血清 LXA4、Tim-1、NF-κB 表達(dá)變化在過敏性紫癜早期診斷及病情評估中的應(yīng)用價值

譚微，鄒佳麗，陳婷，劉文麗，周瓊，楊金婷，唐艷

（攀枝花市中心醫(yī)院，四川 攀枝花 617067）

過敏性紫癜是兒童時期較常見的變態(tài)反應(yīng)性疾病之一，臨床主要表現(xiàn)為非血小板減少性紫癜、關(guān)節(jié)腫痛、腹痛及腎臟受累等，隨病情發(fā)展可出現(xiàn)紫癜性腎炎，大多患兒預(yù)后良好，若患兒病情遷延，病理類型較為嚴(yán)重，可發(fā)展為慢性腎炎，嚴(yán)重者甚至可造成腎功能衰竭，威脅患兒生存質(zhì)量[1-4]。目前，過敏性紫癜確切病因、發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，臨床多認(rèn)為在環(huán)境因素影響下，凝血纖溶功能異常、基因多態(tài)性、遺傳易感性及多種炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子廣泛參與下，機(jī)體細(xì)胞及體液免疫失衡誘發(fā)過敏性紫癜[5-6]。脂氧素（LX）A4作為一種內(nèi)源性抗炎脂質(zhì)介質(zhì)，在炎性反應(yīng)消退過程中發(fā)揮重要作用[7-8]；T細(xì)胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白（Tim）-1為輔助性T細(xì)胞（Th）1/Th2特異性表面標(biāo)志之一Tim家族成員，參與T細(xì)胞分化及免疫調(diào)節(jié)[9-10]；核轉(zhuǎn)錄因子（NF）-κB屬于Rel家族，可誘導(dǎo)趨化因子、細(xì)胞因子、黏附分子蛋白表達(dá)，在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及急性期反應(yīng)中有重要作用[11-12]。本研究通過酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測過敏性紫癜患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平，探討其對過敏性紫癜發(fā)病及病情進(jìn)展中的可能作用。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核同意，選取2017年5月—2019年4月我院初診過敏性紫癜患兒76例作為觀察組，均為首次發(fā)病，且病程在1周以內(nèi)，未經(jīng)免疫抑制劑、腎上腺糖皮質(zhì)激素或抗組胺藥等藥物治療，參照《小兒過敏性紫癜診療指南》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[13]，并經(jīng)臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查或病理活檢確診，排除同時合并皮肌炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、天皰瘡等自身免疫性疾?。话橛心[瘤或其他嚴(yán)重系統(tǒng)疾??；患有其他過敏性疾病；其中男35例，女41例，年齡3～13歲，平均（7.84±2.41）歲；病情程度：輕度26例，中度28例，重度22例。另選取同期來我院接受健康體檢的無自身免疫性疾病及家族史、無過敏性疾病史的健康兒童76例作為對照組，其中男37例，女39例，年齡3～14歲，平均（8.15±3.26）歲。2組在性別、年齡方面相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究受檢者及監(jiān)護(hù)人知情同意本研究。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 無菌條件下，所有受檢者均抽取3mL空腹外周靜脈血，置于普通離心管內(nèi)，3000r/min，離心半徑為8 cm，離心5 min，血清置入Eppendorf管內(nèi)，儲存于-80℃冰箱內(nèi)待檢。

1.2.2 血清指標(biāo)監(jiān)測 采用雙抗體夾心ELISA檢測血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平，試劑盒購自上海西塘生物科技有限公司，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，并以酶標(biāo)測定儀（北京普析儀器有限責(zé)任公司）于波長450 nm處測定各個實(shí)驗(yàn)標(biāo)本光密度（OD）值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)一步測量每個標(biāo)本細(xì)胞因子濃度水平。

1.3 觀察指標(biāo) ①對比2組血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平；②采用受試者工作曲線（ROC）評估血清指標(biāo)對過敏性紫癜的診斷價值；③對比不同病情程度患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平；④Spearman分析血清指標(biāo)水平與過敏性紫癜患兒病情程度的相關(guān)性；⑤對過敏性紫癜患兒密切隨訪6個月，6個月時根據(jù)患兒是否存在腎臟受累分為紫癜腎組與非紫癜腎組，對比紫癜腎與非紫癜腎患兒血清指標(biāo)水平與24h尿蛋白定量；⑥Spearman分析血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平與24 h尿蛋白定量的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用 n（%）表示，卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料用（±s）表示，t檢驗(yàn)，采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析，并以采用ROC分析診斷價值，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平 觀察組血清 LXA4、Tim-1、NF-κB 水平高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 2組患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平對比 （±s）

