蛹蟲草胞外多糖的制備、結(jié)構(gòu)分析及其免疫活性

于 悅，陳 卓，王亞非，張明澤，王亞慧，艾 楠，沈明浩,*，姜 斌,*

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，吉林 長春 130118；2.訥河市人民醫(yī)院，黑龍江 訥河 161300）

蛹蟲草俗名蟬花，為子囊菌門、肉座菌目、蟲草菌科的一類食藥兼用的蟲生真菌[1-2]，我國早期炮制著作——《雷公炮炙論》中記載蛹蟲草具有“主小兒天吊、驚癇、瘈疭、夜啼、心悸”等療效。國內(nèi)外研究證實(shí)蛹蟲草中含有多糖、蟲草酸、甘露醇、麥角甾醇及核苷類等生物活性物質(zhì)，具備抗氧化、提高機(jī)體免疫力和降血糖等功效[3-6]，應(yīng)用領(lǐng)域遍及食品、藥品工業(yè)等，不僅用于餐桌上的健康佳肴，還已開發(fā)出蛹蟲草多糖酸奶、口服液和調(diào)味品[7-9]等一系列產(chǎn)品。由于其營養(yǎng)價(jià)值高、價(jià)格低廉，作為新一代食品原材料，其活性功能有待深入開發(fā)并加以利用。

近年來，蛹蟲草多糖由于產(chǎn)量高、生物活性顯著而成為研究熱點(diǎn)。其中蛹蟲草胞外多糖來源穩(wěn)定、發(fā)酵周期短、不受地域限制并易于規(guī)模生產(chǎn)，已在開發(fā)增強(qiáng)免疫功能的健康食品中得到了廣泛的應(yīng)用。目前研究顯示，從蛹蟲草中提取到的胞外多糖分子質(zhì)量范圍為1.56～36.00 kDa[10-12]，具有清除自由基、誘導(dǎo)癌細(xì)胞分化、抗腫瘤、抗肝細(xì)胞氧化損傷等生物活性。但目前對蛹蟲草胞外多糖沒有進(jìn)行更加系統(tǒng)的分離純化，且多糖組分對免疫活性調(diào)節(jié)的機(jī)制研究還鮮見報(bào)道，對開發(fā)和利用蛹蟲草胞外多糖資源造成了一定的限制。所以本研究在闡明蛹蟲草胞外多糖的提取純化工藝及對多糖結(jié)構(gòu)分析的基礎(chǔ)上，探究其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，對蛹蟲草胞外多糖資源的開發(fā)具有積極意義。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

清潔級BALB/c雄鼠（體質(zhì)量（21±2）g），購自遼寧長生生物技術(shù)有限公司，許可證編號(hào)：SCXK（遼）2020-0001。

蛹蟲草菌株CICC 14014由中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供，甘油于－20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

DEAE-Sephacel陰離子交換柱、Sephadex G-200葡聚糖凝膠柱、MTS細(xì)胞增殖檢測試劑盒 美國Sigma公司；白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-2、IL-6、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α、干擾素（interferon，IFN）-γ、免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）G、IgM、IgA試劑盒 江萊生物技術(shù)有限公司；異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記的抗小鼠白細(xì)胞分化抗原3（CD3+）、別藻藍(lán)蛋白（allophycocyanin，APC）標(biāo)記的抗小鼠白細(xì)胞分化抗原19（CD19+） 美國eBioscience公司；右旋糖酐分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)套（批號(hào)：140637～646-201203） 中國食品藥品檢定研究院。

1.2 儀器與設(shè)備

UVmini-1280紫外分光光度計(jì)、IRAffinity-1傅里葉變換紅外光譜儀、LC-20A高效液相色譜儀 日本島津公司；CX31光學(xué)顯微鏡 日本奧林巴斯公司；LSRFortessa流式細(xì)胞儀 美國BD公司；MuLtiskan FC酶標(biāo)儀 美國賽默飛世爾科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 蛹蟲草胞外多糖的制備與純化

