動(dòng)物源性食品中抗生素多殘留檢測(cè)的研究進(jìn)展

孫傲楠，林圣華，趙濤，李晴，劉秀河*

（1.齊魯工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東 濟(jì)南 250353；2.山東省科學(xué)院生物研究所，山東 濟(jì)南 250103）

抗生素是一類天然、半合成或人工合成的化合物，具有抗微生物活性。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)或作用機(jī)制不同，可分為四環(huán)素類、β-內(nèi)酰胺類、喹諾酮類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類等[1]?？股乇粡V泛用于預(yù)防和治療人類或動(dòng)物由細(xì)菌感染而引起的疾病，并作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑添加到動(dòng)物飼料中，促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育、控制繁殖周期和育種性能等[2]。由于部分人工飼養(yǎng)員缺乏專業(yè)知識(shí)，不合理地使用抗生素，從而導(dǎo)致環(huán)境以及動(dòng)物源性食品中抗生素大量殘留?？股貧埩敉ㄟ^食物鏈進(jìn)入人體后，可能導(dǎo)致某些器官的功能、神經(jīng)、肝臟和血液系統(tǒng)受到損害，對(duì)兒童、孕婦或腎功能不全的患者危害更大[3]。此外，抗生素殘留會(huì)誘導(dǎo)抗性細(xì)菌和抗性基因的產(chǎn)生，導(dǎo)致對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的病原體增加，對(duì)公共衛(wèi)生安全帶來較大隱患。世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）指出，即使是低濃度的抗生素也可以使耐藥菌株茁壯成長(zhǎng)，動(dòng)物源性食品中抗生素殘留是近幾年國(guó)際社會(huì)普遍關(guān)注和研究的問題之一[4-5]。

動(dòng)物源性食品中抗生素殘留分析檢驗(yàn)是保障食品安全的重要組成部分，歐盟和食品法典委員會(huì)等監(jiān)管機(jī)構(gòu)規(guī)定了最大殘留限量（maximum residue limits，MRLs）[6-7]。我國(guó)于2020年4月1日起正式實(shí)施GB 31650—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》，在該標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定了四環(huán)素類、多肽類、頭孢菌素類等抗生素在動(dòng)物源性食品中的MRLs[8]。隨著科學(xué)技術(shù)的日益發(fā)展，高效液相色譜以及液相色譜-質(zhì)譜設(shè)備的普及提高了痕量抗生素多殘留檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。但動(dòng)物源性食品的基質(zhì)復(fù)雜（包括蛋白質(zhì)、脂肪、無機(jī)鹽、糖和重金屬離子等物質(zhì)），嚴(yán)重的基質(zhì)效應(yīng)影響高分辨儀器對(duì)抗生素殘留定性和定量分析的準(zhǔn)確性和靈敏度[9]。樣品前處理可以減少基質(zhì)背景物的干擾，純化樣品和預(yù)濃縮目標(biāo)物，并根據(jù)檢測(cè)方法將目標(biāo)物轉(zhuǎn)化為合適的形式，動(dòng)物源性食品中抗生素殘留檢測(cè)前處理技術(shù)的研究對(duì)提高動(dòng)物源性食品中抗生素殘留檢測(cè)的準(zhǔn)確性以及靈敏度至關(guān)重要。因此，本文綜述近年來動(dòng)物源性食品中抗生素殘留檢測(cè)中前處理研究的進(jìn)展，特別是新材料和新方法在解決傳統(tǒng)前處理方法存在的弊端方面的應(yīng)用，對(duì)高效、靈敏的動(dòng)物源性食品中抗生素殘留檢測(cè)方法的研究具有重要意義。

1 抗生素殘留分析中樣品前處理方法

樣品前處理的步驟一般包括取樣、提取、凈化和濃縮等。樣品前處理方法的選擇主要取決于樣品基質(zhì)、檢測(cè)方法和分析物的性質(zhì)[10]。動(dòng)物源性食品基質(zhì)中抗生素多殘留檢測(cè)通常采用基于相吸附原理和相分配原理的樣品前處理方法，包括固相萃?。╯olid-phase extraction，SPE）、基質(zhì)分散固相萃?。╩atrix solid-phase dispersion，MSPD）、磁性固相萃取（magnetic solid-phase extraction，MSPE）、固相微萃?。╯olid-phase microextraction，SPME）、液液萃?。╨iquid-liquid extraction，LLE）、QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）法等。

