同一原藥樣品取樣5次進行色譜分析，計算其中甲噻誘胺的質量分數，試驗結果見表1?？梢?，該方法的精密度符合分析的基本要求。

表1 精密度計算數據

2.5 方法準確度

稱取已知質量分數的甲噻誘胺原藥樣品(由精密度數據計算獲得) 5份，分別加入一定量的甲噻誘胺標準樣品，配制成溶液后按1.3節(jié)色譜條件進樣分析，計算回收率，結果見表2?？梢?，本方法的回收率范圍均符合CIPAC的基本要求。

表2 分析方法的準確度試驗結果

3 結 論

本文建立了一種高效液相色譜檢測甲噻誘胺原藥中有效成分含量的分析方法。通過該方法的線性、 精密度和準確度試驗證實該方法具備對甲噻誘胺良好的分析效果，可用于對甲噻誘胺及其相關產品的質量控制。