表1 2組患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平對比 （±s）

組別 n LXA4（nmol/L） Tim-1（ng/L） NF-κB（μmol/L）觀察組 76 67.78±7.86 284.69±11.62 44.67±10.52對照組 76 53.21±6.85 122.41±14.85 18.36±8.94 t 12.183 75.028 16.614 P＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 ROC評估血清指標(biāo)對過敏性紫癜的診斷價值分別繪制各指標(biāo)單一、聯(lián)合診斷過敏性紫癜的ROC曲線，顯示各指標(biāo)聯(lián)合診斷過敏性紫癜的曲線下面積（AUC）為 0.899（95%CI為 0.839～0.942），高于血清LXA4、Tim-1、NF-κB單一預(yù)測的AUC面積0.806（95%CI為 0.734～0.865）、0.774（95%CI為 0.699～0.838）、0.817（95%CI為 0.746～0.875），采取各指標(biāo)聯(lián)合診斷過敏性紫癜的敏感度為86.84%，特異度為80.26%。見圖 1、2。

圖1 單一指標(biāo)診斷

圖2 聯(lián)合指標(biāo)診斷

2.3 不同病情程度患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平 不同病情程度過敏性紫癜患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同病情程度患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平對比 （±s）

表2 不同病情程度患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平對比 （±s）

組別 n LXA4（nmol/L） Tim-1（ng/L） NF-κB（μmol/L）輕度 26 59.63±7.12 224.96±11.26 34.29±9.87中度 28 66.24±8.12 280.37±13.95 42.31±10.17重度 22 79.37±8.51 360.74±14.16 59.94±11.34 F 37.940 637.064 37.230 P＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.4 血清指標(biāo)水平與過敏性紫癜患兒病情程度的相關(guān)性 過敏性紫癜患兒血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平與其病情程度呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），見表3。

表3 血清指標(biāo)水平與過敏性紫癜患兒病情程度的相關(guān)性

2.5 紫癜腎與非紫癜腎組血清指標(biāo)水平與24 h尿蛋白定量 紫癜腎組血清LXA4水平低于非紫癜腎組，Tim-1、NF-κB、24 h 尿蛋白定量水平高于非紫癜腎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 4。

表4 紫癜腎與非紫癜腎組血清指標(biāo)水平與24 h尿蛋白定量對比 （±s）

表4 紫癜腎與非紫癜腎組血清指標(biāo)水平與24 h尿蛋白定量對比 （±s）

2 4 h尿蛋白定量（m g）紫癜腎組 2 3 5 7.9 6±6.9 2 4 1 9.3 7±1 3.2 5 4 7.8 9±8.0 2 1 8 4 8.6 2±2 6 0.8 7非紫癜腎組 5 3 7 2.0 4±8.1 6 2 2 6.2 4±1 2.5 9 4 3.2 1±7.3 5 6 2 5.9 7±2 7 7.8 6 t 7.2 1 8 6 0.4 7 6 2.4 8 1 1 7.9 4 2 P＜0.0 0 1 ＜0.0 0 1 0.0 1 5 ＜0.0 0 1組別 n L X A 4（n m o l/L）T i m-1（n g/L）N F-κ B（μ m o l/L）

2.6 血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平與24 h尿蛋白定量的相關(guān)性 紫癜腎患兒血清LXA4水平與24 h尿蛋白定量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.474，P＜0.001），Tim-1、NF-κB水平均與24 h尿蛋白定量呈正相關(guān)關(guān)系（r1=0.591，r2=0.575，P＜0.001）。見圖 3～5。

圖3 LXA4水平與24 h尿蛋白定量相關(guān)性

圖4 Tim-1水平與24 h尿蛋白定量相關(guān)性

圖5 NF-κB水平與24 h尿蛋白定量相關(guān)性

3 討論

過敏性紫癜作為一種侵犯皮膚及其他器官毛細(xì)血管、細(xì)小動脈的非血小板減少性過敏性血管炎，好發(fā)于學(xué)齡前兒童，據(jù)相關(guān)調(diào)查顯示，約75%過敏性紫癜患兒為10歲以下兒童，嚴(yán)重影響兒童成長發(fā)育及生存質(zhì)量[14-15]。近年來，大量研究證明，免疫炎性反應(yīng)在過敏性紫癜發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用[16-17]。

LXA4屬于LXs家族成員，大量研究表明，其在支氣管肺炎、關(guān)節(jié)炎、腎臟疾病等多種疾病發(fā)病及病情進(jìn)展中發(fā)揮重要抗炎及促炎消退作用[18-19]。本研究亦顯示，過敏性紫癜患兒血清LXA4水平高于對照組，且隨病情加重，血清LXA4水平隨之升高，提示過敏性紫癜患兒血管炎性反應(yīng)過程中，LXA4合成原料花生四烯酸代謝異常增加，致使血清中LXA4水平升高。紫癜性腎炎主要病理變化為腎小球毛細(xì)血管壁及系膜區(qū)大量沉積以免疫球蛋白（Ig）A為主的免疫復(fù)合物，進(jìn)而引起血管炎性反應(yīng)變化，造成蛋白尿及血尿。本研究中紫癜腎患兒血清LXA4水平低于非紫癜腎患兒，提示紫癜腎病程中抗炎介質(zhì)LXA4合成不足與患兒腎臟損傷發(fā)生密切相關(guān)，提示LXA4的抗炎機(jī)制可能減輕紫癜腎的腎臟損傷程度，監(jiān)測其水平變化有助于預(yù)測過敏性紫癜患者腎臟損害。