2 基于相吸附原理

2.1 固相萃取

高分辨質(zhì)譜檢測(cè)儀具有高效和高靈敏等特點(diǎn)，近年來動(dòng)物源性食品中抗生素多殘留檢測(cè)多采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UHPLC-MS/MS）或液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LCMS/MS）[11]。但在儀器分析之前，對(duì)樣品的純化和富集有很高的要求，固相萃取技術(shù)是樣品凈化和預(yù)濃縮過程中應(yīng)用最廣泛的萃取技術(shù)之一[12]。相對(duì)于傳統(tǒng)的萃取方法（索氏提取法），具有樣品處理時(shí)間較短、不易出現(xiàn)乳化或起泡等優(yōu)點(diǎn)，分析物在痕量濃度水平下也有較高的回收率，且易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作。適用于動(dòng)物源性食品的固相萃取吸附劑，包括C18、石墨化碳黑和二乙烯基苯-N-乙烯基吡咯烷酮（hydrophile-lipophile balance，HLB）固相萃取柱等[13-14]。常規(guī)的固相萃取技術(shù)在動(dòng)物源性食品前處理應(yīng)用中，存在樣品提取步驟繁瑣、凈化不徹底以及處理樣品單一等缺點(diǎn)。近年來新型固相萃取吸附劑以及新型固相萃取技術(shù)的開發(fā)改善了傳統(tǒng)固相萃取技術(shù)的缺點(diǎn)。

Yan等[15]采用混合型強(qiáng)陽(yáng)離子交換反相固相萃取柱，對(duì)雞蛋、牛奶和動(dòng)物組織（肌肉、腎臟、肝臟和脂肪）中的加米霉素進(jìn)行凈化和富集。該方法使用乙腈提取樣品，樣品提取液經(jīng)混合型強(qiáng)陽(yáng)離子交換反相固相萃取柱凈化和富集后，采用UHPLC-MS/MS進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)現(xiàn)在 1.0 μg/kg～200 μg/kg范圍內(nèi)，加米霉素的高效、靈敏檢測(cè)。該方法的最低檢出限（limit of detection，LOD）和定量限（limit of quantitation，LOQ）分別為0.30 μg/kg～0.40μg/kg和0.80μg/kg～1.0μg/kg，加標(biāo)回收率為84.2%～115.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）小于10%。相比于傳統(tǒng)的C18、石墨化碳黑和HLB固相萃取柱，新型陽(yáng)離子交換反相吸附劑能夠簡(jiǎn)化樣品提取步驟，提高動(dòng)物源性食品中加米霉素分析效率，該方法適用于快速篩選雞蛋、牛奶和動(dòng)物組織中是否存在加米霉素殘留。Shen等[16]采用QuEChERS/96孔SPE平板法提取魚肉樣品中的糖肽類抗生素（萬古霉素和去甲萬古霉素），并通過UHPLC-MS/MS進(jìn)一步分析。對(duì)陽(yáng)離子交換樹脂吸附劑、萃取劑中乙腈的比例、流動(dòng)相水/乙腈等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。在最佳條件下，LOD和LOQ 分別為 0.51 μg/kg和 1.73 μg/kg，日內(nèi)和日間精密度分別小于5.19%和6.30%，回收率為86.7%～98.6%。該方法結(jié)合QuEChERS法和酶聯(lián)免疫檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)了動(dòng)物源性食品中抗生素的高通量、多殘留的檢測(cè)，滿足萬古霉素和去甲萬古霉素的日常監(jiān)測(cè)要求。Lu等[17]通過直通式固相萃取凈化程序去除脂肪和磷脂等基質(zhì)背景物，并結(jié)合UHPLC-MS/MS實(shí)現(xiàn)雞肉和雞蛋樣品中11種喹諾酮類抗生素的檢測(cè)。樣品用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液作為提取液，以釋放和提取目標(biāo)物。雞肉樣品的回收率為70.4%～98.4%，雞蛋樣品的回收率為66.9%～99.0%，檢測(cè)下限為0.1 μg/kg～0.16 μg/kg。該方法成功應(yīng)用于60份雞肉和110份雞蛋樣品中11種喹諾酮類抗生素殘留的篩查。

