卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系

張欣萍，李恩萍，史天云

（南陽市第一人民醫(yī)院婦科，河南 南陽 473000）

卵巢癌是發(fā)病率僅低于宮頸癌、 子宮內(nèi)膜癌的婦科生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，具有較高病死率[1]。 卵巢癌早期臨床癥狀不典型，患者確診時多為中晚期，腫瘤已擴(kuò)散至盆腔器官，加之術(shù)后腫瘤易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，患者預(yù)后極差[2,3]。 因此，尋找敏感、高效的腫瘤標(biāo)記物對改善卵巢癌患者預(yù)后具有重要的臨床價值。 近年來，國內(nèi)外研究均發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3，MMP3）能夠降解、 重塑細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)了癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移，在結(jié)腸癌、卵巢癌等惡性腫瘤中均呈高表達(dá)[4,5]?；|(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物-3（tissue inhibitors of metalloproteinase-3，TIMP3）能抑制MMP3 活性，影響腫瘤的浸潤及轉(zhuǎn)移，在膽囊癌、卵巢癌等組織中表達(dá)異常[6,7]。 為了揭示血清MMP3、TIMP3 表達(dá)與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系，從而為臨床卵巢癌患者的預(yù)后評估提供參考，本研究選取我院2015年10月-2017年10月收治的74 例卵巢癌患者，探討了血清MMP3、TIMP3 表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年10月-2017年10月收治的74 例卵巢癌患者作為卵巢癌組。 納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[8]中卵巢癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；⑵經(jīng)病理學(xué)證實為卵巢癌；⑶無其他惡性腫瘤；⑷患者簽署知情同意書。 排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并認(rèn)知、血液系統(tǒng)疾病者；⑵腎、肝、肺等多器官功能嚴(yán)重?fù)p傷者；⑶接受內(nèi)分泌治療、放療、化療者；⑷臨床資料不全者。 另取同期于我院接受治療的60 例卵巢囊腫患者作為對照組。 卵巢癌組：年齡37～69歲，平均52.18±7.14歲； 體質(zhì)量指數(shù)19.50～27.85kg/m2，平均23.25±1.56kg/m2。 對照組：年齡36～71歲，平均51.65±6.57歲； 體質(zhì)量指數(shù)19.50～27.85kg/m2，平均23.25±1.56kg/m2。 兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集與保存 卵巢癌組、 對照組均在住院第2d 清晨采集空腹靜脈血約4ml，室溫下靜置2h，經(jīng)離心機(jī)離心后取上清液，存于-80℃環(huán)境待測。

1.2.2 血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測兩組血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平，操作過程嚴(yán)格遵循試劑盒說明書進(jìn)行。 試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司，KHBST-360酶標(biāo)儀購自科華生物有限公司。 血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平＞均值，為高表達(dá)； 血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平≤均值，為低表達(dá)。

1.3 隨訪 對所有患者術(shù)后進(jìn)行3年隨訪，隨訪期間患者死亡即終止，隨訪方式為電話或門診復(fù)診，記錄患者生存期。 術(shù)后1年內(nèi)，1 次/月； 術(shù)后第2年，1 次/季；術(shù)后第3年，1 次/半年。

1.4 觀察指標(biāo) ⑴比較卵巢癌組、 對照組血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平。 ⑵分析卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平與不同病理學(xué)特征的關(guān)系。 根據(jù)術(shù)后病理判斷淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移。 ⑶分析影響卵巢癌患者預(yù)后的危險因素。 ⑷根據(jù)Kaplan-Merier 生存曲線分析血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 計數(shù)資料以例數(shù)或率表示，采用χ2檢驗；符合正態(tài)分布的計量數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間比較采用t檢驗； 采用Cox 比例風(fēng)險回歸模型分析影響卵巢癌患者預(yù)后的危險因素；采用Kaplan-Merier 生存曲線分析分析生存率。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌組、 對照組血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平比較 卵巢癌組血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 見表1。

表1 卵巢癌組、對照組血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平比較（±s）

表1 卵巢癌組、對照組血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平比較（±s）

組別 n卵巢癌組對照組t 值P 值74 60 MMP3（ng/ml）256.79±47.12 121.86±24.38 20.097 0.000 TIMP3（pg/ml）340.64±64.13 214.97±40.25 13.210 0.000

2.2 卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平與不同病理學(xué)特征的關(guān)系 血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平與卵巢癌患者國際婦產(chǎn)聯(lián)盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液量有關(guān)（P＜0.05）。 見表2。

表2 卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平與不同病理學(xué)特征的關(guān)系[n（%）]

2.3 影響卵巢癌患者預(yù)后的危險因素分析 74 例卵巢癌患者，隨訪3年，失訪5 例，存活26 例，死亡43 例，3年存活率為37.68%。Cox 比例風(fēng)險回歸模型分析結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO 分期增高、高分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液量＞200ml、血清MMP3 及TIMP3表達(dá)水平過高是影響卵巢癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素（P＜0.05）。 見表3。

表3 影響卵巢癌患者預(yù)后的危險因素分析

2.4 血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系 Kaplan-Merier 生存曲線分析顯示，血清MMP3、TIMP3 高表達(dá)患者的3年生存率分別為20.41%、18.61% 均低于低表達(dá)患者的80.00%、69.23%（P＜0.05）。 見圖1、圖2。