種子液培養(yǎng)基：取20 g馬鈴薯汁、2 g葡萄糖、1.5 g蛋白胨，溶解于100 mL蒸餾水中；固體培養(yǎng)基另加1.5 g瓊脂；用于發(fā)酵的液體培養(yǎng)基另加150 mg KH2PO4和MgSO4及10 mg VB1；以上pH值均為6.8。

使用固體培養(yǎng)基活化蛹蟲草菌株，于24 ℃培養(yǎng)箱中活化7 d，并從中取出1 cm2菌株到液體培養(yǎng)基，在同等溫度150 r/min的搖床中培養(yǎng)3 d獲取種子液，再將100 mL種子液轉(zhuǎn)接至1 L發(fā)酵培養(yǎng)基中，按如上條件繼續(xù)培養(yǎng)5 d，取發(fā)酵液4 000 r/min離心20 min，收集上清液加3 倍95%乙醇溶液沉淀12 h，先使用活性炭除去色素，再采用Sevae法除蛋白[13]，然后通過截留分子質(zhì)量為3 500 Da的透析袋分離小分子雜質(zhì)，最后采用DEAE-Sephacel層析柱（3.6 cm×30 cm）進(jìn)行分離，上樣質(zhì)量濃度為20 mg/mL，分別使用蒸餾水和0.1、0.3、0.5 mol/L NaCl溶液進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0 mL/min。苯酚-硫酸法跟蹤檢測洗脫液，收集多糖洗脫峰，選擇多糖含量最高的組分，采用Sephadex G-200層析柱（1.5 cm×90 cm）[14]進(jìn)一步純化，上樣質(zhì)量濃度為5 mg/mL，洗脫劑為蒸餾水，流速為0.5 mL/min。苯酚-硫酸法跟蹤檢測洗脫液的多糖質(zhì)量濃度，收集多糖洗脫峰，濃縮、凍干后蛹蟲草胞外多糖組分，制得蛹蟲草胞外多糖純品。

1.3.2 蛹蟲草胞外多糖的結(jié)構(gòu)分析

1.3.2.1 多糖含量測定

采用硫酸-苯酚法，通過繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線對蛹蟲草胞外多糖進(jìn)行含量測定[15]。

1.3.2.2 多糖分子質(zhì)量測定

應(yīng)用高效液相色譜法測定蛹蟲草胞外多糖分子質(zhì)量[16]。采用示差折光檢測器和Shodex OHpak SB-803 HQ色譜柱（8.0 mm×300 mm，6 μm），設(shè)置柱溫40 ℃，進(jìn)樣量20 μL，流動(dòng)相為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.9% NaCl溶液，流速為1.0 mL/min。取右旋糖酐分子質(zhì)量D0、D1、D2、D3、D4對照品配制溶液（質(zhì)量濃度5.0 mg/mL）過0.45 μm濾膜后上機(jī)，測定其保留時(shí)間。根據(jù)保留時(shí)間與分子質(zhì)量，由GPC軟件計(jì)算回歸方程。同法測定多糖溶液（質(zhì)量濃度2.0 mg/mL）的出峰時(shí)間，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蛹蟲草胞外多糖分子質(zhì)量。

1.3.2.3 紅外光譜分析

將多糖與已恒質(zhì)量的溴化鉀按質(zhì)量比1∶100混合研磨、壓片，利用傅里葉變換紅外光譜儀在4 000～400 cm－1范圍內(nèi)掃描[17]。

1.3.3 蛹蟲草胞外多糖的免疫活性研究

1.3.3.1 免疫損傷小鼠的模型構(gòu)建及分組

小鼠隨機(jī)均分6 組，空白組不建模，其他5 組腹腔注射40 mg/kgbw的環(huán)磷酰胺，連續(xù)5 d，以構(gòu)建小鼠免疫損傷模型[18]。5 d后隨機(jī)抽取各組小鼠稱質(zhì)量并制備脾臟切片，以體質(zhì)量明顯降低，切片中白、紅髓分界模糊，且白髓中脾小體結(jié)構(gòu)分散為造模成功?？瞻缀湍Ｐ徒M灌胃生理鹽水；陽性組灌胃劑量為25 mg/kgbw的匹多莫德；蛹蟲草胞外多糖低、中、高劑量組灌胃劑量各為25、50、100 mg/kgbw蛹蟲草胞外多糖，實(shí)驗(yàn)期21 d。