SPE技術(shù)在復(fù)雜的基質(zhì)或含有多種不同性質(zhì)的抗生素樣品處理中，存在特異性、效率較低且吸附劑的微孔結(jié)構(gòu)會(huì)被樣品中固體顆?；蚰z體物質(zhì)堵塞等缺點(diǎn)，導(dǎo)致樣品凈化不完全[18]。為了進(jìn)一步改進(jìn)，在SPE技術(shù)的基礎(chǔ)上，分子印跡聚合物固相萃?。╩oleculary imprinted polymer solid-phase extraction，MIP-SPE）[19]、基質(zhì)分散固相萃?。╩atrix solid-phase dispersion，MSPD）[20]、磁性固相萃?。╩agnetic solid-phase extraction，MSPE）[21-22]、固相微萃?。╯olid-phase micro extraction，SPME）[23]等技術(shù)逐漸被應(yīng)用。

2.2 分子印跡聚合物固相萃取

MIP-SPE中的分子印跡聚合物（molecular imprinted polymer，MIP）是將印跡分子、功能單體與交聯(lián)劑聚合作為模板分子的目標(biāo)分析物，通過洗滌或化學(xué)鍵斷裂保留MIP中的結(jié)合位點(diǎn)，留下特異的識(shí)別位點(diǎn)。MIP模擬“抗體-抗原”的作用機(jī)理，通常被用作固相萃取中選擇性吸附材料[24]。

Feng等[25]以四環(huán)素為模板分子，甲基丙烯酸為功能單體，合成了四環(huán)素印跡聚合物。建立了MIP-SPE結(jié)合高效液相色譜（high-performance liquid chromatography，HPLC）測(cè)定動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類抗生素殘留的方法。制備的固相萃取柱具有高吸附容量（3 560 ng～4 700 ng）和高回收率（＞87%）等優(yōu)點(diǎn)。該方法同時(shí)分析3種動(dòng)物源性食品中4種四環(huán)素類抗生素殘留，具備納克級(jí)別的超靈敏檢測(cè)限，LOD和回收率分別為20 ng/g～40 ng/g和 74%～93%。Baeza等[26]制備了能夠同時(shí)識(shí)別6種頭孢菌素的MIP作為分子印跡固相萃取吸附劑，利用MIP-SPE提取目標(biāo)物并結(jié)合UHPLC-MS/MS建立在牛奶樣品中測(cè)定頭孢硫呋、頭孢唑林、頭孢喹肟、頭孢匹林、頭孢氨芐和頭孢噻吩等抗生素多殘留檢測(cè)方法。該方法的 LOD 為 1.7 μg/kg～12.5 μg/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于牛奶樣品中頭孢菌素類抗生素的MRLs。相對(duì)于傳統(tǒng)的MIP-SPE只針對(duì)模板分子的特異識(shí)別的缺點(diǎn)，該方法開發(fā)的新型MIP能夠同時(shí)對(duì)6種頭孢菌素類抗生素進(jìn)行分析測(cè)定，拓寬了MIP-SPE在動(dòng)物源性食品抗生素殘留分析中的應(yīng)用。Yang等[27]采用MIPSPE結(jié)合LC-MS/MS同時(shí)測(cè)定蜂蜜、牛奶和豬肉樣品中潮霉素、鏈霉素、阿米卡星和帕羅霉素等11種氨基糖苷類抗生素。采用50 mmol/L磷酸二氫鉀提取蜂蜜樣品中的氨基糖苷類抗生素，采用含有2%三氯乙酸、10 mmol/L磷酸二氫鉀和0.4 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉組成的溶液，提取牛奶和勻漿肉類樣品中的氨基糖苷類抗生素。提取物采用分子印跡固相萃取柱凈化。該方法成功應(yīng)用于3種不同基質(zhì)的樣品，LOD為2 μg/kg～30 μg/kg，LOQ 為 7 μg/kg～100 μg/kg，平均回收率為78.2%～94.8%。

新型MIP克服了傳統(tǒng)SPE吸附劑單一目標(biāo)物特異性強(qiáng)的缺點(diǎn)，具備更高的負(fù)載量和選擇性，可以實(shí)現(xiàn)結(jié)構(gòu)相似的一系列目標(biāo)物的識(shí)別，提高了樣品的處理能力。傳統(tǒng)分子印跡固相萃取劑正向高負(fù)載量、選擇性、生物相適性以及重現(xiàn)性和穩(wěn)定性方向發(fā)展。