圖1 血清MMP3 表達(dá)生存曲線

圖2 血清TIMP3 表達(dá)生存曲線

3 討論

卵巢癌的發(fā)生機(jī)制及影響因素較為復(fù)雜，卵巢癌帶瘤患者的生存時間較短，易出現(xiàn)腫瘤向遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移，增加病死風(fēng)險[8,9]。 目前臨床以綜合性措施治療卵巢癌，包括手術(shù)治療、放化療等，患者的病情得到了緩解，但治療后無瘤生存期仍然較短[10]。 雖然人附睪蛋白、糖鏈蛋白125（CA125）可以作為臨床診斷卵巢癌及評估預(yù)后的參考指標(biāo)，但其診斷不同類型卵巢癌的特異性存在局限性，整體診斷靈敏度較低[11]。 而本研究對卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達(dá)的探討，具有以下兩個方面的價值： ⑴揭示了MMP3、TIMP3 與卵巢癌發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系； ⑵為臨床卵巢癌患者預(yù)后評估提供理論依據(jù)。

MMP3 是鋅離子依賴的內(nèi)分泌蛋白酶，屬于亞類金屬蛋白超家族，可以降解細(xì)胞外基質(zhì)中的蛋白成分，維持機(jī)體正常代謝及重組[12]。 Bufu 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，MMP3 高表達(dá)表明了對細(xì)胞外基質(zhì)屏障的破壞增強(qiáng)，促進(jìn)了癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移。 TIMP3 是MMP3 的抑制劑，不僅可以抑制MMP3 對細(xì)胞外基質(zhì)中蛋白成分的講解，還可以促進(jìn)癌細(xì)胞的生長及轉(zhuǎn)移[14]。 部分研究者探討了MMP 及TIMP3 在惡性腫瘤患者中的表達(dá)情況，但缺乏MMP3、TIMP3表達(dá)與卵巢癌患者臨床病例特征及預(yù)后關(guān)系的研究。

本次研究對于卵巢癌患者和卵巢囊腫患者血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平的分析研究可見，卵巢癌組血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平明顯升高，遠(yuǎn)高于卵巢囊腫患者，提示MMP3、TIMP3 均參與了卵巢癌的發(fā)生及發(fā)展。 通過匯總分析不同相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要由于MMP3、TIMP3 的下面幾個方面的作用相關(guān)[15-17]：(1)卵巢癌細(xì)胞出現(xiàn)浸潤及轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵是能降低細(xì)胞外基質(zhì)，MMP3 能降解幾乎所有的細(xì)胞外基質(zhì)，降低細(xì)胞之間的黏附狀態(tài)，增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞在侵襲過程中突破各種屏障的能力；(2)MMP3 過量表達(dá)后還可以降低卵巢癌細(xì)胞脈管基膜,使腫瘤可以更加容易的轉(zhuǎn)移至脈管系統(tǒng)及周圍組織,進(jìn)而形成連鎖反應(yīng),有利于腫瘤的生長及侵襲;(3)具有轉(zhuǎn)移傾向的卵巢癌細(xì)胞還能自身分泌或誘導(dǎo)其他細(xì)胞分泌MMP3，破壞基底膜完整性，向卵巢外器官轉(zhuǎn)移；(4)TIMP3 能與活化的間質(zhì)膠質(zhì)酶、 溶解素及MMP3 形成1:1 共價化合物，當(dāng)MMP3 表達(dá)水平升高時，機(jī)體反應(yīng)性地調(diào)節(jié)升高TIMP3。 國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)[18]，MMP3、TIMP3 在卵巢癌患者血清中存在過高表達(dá)，患者更容易出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移，佐證了本研究結(jié)果。 在探討卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達(dá)水平與不同病理學(xué)特征的關(guān)系過程中，本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IGO 分期較晚、分化程度較高、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液量＞200ml 的卵巢癌患者，血清MMP3、TIMP3 高表達(dá)的占比越高，提示血清MMP3、TIMP3 表達(dá)與卵巢癌患者的臨床病理特征有關(guān)，這主要由于血清MMP3、TIMP3 表達(dá)過高會增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞對盆腔內(nèi)臟器組織的浸潤能力及向卵巢外器官轉(zhuǎn)移的能力。 對影響卵巢癌患者預(yù)后的危險因素分析可見，F(xiàn)IGO 分期增高、高分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液量＞200ml、血清MMP3及TIMP3 表達(dá)水平過高是影響卵巢癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素，提示血清MMP3、TIMP3 表達(dá)與卵巢癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系密切，臨床可以通過隨訪血清MMP3、TIMP3 表達(dá)情況，進(jìn)而評估卵巢癌患者的預(yù)后情況。 進(jìn)一步分析血清MMP3、TIMP3表達(dá)水平與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，血清MMP3、TIMP3 高表達(dá)患者的3年生存率均低于低表達(dá)患者，表明血清MMP3、TIMP3 高表達(dá)的卵巢癌患者生存時間更短，預(yù)后較差。 分析原因可能為：血清MMP3、TIMP3 高表達(dá)預(yù)示著卵巢腫瘤細(xì)胞的增殖活性較高，患者的FIGO 分期、分化程度及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移風(fēng)險相對較高，治療難度大，更可能導(dǎo)致不良預(yù)后，降低生存率。

卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 呈高水平表達(dá)，不同臨床病理特征患者血清MMP3、TIMP3 表達(dá)存在差異，兩者有望成為卵巢癌預(yù)后的評估指標(biāo)。