PCOS 患者血清VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達(dá)與胰島素抵抗及卵巢間質(zhì)血流的關(guān)系

曹玉琳

（南陽市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 南陽 473002）

多囊卵巢綜合征（PCOS）能夠?qū)е禄颊呃^發(fā)性不孕或者月經(jīng)紊亂，增加了PCOS 患者病情持續(xù)性進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)[1,2]。 PCOS 患者病情遷延不愈，不僅顯著影響生活質(zhì)量，同時(shí)還增加了患者并發(fā)高雄激素血癥或者胰島素抵抗等的風(fēng)險(xiǎn)[3]。 在研究PCOS患者病情進(jìn)展機(jī)理的過程中，越來越多的研究認(rèn)為，基礎(chǔ)生物學(xué)分子的改變，能夠通過加劇胰島B細(xì)胞功能損傷，進(jìn)而參與PCOS 的病情進(jìn)展。 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）的表達(dá)上升，能夠通過加劇血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，影響到胰島B 細(xì)胞血流及新生血管的形成,最終導(dǎo)致血流灌注障礙[4]；內(nèi)皮抑素（ES）是血管收縮因子，其能夠通過加劇血管痙攣，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，最終誘導(dǎo)胰島B 細(xì)胞的血流動(dòng)力學(xué)紊亂[5]；中長鏈編碼RNA 生長停滯特異性基因5（LncRNA GAS5）能夠穩(wěn)定胰島B 細(xì)胞的代謝狀態(tài)，提高細(xì)胞損傷修復(fù)能力[6]。為了深入揭示PCOS 的發(fā)生機(jī)理，本研究選取我院收治的96 例PCOS 患者為研究對象，探討VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表達(dá)情況以及其與胰島素抵抗、卵巢間質(zhì)血流的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2016年1月至2018年7月收治的96 例PCOS 患者為PCOS 組，96 例月經(jīng)周期正常的育齡期女性為對照組。 PCOS 組，年齡22～37歲，平均27.64±2.43歲，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）24.42±2.03kg/m2，腰臀比0.86±0.05。 對照組，年齡22～37歲，平均27.45±2.18歲，BMI22.28±1.79kg/m2，腰臀比0.78±0.05。 兩組研究對象的年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；PCOS 組的BMI、腰臀比顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 診斷和入選標(biāo)準(zhǔn)：⑴PCOS 的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[7]；⑵PCOS 患者主要具有以下臨床表現(xiàn)：稀發(fā)排卵、無排卵、高雄激素血癥等；⑶PCOS 患者經(jīng)超聲檢查表現(xiàn)為一側(cè)或雙側(cè)卵巢中直徑2～9mm的卵泡數(shù)目≥12 個(gè)或卵巢體積＞10cm3； ⑷本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)倫理及保密原則。 排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴婦科腫瘤；⑵免疫系統(tǒng)疾?。虎歉叽呷樗匮Y；⑷先天性腎上腺增生、分泌雄激素腫瘤；⑸甲狀腺功能異常。

1.2 檢測方法 常規(guī)采集患者肘靜脈血4ml，自然凝固后采集上層清亮液體，-20℃放置冰箱保存。采用上海雨婷生物科技公司生產(chǎn)的全自動(dòng)生化檢測儀器（Biotetic-2008） 及該公司配套試劑對血清FPG、Fins 及HbA1c 進(jìn)行檢測；采用ELISA 法檢測血清VEGF、ES，配套儀器A4500 酶標(biāo)儀購自羅氏檢測公司。 采用RT-PCR 法對LncRNA GAS5 進(jìn)行檢測，常規(guī)Trol 法提取總RNA，純度檢測OD260/OD280 在1.8～2.0，說明提取總RNA 純度合格，采用AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng), 上游引物：5’-CTTCTGGGCTCAAGTGATCCT-3’,下游引物：5’-TTGTGCCATGA GACTCCATCAGA-3’,內(nèi)參為GAPDH,上游引物：5’-TTGTGCCATGAGACTCCATCAG-3’;下游引物：5’-GCCCAATACGACCAAATCC-3’。 反應(yīng)體系為：模板1ul,上游/下游引物各0.5ul，Buffer2μl，dN TPs1μl，Taq 酶0.5μl，cDNA1μl，SYBR -Green1μl，去離子水14ul，總體積20μl，反應(yīng)條件參照如下：95℃，10min；94℃，45s；63℃，40s；72℃，45s,共45個(gè)循環(huán)。 以GAPDH 為內(nèi)參，用公式2-△△Ct計(jì)算LncRNA GAS5 的相對表達(dá)量。 胰島素抵抗指數(shù)（Homeostasis model assessment resistance index，HOMA-IR）計(jì)算方式：空腹血糖水平（FPG，mmol/L）×空腹胰島素水平（FINS，mIU/L）/22.5。 胰島素敏感指數(shù)（ISI）計(jì)算公式：l/( FPG×FINS）結(jié)果的自然對數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0 對本研究的所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用±s 表示符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)； 兩計(jì)量資料相關(guān)性分析采用Pearson 線性相關(guān)分析法；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCOS 組和對照組的血糖代謝指標(biāo)比較PCOS 組FPG、HbA1c 與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；PCOS 組2hPG、FINS、HOMA-IR 測定值高于對照組，ISI 測定值低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；見表1。