2.3 基質(zhì)分散固相萃取

傳統(tǒng)色譜分析法要求樣品及成分以無黏性、無顆粒和相對(duì)均勻的液體進(jìn)入色譜柱的頂部，但是大多數(shù)動(dòng)物源性食品組織，特別是肌肉和器官組織并非排列均勻[28]。MSPD適用于大量固體、半固體或高黏性生物樣品的制備和提取[29]。在MSPD過程中，將樣品與黏結(jié)相或其他固體支撐材料一起研磨，然后將得到的混合相作為裝柱的填料。

Kim等[30]開發(fā)MSPD結(jié)合LC-MS/MS同時(shí)測(cè)定肉類、牛奶和雞蛋中20種氨基糖苷類抗生素的分析方法。使用乙酸銨緩沖溶液和分散固相吸附劑（C18）對(duì)樣品進(jìn)行凈化和富集，得到的線性相關(guān)系數(shù)良好（r2＞0.98），平均回收率和精確度為70%～118%和1%～27%。該方法提供了篩選和定量多種食品基質(zhì)中20種氨基糖苷類抗生素殘留的方法。Huang等[31]基于MSPD結(jié)合UHPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定豬肉中15種β-內(nèi)酰胺類抗生素，同時(shí)針對(duì)動(dòng)物源性食品的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行研究。該方法采用己烷淋洗肌肉組織和Oasis HLB吸附劑組成的萃取柱，然后用乙腈洗脫，將提取液用于UHPLCMS/MS分析。結(jié)果表明，基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均高于0.99，RSD小于12%，β-內(nèi)酰胺類抗生素的LOD 和 LOQ 為 0.02 μg/kg～0.63 μg/kg 和 0.07 μg/kg～0.97 μg/kg，平均回收率為92%～111%。該方法已成功應(yīng)用于中國(guó)豬肉市場(chǎng)中15種β-內(nèi)酰胺類抗生素的檢測(cè)。

MSPD簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)樣品前處理過程中組織細(xì)胞裂解、均質(zhì)、提取和凈化等多個(gè)步驟并將樣品分散成較小的顆粒，為之后目標(biāo)物的分析提供了更大的表面積。MSPD避免了有機(jī)溶劑的消耗，具有簡(jiǎn)單性、靈活性和低廉性等優(yōu)點(diǎn)[32]。但是，MSPD技術(shù)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作較為困難，方法不易標(biāo)準(zhǔn)化應(yīng)用[33]。

2.4 磁性固相萃取

MSPE是一種以磁性納米粒子為改性吸附劑的新型固相萃取技術(shù)[34]。磁性吸附劑主要由磁性無機(jī)材料（如磁鐵礦、磁赤鐵礦等）和非磁性材料（有機(jī)和無機(jī)分子、聚合物等）組成。在磁場(chǎng)作用下，磁性納米粒子可以實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子與樣品基質(zhì)的高效分離以及富集，極大地簡(jiǎn)化了萃取過程，提高了萃取性能[35]。MSPE因其具有吸附效率高、操作簡(jiǎn)便、分離速度快、省時(shí)、成本低等優(yōu)點(diǎn)而受到了廣泛關(guān)注。

Zhao等[36]采用分步水熱法合成了一種基于二硫化鉬基核殼磁性納米復(fù)合材料（Fe3O4@MoS2）的磁性吸附劑，并結(jié)合HPLC-MS/MS；用于牛奶、豬肉和魚肉中磺胺類抗生素的分析；系統(tǒng)地研究了萃取參數(shù)，其中包括酸堿度、Fe3O4@MoS2的用量、萃取時(shí)間、溫度和解吸條件；在1.0 ng/L～1 000 ng/L線性范圍內(nèi)，LOD為0.20 ng/L～1.15 ng/L，回收率為85.50%～111.5%，相對(duì)于傳統(tǒng)的磁性納米粒子，合成的Fe3O4@MoS2復(fù)合材料對(duì)磺胺負(fù)載量的提取效率明顯提升。Ye等[37]合成了一種新型高氟硼吸附劑（fluoride boron adsorbent，F(xiàn)BA），用作 MSPE的萃取相，并將FBA/MSPE與高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)（high performance liquid chromatography-diode array detection，HPLC-DAD）聯(lián)用，定量分析環(huán)境中的水和牛奶樣品中的痕量喹諾酮類抗生素。此方法展現(xiàn)了良好的線性關(guān)系和精密度，其中水樣品和牛奶樣品LOD 為 0.004 9 μg/kg～0.016 0 μg/kg 和 0.010 μg/kg～0.046 μg/kg，回收率分別為 80.1%～120%和 78.9%～119%。所建立的FBA/MSPE-HPLC/DAD方法適用于測(cè)定水和牛奶樣品中的痕量喹諾酮類抗生素。