1.3.3.2 蛹蟲草胞外多糖對免疫損傷小鼠體質(zhì)量變化及免疫器官指數(shù)的測定

實(shí)驗(yàn)期間分別在第1、5、9、13、17、21天稱量小鼠體質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取小鼠脾臟、胸腺，稱質(zhì)量，并按公式（1）計(jì)算免疫器官指數(shù)[18]。

1.3.3.3 蛹蟲草胞外多糖對小鼠脾臟組織形態(tài)的影響

無菌取脾，利用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛固定包埋后切片（厚度為5 μm）進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察組織形態(tài)變化，并用CCDNC6051攝影系統(tǒng)拍照[19]。

1.3.4 蛹蟲草胞外多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

1.3.4.1 MTS法檢測小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖率

冰上無菌取脾制備脾細(xì)胞懸液[20]。刀豆蛋白（concanavalin A，ConA）實(shí)驗(yàn)組（誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖）加180 μL脾細(xì)胞懸液（1.5×106個(gè)/mL）和20 μL終質(zhì)量濃度為5 μg/mL的ConA，脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）實(shí)驗(yàn)組（誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖）加180 μL脾細(xì)胞懸液（1.5×106個(gè)/mL）和20 μL終質(zhì)量濃度為10 μg/mL的LPS，空白對照組加200 μL脾細(xì)胞懸液（1.5×106個(gè)/mL），每組做3個(gè)復(fù)孔，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)36 h，再加10 μL MTS試劑繼續(xù)在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 h，于490 nm波長處測定吸光度，按公式（2）計(jì)算細(xì)胞增殖率[21]。

1.3.4.2 流式細(xì)胞儀法檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞中T、B淋巴細(xì)胞占比

取100 μL脾淋巴細(xì)胞懸液（2×106個(gè)/mL）置于流式細(xì)胞儀測試管中，再依次加入5 μL FITC CD3+（標(biāo)記T淋巴細(xì)胞）和5 μL APC CD19+抗體（標(biāo)記B淋巴細(xì)胞），4 ℃避光放置30 min。用流式細(xì)胞儀檢測T、B細(xì)胞在脾臟細(xì)胞中的占比，采用FlowJo VX軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析[22]。

1.3.5 蛹蟲草胞外多糖對小鼠血清細(xì)胞因子水平的影響

眼球采血，2 000 r/min離心15 min后取上清液，檢測細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-6質(zhì)量濃度，具體按試劑盒操作。

1.3.6 蛹蟲草胞外多糖對小鼠血清免疫球蛋白水平的影響

取各組小鼠血清檢測免疫球蛋白IgG、IgM和IgA含量，具體按試劑盒操作。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

2 結(jié)果與分析

2.1 蛹蟲草胞外多糖的質(zhì)量濃度

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.01x－0.010 2，R2=0.999 2，線性關(guān)系良好。由回歸方程計(jì)算出蛹蟲草胞外多糖質(zhì)量濃度為3.15 mg/mL。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 1 Standard curve for glucose determination

2.2 蛹蟲草胞外多糖的純化結(jié)果

采用DEAE-Sephacel層析柱聯(lián)合Sephadex G-200層析柱對蛹蟲草胞外多糖進(jìn)行純化，如圖2所示，在第24～30管得到了一個(gè)完整對稱的吸收峰，經(jīng)計(jì)算（帶入2.1節(jié)中標(biāo)準(zhǔn)曲線方程），得到多糖的純度為86.13%。

圖2 蛹蟲草胞外多糖純化洗脫曲線Fig. 2 Elution curve of Cordyceps militaris exopolysaccharide

2.3 蛹蟲草胞外多糖的分子質(zhì)量

由圖3可見，蛹蟲草胞外多糖溶液相色譜圖呈現(xiàn)一個(gè)銳利對稱峰，將保留時(shí)間（X）16.686 min帶入回歸方程lgmw=－0.17X3+0.85X2－14.75X+90.48（R2=0.999 4）計(jì)算得出蛹蟲草胞外多糖的分子質(zhì)量為3.67 kDa。