表1 PCOS 組和對照組的血糖代謝指標(biāo)比較（±s）

表1 PCOS 組和對照組的血糖代謝指標(biāo)比較（±s）

組別PCOS 組對照組t 值P 值n 96 96 FPG（mmol/L） 2hPG（mmol/L） FINS（mmol/L） HbA1c（%） HOMA- IR ISI 5.17±0.54 5.03±0.56 1.763 0.080 7.79±1.04 5.48±0.66 18.375 0.000 9.22±2.09 4.83±0.95 18.736 0.000 5.57±0.87 5.34±0.76 1.951 0.053 1.36±0.29 0.94±0.14 12.779 0.000- 3.78±0.82- 3.04±0.63 7.012 0.000

2.2 PCOS 組和對照組的血清VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達(dá)比較PCOS 組的血清VEGF、ES 水平高于對照組，LncRNA GAS5 表達(dá)水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；見表2。

表2 PCOS 組和對照組的血清VEGF、ES及血清中LncRNA GAS5 表達(dá)比較（±s）

表2 PCOS 組和對照組的血清VEGF、ES及血清中LncRNA GAS5 表達(dá)比較（±s）

組別 n VEGF（ng/L） ES（μg/L）PCOS 組對照組t 值P 值96 96 977.32±179.24 628.61±144.52 14.842 0.000 255.14±41.31 178.42±36.83 13.585 0.000 LncRNA GAS5（相對表達(dá)強(qiáng)度）1.38±0.57 2.34±0.88 8.971 0.000

2.3 PCOS 組和對照組的卵巢間質(zhì)血流RI、PI 值比較 PCOS 組的卵巢間質(zhì)血流RI、PI 值低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；見表3。

表3 PCOS 組和對照組的卵巢RI、PI 值比較（±s）

表3 PCOS 組和對照組的卵巢RI、PI 值比較（±s）

組別 n PCOS 組對照組t 值P 值96 96 RI 0.62±0.25 0.90±0.33 6.627 0.000 PI 1.33±0.27 2.40±0.51 18.168 0.000

2.4 PCOS 組血清VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達(dá)與胰島素抵抗及卵巢間質(zhì)血流RI、PI 值的相關(guān)性PCOS 患者血清VEGF、ES 與RI、PI、ISI 呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與HOMA-IR 呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）；LncRNA GAS5 與ISI呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），LncRNA GAS5 與HOMA-IR 呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；見表4。

表4 相關(guān)性分析結(jié)果

3 討論

肥胖或者高血脂癥誘導(dǎo)的脂肪細(xì)胞過度堆積，能夠顯著促進(jìn)氧化應(yīng)激性損傷，加劇胰島B 細(xì)胞功能障礙[8]。 PCOS 的發(fā)生不僅能夠加劇月經(jīng)量或者月經(jīng)周期的改變，同時(shí)還能夠影響妊娠結(jié)局，遠(yuǎn)期心血管系統(tǒng)并發(fā)癥發(fā)生率也顯著上升[9]。 在研究PCOS 病情進(jìn)展的分子機(jī)制過程中，可以發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮損傷或者相關(guān)調(diào)控因子的改變,能夠通過對血管新生或者趨化因子富集的影響,最終導(dǎo)致胰島B 細(xì)胞功能障礙。 目前多數(shù)研究以探討CRP 或者其他代謝性因子表達(dá)與PCOS 的關(guān)系為主，并認(rèn)為CRP 及相關(guān)代謝因子的改變,能夠在PCOS 的病情進(jìn)展過程中發(fā)揮重要的作用[10]，但缺乏對PCOS 患者VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達(dá)情況的分析研究。 本次研究的創(chuàng)新性在于不僅分析了VEGF、ES及LncRNA GAS5 的表達(dá)與PCOS 的病情關(guān)系，同時(shí)還探討了VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表達(dá)與PCOS 患者胰島素抵抗及卵巢間質(zhì)血流的關(guān)系。