2.5 固相微萃取

SPME是一種采用熔融硅質(zhì)纖維涂覆固定相或內(nèi)涂層，基于固定相-水相之間達(dá)到分配平衡控制來吸附、預(yù)濃縮樣品中的目標(biāo)物，可應(yīng)用于液體、固體和氣體樣品的無溶劑樣品前處理技術(shù)[38-39]。由于其獨(dú)特的微型裝置設(shè)計(jì)，具備操作簡(jiǎn)便、有機(jī)試劑消耗量少等優(yōu)點(diǎn)。此外，SPME可以與氣相色譜、高效液相色譜和毛細(xì)管電泳儀等大型儀器實(shí)現(xiàn)在線聯(lián)用，并且能夠?qū)崿F(xiàn)完全自動(dòng)化操作。在線聯(lián)用的檢測(cè)模式能夠簡(jiǎn)化檢測(cè)步驟，減少人為處理導(dǎo)致的誤差，實(shí)現(xiàn)小樣本食品的快速高效檢測(cè)[40]。Sadeghi等[41]建立基于SPME和聚離子液體膜吸附劑對(duì)分析物預(yù)濃縮，然后使用銅納米團(tuán)簇（Cu NCs）進(jìn)行分子熒光光譜測(cè)定牛奶和蜂蜜中磺胺噻唑的新方法。在吸附和解吸的最佳條件下，線性濃度為 0.13 μg/mL～25.5 μg/mL，LOD 和 LOQ 分別為0.07 μg/mL和0.23 μg/mL，牛奶和蜂蜜樣品中磺胺噻唑的回收率分別為84.5%～104%和96.6%～107%。該方法通過固相微萃取結(jié)合熒光快速分析，極大縮短了檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)，可以用日常監(jiān)管過程中大批量樣品的抗生素殘留篩選。

2.6 QuEChERS法

Anastassiades等[42]引入了一種快速、簡(jiǎn)單、廉價(jià)、有效、耐用和安全的快速樣品前處理技術(shù)，即QuEChERS法。QuEChERS法基于鹽析效應(yīng)，通常包括鹽析溶劑萃取和分散固相萃?。╠ispersive solid-phase extraction，DSPE）凈化等步驟[43]。QuEChERS法可以從樣品基質(zhì)中去除水和不需要的基質(zhì)組分，有效消除基質(zhì)效應(yīng)并獲得目標(biāo)分析物良好的回收率，具有高重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，更符合綠色分析化學(xué)原則。

Zhou等[44]將響應(yīng)面法優(yōu)化的QuEChERS法與HPLC-MS/MS相結(jié)合，同時(shí)分析牛奶中16種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和4種代謝物。該方法使用羅紅霉素作為內(nèi)標(biāo)以獲得最大的準(zhǔn)確度和精密度。研究結(jié)果表明，大多數(shù)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素及其代謝物相關(guān)系數(shù)良好（r2＞0.998），在濃度為 1 ng/mg～100 ng/mg均可檢測(cè)到。所有分析物的回收率為62.27%～115.28%，LOD和LOQ分別為 0.30 μg/kg～0.85 μg/kg 和 1.1 μg/kg～4.0 μg/kg，日內(nèi)和日間精密度分別低于10%和15%。Wen等[45]優(yōu)化QuEChERS法中鹽析溶劑萃取和凈化管的凈化步驟，結(jié)合LC-MS/MS分析多種可食用動(dòng)物組織中磺胺類抗生素。在QuEChERS的清理步驟中，使用無滴落過濾板（Captiva ND-lipid），去除動(dòng)物源性食品的蛋白和脂質(zhì)。牛肉、豬肉和雞肉樣品的LOD為0.01 ng/g～0.03 ng/g，牛肚和豬肝樣品的碘含量范圍分別為0.02 ng/g～0.04ng/g，日內(nèi)和日間精密度范圍分別為1.0%～10.5%和0.4%～8.0%，準(zhǔn)確度分別為95.2%～107.2%和97.8%～102.1%。采用響應(yīng)面分析優(yōu)化，進(jìn)一步提升了QuEChERS方法的準(zhǔn)確度和靈敏性；新組件（Captiva ND-lipid）的采用，解決了動(dòng)物源食品中脂質(zhì)和蛋白去除難的問題，Captiva ND-lipid可去除樣品中99%以上的脂類和蛋白，確保痕量分析的精確度和重復(fù)性，特別適用于對(duì)樣品潔凈程度以及回收率要求高的樣品分析。