圖3 蛹蟲草胞外多糖的高效液相色譜圖Fig. 3 HPLC chromatogram of the exopolysaccharide from Cordyceps militaris

2.4 蛹蟲草胞外多糖的紅外光譜分析

如圖4所示，3 363.86 cm－1處為氫鍵締合的O—H伸縮振動(dòng)峰[23]；2 924.09 cm－1和2 895.15 cm－1處為次甲基的C—H伸縮振動(dòng)峰[24]；以上是糖類特征吸收峰，由此推斷蛹蟲草胞外多糖符合糖類的一般結(jié)構(gòu)特征。1 404 cm－1處為C—H的彎曲振動(dòng)峰[25]；1 080.14 cm－1處出現(xiàn)吸收峰表明有吡喃糖環(huán)的存在，說明結(jié)構(gòu)中可能存在α-(1→6)糖苷鍵[26]；844.82 cm－1處是β-糖苷鍵的特征峰[27]。綜上所述，蛹蟲草胞外多糖中既有α-糖苷鍵構(gòu)型，同時(shí)又有β-糖苷鍵構(gòu)型的吡喃糖存在。

圖4 蛹蟲草胞外多糖的傅里葉變換紅外光譜圖Fig. 4 FTIR spectrum of the exopolysaccharide from Cordyceps militaris

2.5 蛹蟲草胞外多糖對免疫抑制小鼠體質(zhì)量及免疫器官指數(shù)的影響

如圖5A所示，在實(shí)驗(yàn)第5天，發(fā)現(xiàn)造模小鼠體質(zhì)量急劇降低，與未注射環(huán)磷酰胺的小鼠體質(zhì)量差異極顯著（P＜0.01），表明造模成功。治療期間蛹蟲草胞外多糖劑量組小鼠體質(zhì)量逐漸增加，最終恢復(fù)至與空白組水平基本相近，表明蛹蟲草胞外多糖可緩解因環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的小鼠體質(zhì)量減輕，具有一定的免疫調(diào)節(jié)能力。

免疫器官指數(shù)如圖5B所示，與空白組相比，模型組小鼠的胸腺和脾臟指數(shù)極顯著降低（P＜0.01），可見環(huán)磷酰胺對小鼠的胸腺和脾臟具有嚴(yán)重的損傷作用。經(jīng)給藥后，陽性組小鼠基本恢復(fù)到與空白組無顯著差異，蛹蟲草胞外多糖組隨劑量增加免疫器官指數(shù)呈逐漸增加的趨勢，高劑量蛹蟲草胞外多糖組小鼠免疫器官指數(shù)與空白組無顯著差異，由此說明蛹蟲草胞外多糖具有改善脾臟和胸腺損傷的作用。

圖5 蛹蟲草胞外多糖對小鼠體質(zhì)量和免疫器官指數(shù)的影響Fig. 5 Effect of the extracellular polysaccharide from Cordyceps sinensis on body mass and immune organ indexes in immunosuppressed mice

2.6 蛹蟲草胞外多糖對小鼠脾臟組織形態(tài)學(xué)的影響

如圖6所示，模型組小鼠脾臟紅髓與白髓之間邊界不分明，淋巴鞘結(jié)構(gòu)疏松（圖6B），與葉蕾[28]闡述的現(xiàn)象一致，證明造模成功。空白組（圖6A）及陽性組（圖6C）小鼠紅、白髓分界明顯，白髓中存在較多結(jié)構(gòu)完整的脾小體，紅髓中脾索整體相連，脾竇明顯。低劑量蛹蟲草胞外多糖組紅髓與白髓之間邊界不分明（圖6D）。中劑量蛹蟲草胞外多糖組（圖6E）和高劑量蛹蟲草胞外多糖組（圖6F）白髓部分變得更清晰、邊緣區(qū)增厚、脾小體結(jié)構(gòu)完整，組織形態(tài)逐漸恢復(fù)至與空白組和陽性組接近，這表明蛹蟲草胞外多糖可有效緩解由環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的脾組織結(jié)構(gòu)異常。