VEGF 作為血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，主要參與腫瘤或者炎癥反應(yīng)的發(fā)生過程。 近年來的研究認(rèn)為，VEGF 還能夠影響上皮細(xì)胞的分化成熟過程，導(dǎo)致組織細(xì)胞缺血缺氧性損傷；ES 對血管平滑肌細(xì)胞的痙攣?zhàn)饔?，能夠加劇組織器官缺血性損傷；LncRNA GAS5 是非編碼RNA 家族成員，能通過參與誘導(dǎo)胰島B 細(xì)胞分化成熟，提高胰島B 細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白的翻譯速率，最終加速胰島B 細(xì)胞的功能修復(fù)過程。 已有研究發(fā)現(xiàn)，PCOS 患者VEGF 的表達(dá)濃度明顯上升[11]，但對于VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表達(dá)與卵巢間質(zhì)血流搏動(dòng)指數(shù)（PI）、阻力指數(shù)（RI）的分析不足。

本研究對于兩組研究對象血糖代謝指標(biāo)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，PCOS 患者餐后2h 血糖（2hPG）、空腹胰島素（FINS）、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）均明顯高于對照組，而胰島素敏感指數(shù)（ISI）明顯低于對照組，提示PCOS 患者存在明顯的血糖代謝紊亂和胰島素抵抗，分析原因主要與長期的高滲高血糖能夠誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，導(dǎo)致胰島素受體的損傷，而胰島素受體敏感性的下降能明顯促進(jìn)胰島素抵抗的發(fā)生有關(guān)。 本研究重點(diǎn)探討了PCOS患者VEGF、ES 及LncRNA GAS5 表達(dá)的變化，結(jié)果顯示，PCOS 患者VEGF、ES 的表達(dá)濃度的顯著上升，而LncRNA GAS5 表達(dá)濃度顯著下降，表明VEGF、ES 及LncRNA GAS5的異常表達(dá)均與PCOS 的病情密切相關(guān)。VEGF、ES 的上升不僅能影響組織新生血管的形成，同時(shí)還能增加氧化應(yīng)激性損傷的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)一步促進(jìn)胰島B 細(xì)胞或者卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞的功能障礙，加劇PCOS 的病情進(jìn)展；LncRNA GAS5 表達(dá)下降，使其失去對卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞成熟的誘導(dǎo)功能，導(dǎo)致PCOS 患者無成熟卵泡的形成[12-14]。 楊倩等[15]的研究也認(rèn)為，PCOS 患者血清中ES 的表達(dá)水平可隨患者的病情加重而逐漸上升，PCOS 病程越長，高雄激素血癥表現(xiàn)越明顯，ES 表達(dá)水平上升越顯著。 PCOS 組卵巢間質(zhì)血流RI、PI 值低于對照組，提示PCOS 患者存在明顯的血流動(dòng)力學(xué)紊亂，這主要與多發(fā)卵泡對間質(zhì)組織中血管壁的機(jī)械性壓迫作用有關(guān)。 相關(guān)性分析結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，VEGF、ES 及LncRNA GAS5 的表達(dá)與PCOS 患者的胰島素抵抗及卵巢間質(zhì)血流指標(biāo)相關(guān)，提示VEGF、ES 及LncRNA GAS5 可以作為臨床評估PCOS 患者整體病情的重要參考依據(jù)。

綜上所述，PCOS 患者血清VEGF、ES 水平升高，LncRNA GAS5 表達(dá)降低，且與PCOS 患者胰島素抵抗及卵巢間質(zhì)血流變化密切相關(guān)。