3 基于相分配原理

3.1 液液萃取

LLE是基于分析物在兩種不相容的液體或相（通常是水溶劑和有機(jī)溶劑）之間分配比或溶解度不同來進(jìn)行分離、提取或純化的預(yù)處理方法，也是最常用的萃取技術(shù)之一[46]。與傳統(tǒng)的SPE相比，LLE可以通過多種形式的裝置實(shí)現(xiàn)連續(xù)操作，處理大批量樣品，具有分離效果好、成本低等優(yōu)點(diǎn)。但LLE不易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作，需要大量昂貴且有毒的有機(jī)溶劑，繁瑣、耗時(shí)且對(duì)環(huán)境不友好。

Jank等[47]采用LLE結(jié)合液相色譜-電噴霧-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatogram-electrospray ionization-mass spectrometry/mass spectrometry，LC-ESI-MS/MS）建立了一種高通量、快速檢測(cè)牛、豬、雞肉和牛奶中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素（紅霉素、阿奇霉素、泰樂菌素、替米考星和螺旋霉素）和林可酰胺類抗生素（林可霉素和克林霉素）的多殘留分析方法。樣品前處理過程中無任何提純、凈化等步驟，僅采用少量乙腈對(duì)樣品提取，并詳細(xì)優(yōu)化提取參數(shù)，最大限度地減少基質(zhì)效應(yīng)和共存物的干擾。進(jìn)而使用C18柱和由酸化乙腈和水組成的流動(dòng)相實(shí)現(xiàn)色譜分離。結(jié)果表明，以變異系數(shù)表示的再現(xiàn)性值均低于19.1%，回收率和LOD分別為60%～107%和5 μg/kg～25 μg/kg。該方法避免了動(dòng)物源食品中抗生素殘留分析過程的固相萃取過程，具有分析時(shí)間短、成本低、樣品制備簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。

3.2 液相微萃?。╨iquid-phase microetraction，LPME）

LPME是一種基于相平衡原理用于樣品前處理的LLE微型化方法。在LPME中，受體相的液滴保持在微型注射器針頭的尖端，然后直接浸入樣品中或懸浮在其表面之上，樣品中的溶劑可以置于疏水膜的孔中，或者通過膜界面與供體相分離。LPME克服了LLE方法的局限性，提高了樣品凈化能力，減少了有機(jī)溶劑的消耗并可以使用多種液體萃取劑，如有機(jī)溶劑、水溶液和離子液體等[48]。LPME技術(shù)主要包括分散液液微萃?。╠ispersion liquid-liquid microextraction，DLLME）和中空纖維液相微萃?。╤ollow fiber liquid-phase microextraction，HF-LPME）。

DLLME因其溶劑消耗少、提取速度快、高富集倍數(shù)等優(yōu)點(diǎn)，可用于在不同樣品基質(zhì)中精確提取和定量痕量分析物[49]。然而，DLLE應(yīng)用于復(fù)雜樣品基質(zhì)時(shí)，由于常規(guī)提取液極性的限制，DLLME導(dǎo)致選擇性和萃取效率較差。Wang等[50]采用離子液體1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽（[C4MIM][PF6]）建立了DLLME結(jié)合HPLC測(cè)定肉類中4種喹諾酮類抗生素的方法。在最優(yōu)條件下，該方法獲得了4種喹諾酮類抗生素（諾氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星、恩諾沙星）的不同富集因子（11倍～42倍）。結(jié)果表明，4種藥物的LOD為0.5 ng/mL～1.1 ng/mL，雞肉、豬肉和魚肉中的加標(biāo)回收率為60.4%～96.3%，變異系數(shù)小于11.5%。Arroyo-Manzanares等[51]將DLLME和QuEChERS結(jié)合，采用HPLC-熒光檢測(cè)法對(duì)牛奶樣品中9種磺胺類抗生素的極性進(jìn)行測(cè)定。該方法的提取和回收率為90.8%～104.7%和83.6%～104.8%。LOD分別低于1.21μg/L和2.73 μg/L。新型離子液體提取液以及多種前處理方法的有機(jī)結(jié)合提高了DLLME的萃取效率。