圖6 蛹蟲草胞外多糖對小鼠脾臟組織形態(tài)學(xué)的影響Fig. 6 Effect of the exopolysaccharide from Cordyceps militaris on morphology of spleen tissues in immunosuppressed mice

2.7 蛹蟲草胞外多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞的影響

2.7.1 小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖率

小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖率見圖7，與空白組相比，模型組小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖率均極顯著降低（P＜0.01），證明環(huán)磷酰胺對鼠T、B淋巴細(xì)胞有嚴(yán)重的損害作用。經(jīng)給藥后，蛹蟲草胞外多糖劑量組的B淋巴細(xì)胞增殖率升高，并隨給藥劑量增加，呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系，高劑量組效果最佳；而蛹蟲草胞外多糖劑量組的T淋巴細(xì)胞增殖率隨著給藥劑量的增加呈逐漸下降趨勢，但低劑量組與模型組相比對T淋巴細(xì)胞的增殖有一定的促進(jìn)作用。由此推測蛹蟲草胞外多糖對B淋巴細(xì)胞的增殖有促進(jìn)效果，對T淋巴細(xì)胞增殖存在低劑量促進(jìn)高劑量抑制的現(xiàn)象。

圖7 蛹蟲草胞外多糖對小鼠T、B細(xì)胞增殖率的測定Fig. 7 Proliferation rates of T and B cells in mice administered with the extracellular polysaccharide from Cordyceps militaris

2.7.2 小鼠脾淋巴細(xì)胞中T、B細(xì)胞占比

由圖8可知，模型組小鼠脾臟T、B淋巴細(xì)胞占比極顯著低于空白組（P＜0.01），說明環(huán)磷酰胺對小鼠T、B細(xì)胞損傷作用嚴(yán)重。與模型組相比，低、中、高劑量蛹蟲草胞外多糖組小鼠T淋巴細(xì)胞占比分別增加了（11.08±0.21）%、（23.84±0.32）%和（4.97±0.17）%，B淋巴細(xì)胞占比分別增加了（18.45±0.23）%、（31.21±0.28）%和（40.51±0.32）%，可見，隨蛹蟲草胞外多糖劑量增加，B淋巴細(xì)胞占比升高，而T淋巴細(xì)胞占比先增加后降低，說明蛹蟲草多糖可有效促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖。

圖8 蛹蟲草胞外多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞中T、B細(xì)胞占比的影響Fig. 8 Effect of the extracellular polysaccharide from Cordyceps militaris on the proportions of T and B cells in spleen lymphocytes of mice

2.8 蛹蟲草胞外多糖對小鼠血清中細(xì)胞因子水平的影響

如圖9所示，模型組小鼠細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6、TNF-α質(zhì)量濃度均極顯著低于空白組（P＜0.01），證明造模成功。隨給藥劑量增加，蛹蟲草胞外多糖劑量組IL-6和TNF-α的質(zhì)量濃度逐漸遞增至正常水平，而IL-2和IFN-γ的質(zhì)量濃度隨給藥劑量增加呈下降趨勢?？梢娪枷x草胞外多糖可有效調(diào)節(jié)環(huán)磷酰胺所致的細(xì)胞因子分泌異常。

圖9 蛹蟲草胞外多糖對小鼠血清細(xì)胞因子質(zhì)量濃度的影響Fig. 9 Effect of the extracellular polysaccharide from Cordyceps militaris on cytokine levels in serum of mice

2.9 蛹蟲草胞外多糖對免疫抑制小鼠血清中免疫球蛋白水平的影響

如圖10所示，模型組小鼠血清IgG、IgA及IgM質(zhì)量濃度極顯著低于空白組（P＜0.01），可知環(huán)磷酰胺對小鼠血清細(xì)胞因子存在較大影響，蛹蟲草胞外多糖劑量組的IgG、IgA及IgM質(zhì)量濃度隨給藥劑量的增加而遞增，表明蛹蟲草胞外多糖可改善由環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的小鼠免疫球蛋白質(zhì)量濃度降低。