Tim-1作為Tim基因家族重要成員，其分子可選擇性表達(dá)在CD4+T細(xì)胞表面，主要表達(dá)在分化后的Th2細(xì)胞上，結(jié)合配體后，可誘導(dǎo)Th2活化增殖，促進(jìn)細(xì)胞因子釋放、誘導(dǎo)Th2型免疫應(yīng)答，其可通過某種途徑調(diào)控免疫系統(tǒng)，有免疫調(diào)節(jié)作用。大量研究指出，過敏性紫癜患兒細(xì)胞、體液免疫失衡，主要表現(xiàn)為免疫功能低下，而T淋巴細(xì)胞作為參與細(xì)胞免疫的主要細(xì)胞，與過敏性紫癜發(fā)生、發(fā)展有一定相關(guān)性[20-21]。本研究中，觀察組患兒血清Tim-1水平明顯高于對照組，且隨患兒病情程度增加，其水平隨之升高，提示Tim可能參與過敏性紫癜發(fā)生、發(fā)展過程。另有研究表明，過敏性紫癜患兒體內(nèi)存在T細(xì)胞功能紊亂，Th2優(yōu)勢活化、Th1/Th2失衡，促進(jìn)IgA、IgE過度分泌，從而介導(dǎo)紫癜性腎炎[22]。本研究中紫癜腎患兒血清Tim-1水平明顯高于非紫癜腎，且Tim-1表達(dá)水平與患兒24 h尿蛋白定量呈正相關(guān)關(guān)系，充分證實(shí)上述觀點(diǎn)，說明Tim-1可作為判斷過敏性紫癜患兒預(yù)后的預(yù)警指標(biāo)。

NF-κB被認(rèn)為是炎性反應(yīng)中心環(huán)節(jié)，參與炎性細(xì)胞因子表達(dá)及炎性反應(yīng)延續(xù)、擴(kuò)大。本研究檢測過敏性紫癜患兒血清NF-κB水平，發(fā)現(xiàn)觀察組血清NF-κB水平高于對照組，且血清NF-κB水平與患兒病程程度呈正相關(guān)關(guān)系，推測NF-κB參與過敏性紫癜小血管炎性反應(yīng)，且其表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。金汶等[23]提出，NF-κB可通過調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子分泌及細(xì)胞分化協(xié)同參與過敏性紫癜發(fā)病過程。進(jìn)一步研究表明，NF-κB作為細(xì)胞內(nèi)的一種重要核轉(zhuǎn)錄因子，可通過調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞發(fā)育、成熟、抗原提呈及刺激Th細(xì)胞分化等功能參與過敏性紫癜發(fā)病過程[24]。本研究通過對比紫癜腎與非紫癜腎NF-κB水平，發(fā)現(xiàn)紫癜腎患兒血清NF-κB水平高于非紫癜腎患兒，且與24 h尿蛋白定量水平呈正相關(guān)關(guān)系，推測原因可能是NF-κB水平越高，促使白細(xì)胞介素（IL）-1B、腫瘤壞死因子（TNF）-α、IL-6、IL-8等多種細(xì)胞因子分泌增加，致使炎性反應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大，最終導(dǎo)致更為嚴(yán)重的腎小球炎性損傷改變。提示監(jiān)測過敏性紫癜患兒NF-κB水平，有助于預(yù)測患兒腎臟損傷。

此外，本研究通過ROC評估血清LXA4、Tim-1、NF-κB對過敏性紫癜的診斷價值，發(fā)現(xiàn)血清LXA4、Tim-1、NF-κB聯(lián)合診斷過敏性紫癜的AUC為0.899（95%CI為0.839～0.942），明顯高于單一指標(biāo)診斷，敏感度為86.84%，特異度為80.26%，提示臨床同時監(jiān)測血清LXA4、Tim-1、NF-κB水平，有助于提高過敏性紫癜診斷價值，為臨床治療提供依據(jù)。

綜上，過敏性紫癜患兒血清 LXA4、Tim-1、NF-κB呈異常高表達(dá)狀態(tài)，表達(dá)水平隨患者病情加重而升高，且在過敏性紫癜早期診斷及病情評估方面有重要價值。