HF-LPME是一種由管壁纖維孔內(nèi)的有機(jī)溶劑形成的支撐液膜進(jìn)行傳質(zhì)，再利用聚丙烯制成和微型注射器支撐的多孔中空纖維內(nèi)腔進(jìn)行微萃取的技術(shù)。由于受體相與樣品溶液無直接接觸，因此避免了溶劑的損失[52]。HF-LPME還具有突出的樣品純化功能，因此擴(kuò)大了分析基質(zhì)的范圍，使其可用于復(fù)雜基質(zhì)樣品的直接分析[53]。Tajabadi等[54]采用HF-LPME結(jié)合HPLCDAD用于測(cè)定4種四環(huán)素類抗生素和5種喹諾酮類抗生素。將中空纖維切成8 cm的長(zhǎng)度，用含有10%Alijat-336的1-辛醇溶液浸漬以填充外部的孔隙，然后將1 mol/L NaOH-NaCl水溶液注射到纖維腔內(nèi)，采用HPLC對(duì)富含分析物的受體相進(jìn)行檢測(cè)。在最佳參數(shù)條件下，不同抗生素的LOD和LOQ分別為0.5 ng/g～20 ng/g和1.25 ng/g～40 ng/g，日內(nèi)和日間重復(fù)性分別為3.4%～10.7%和5.0%～11.5%。該方法適用于多種動(dòng)物源性食品樣品如魚、牛奶和蜂蜜，以及羊肉和雞肉的肝臟和肌肉等中9種抗生素的提取和測(cè)定。

4 結(jié)論與展望

本文主要介紹動(dòng)物源性食品抗生素的高通量、多殘留檢測(cè)方法的相關(guān)研究進(jìn)展。盡管高效和高分辨大型儀器的普及，提高了動(dòng)物源性食品抗生素多殘留檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。動(dòng)物源性食品樣品具有種類繁多、基質(zhì)復(fù)雜和時(shí)效性強(qiáng)等特性，因此如何提高樣品的取樣、提取和凈化等步驟效率仍需進(jìn)一步研究。特別是針對(duì)食品安全監(jiān)管的需求，開發(fā)更為簡(jiǎn)單快速、靈敏、低成本、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作的樣品前處理方法是提高動(dòng)物源性食品中痕量抗生素殘留分析檢測(cè)效率的必要手段。在樣品前處理過程中，新型吸附劑、新前處理方法以及不同類型前處理方法的結(jié)合，在近年來動(dòng)物源性食品抗生素殘留中超靈敏檢測(cè)研究中體現(xiàn)尤為突出。新型固相吸附劑的開發(fā)，如混合型強(qiáng)陽(yáng)離子交換反相吸附劑、高選擇性MIP吸附劑、納米復(fù)合磁性吸附劑和新型高氟硼吸附劑等，解決了傳統(tǒng)吸附劑存在的特異性弱、洗脫不徹底等問題，具備了選擇性強(qiáng)、高親和力等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)展現(xiàn)了更好的回收率，提高了動(dòng)物源性食品中抗生素的分析效率；同時(shí)，新型前處理方法的開發(fā)以及前處理方法的有機(jī)結(jié)合，如QuEChERS/96孔SPE平板法、液液微萃取與QuECh-ERS法的有機(jī)結(jié)合等，解決了處理樣品單一和處理步驟繁瑣等問題，具有廉價(jià)、高效、省時(shí)、便捷等優(yōu)點(diǎn)。動(dòng)物源性食品中抗生素多殘留的檢測(cè)仍存在以下問題有待解決：1）新型吸附劑對(duì)目標(biāo)物的分離和富集機(jī)制不清晰，大部分仍停留在應(yīng)用效果的研究上，對(duì)于機(jī)制研究不夠深入；2）動(dòng)物源性食品基質(zhì)效應(yīng)研究不夠詳細(xì)，除了通過基質(zhì)校正曲線和標(biāo)準(zhǔn)加入方法以外，評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)的新方法亟待研究；3）盡管無滴落過濾板（Captiva ND-lipid）等新前處理組件的出現(xiàn)，促進(jìn)了動(dòng)物源性食品基質(zhì)中蛋白和脂類的處理效率，但標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化設(shè)備和組件的開發(fā)仍需進(jìn)一步加強(qiáng)。