圖10 蛹蟲草胞外多糖對小鼠的血清免疫球蛋白質(zhì)量濃度的影響Fig. 10 Effect of the extracellular polysaccharide from Cordyceps militaris on serum immunoglobulin levels in mice

3 討 論

環(huán)磷酰胺作為一種典型的化療藥物和免疫抑制劑，對治療癌癥具有良好的療效，但在化療過程中可產(chǎn)生惡心、消化道不適、免疫低下和骨髓抑制等諸多不良反應(yīng)[29]。故采用天然食品制備功能性食品或營養(yǎng)佐劑替代化學(xué)或生物合成藥物來預(yù)防和緩解環(huán)磷酰胺所帶來的免疫損傷已成為研究熱點(diǎn)。目前研究顯示，蛹蟲草胞外多糖具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)活性，王永敏等[11]分離得到分子質(zhì)量為3.49×104kDa的蛹蟲草胞外多糖，且其具備調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的活性。本研究從蛹蟲草菌株發(fā)酵液中分離得到3.67 kDa的低分子質(zhì)量多糖，研究表明，隨給藥劑量的增加，蛹蟲草胞外多糖促進(jìn)了B淋巴細(xì)胞的增殖，對T淋巴細(xì)胞的增殖先促進(jìn)后抑制。此結(jié)果表明蛹蟲草胞外多糖改善小鼠免疫功能的作用機(jī)制主要是參與小鼠的體液免疫，進(jìn)而增加小鼠體質(zhì)量，預(yù)防脾臟和胸腺萎縮，此結(jié)果與徐廷萬等[30]的研究結(jié)果一致。

本實(shí)驗(yàn)考察了蛹蟲草胞外多糖對免疫球蛋白分泌水平的影響，結(jié)果表明，蛹蟲草胞外多糖可有效提高血清免疫球蛋白的質(zhì)量濃度，并通過逆轉(zhuǎn)免疫紊亂來維持體內(nèi)平衡，從而增強(qiáng)體液免疫。其中，對IgG和IgM作用顯著，前者在免疫球蛋白中相對含量最高，后者作用于抗感染的初始階段[31]。因此，血清中免疫球蛋白的質(zhì)量濃度可體現(xiàn)機(jī)體的體液免疫功能。其次，本實(shí)驗(yàn)也考察了TNF-α和IL-6的水平，其變化趨勢與免疫球蛋白相似，表明蛹蟲草胞外多糖可以恢復(fù)環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的TNF-α和IL-6水平下降，進(jìn)而改善機(jī)體免疫功能。對細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的水平影響結(jié)果顯示，蛹蟲草胞外多糖低劑量組對其分泌發(fā)揮促進(jìn)作用，中、高劑量組存在一定的抑制作用，水平略有下降，但仍高于模型組水平，可能是因?yàn)镮FN-γ和IL-2主要由Th1細(xì)胞分泌用于介導(dǎo)細(xì)胞免疫。以上研究證明蛹蟲草胞外多糖能有效緩解由環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的免疫功能低下，且主要通過調(diào)節(jié)體液免疫來增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能?？稍谑褂铆h(huán)磷酰胺治療癌癥的過程中，作為免疫增強(qiáng)佐劑以達(dá)到增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的目的，進(jìn)而加快患者術(shù)后恢復(fù)。且由于其具有營養(yǎng)保健功效，還可作為人們?nèi)粘Ｉ钪刑岣呙庖吡Φ谋＝∈称愤M(jìn)行推廣。詳細(xì)的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究論證。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)從蛹蟲草發(fā)酵液中提取得到的蛹蟲草胞外多糖質(zhì)量濃度為3.15 mg/mL，經(jīng)分離純化后得到單一多糖分子質(zhì)量為3.67 kDa，純度可達(dá)86.13%。該多糖可修復(fù)環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的BALB/c小鼠免疫功能損傷，明顯提高免疫器官指數(shù)，能夠有效促使T細(xì)胞（低劑量時(shí)）、B細(xì)胞增殖和IgG、IgA、IgM、TNF-α、IL-6、IL-2、IFN-γ的分泌，免疫調(diào)節(jié)效果顯著。此研究為開發(fā)蛹蟲草發(fā)酵液資源建立了部分理論支撐。