鹿尾生物學特性、化學成分和藥理作用研究進展

趙麗娟，李志滿，孫印石

（中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所，長春 130112）

鹿尾（cauda cervi）為鹿科動物梅花鹿（cervus nipponTemminck）或馬鹿（cervus elaphusLinnaeus）的尾巴[1]。不同品種和性別的鹿尾形態(tài)不同。馬鹿尾呈鈍圓形，似豬舌狀，基部較扁寬，雌性較雄性形狀更顯短粗、尾頭略偏鈍圓；梅花鹿尾較為狹長，尾頭較尖且略向下彎曲，雄性較雌性更顯粗大。

食用鹿尾對人體具有保健功能?！端拇ㄖ兴幹尽酚涊d鹿尾有暖腰膝，壯陽生精的功效，可用于腎虛，腰膝冷痛，遺精陽痿，頭昏耳鳴[2]等。鹿尾的藥理功效與所含化學成分密切相關(guān)，因此，成分檢測是系統(tǒng)了解鹿尾的基礎(chǔ)。近年來鹿尾作為滋補類功能食品核心原料被廣泛應用，市場需求量每年均呈遞增趨勢。藥理研究作為鹿尾產(chǎn)品開發(fā)的基礎(chǔ)研究，為鹿尾在人體內(nèi)發(fā)揮功效提供理論支持，必將成為未來鹿尾研究的重難點。從化學成分和藥理活性兩方面對不同鹿尾進行對比研究，能為鹿尾品質(zhì)評價提供科學依據(jù)，更好的服務于產(chǎn)品開發(fā)和滿足市場需求。

1 鹿尾的生物學特性

1.1 尾腺及其組織學特點 鹿尾由尾椎骨、尾腺、肌肉組織、脂肪組織、結(jié)締組織和尾皮組成。鹿尾的組織結(jié)構(gòu)獨特在尾腺及其組織學特點。MüLLERSCHWARZE D 等[3]發(fā)現(xiàn)尾腺是一種變化的頂漿分泌汗腺，遍布尾根到尾尖的整個背面和腹面，且在尾尖腹面部位最厚。AJMAT 等[4]的研究亦表明腺體在尾尖部位最為發(fā)達，但在此部位背面和腹面沒有差別。OZAKI N 等[5]對比分析了北海道梅花鹿的尾腺、跖骨腺和瞼板腺肌上皮細胞和立毛肌肌肉的形態(tài)特征，發(fā)現(xiàn)尾腺肌上皮細胞層比其它皮膚腺的肌上皮細胞層薄。除此之外，鹿尾的組織結(jié)構(gòu)還獨特在具有類似膽囊的作用機制。古語言：“鹿無膽，尾代之?！奔绰贡旧頉]有膽囊，而尾巴恰似充當了一個完善的過濾系統(tǒng)，能夠通過血液循環(huán)分解體內(nèi)多余的脂肪，起到對肝臟的保護作用，這種類似膽囊的機制是其他動物所沒有的[6]。

1.2 鹿尾對性行為、社交和預警行為的調(diào)控作用 鹿尾獨特的組織結(jié)構(gòu)決定了它具有重要的生物學功能。大量研究表明，尾腺能分泌特殊氣味的物質(zhì)作為信息素調(diào)控鹿的性行為、社交行為和預警行為[7]。MüLLER-SCHWARZE[3]的研究表明，鹿個體失散后可通過尾腺分泌物的氣味識別同種群個體；在發(fā)情期，雌、雄鹿通過嗅對方的肛門和尾巴以刺激引發(fā)性行為。KAMEWAKA Y[8]的研究表明，雌鹿懷孕后期和哺乳期分泌的揮發(fā)性物質(zhì)最多，主要作用：一是幫助雌鹿找到失散的幼鹿，二是通過協(xié)調(diào)視覺以加強自身的預警行為。BAKKE J M 等[9]人工合成了6 種鹿尾腺分泌物，并且證明這6 種合成的鹿尾腺分泌物可以誘導雄鹿的裂唇嗅和爬跨等性行為。

2 鹿尾化學成分

2.1 鹿尾中的核苷 核苷由堿基和戊糖通過糖苷鍵連接而成，包括核糖核苷和脫氧核糖核苷。核苷類成分具有調(diào)節(jié)免疫、參與代謝和抗病毒等作用，對肝臟、心血管及神經(jīng)系統(tǒng)疾病有治療作用[10]。核苷類組分是極性較大的水溶性物質(zhì)，常用的提取方法有甲醇熱回流提取、水超聲提取、甲醇超聲提取等。張高慧[11]通過比較這3 種提取方法，得出用20%甲醇超聲提取鹿尾核苷，各組分提取率較高。核苷定量分析方法有高效液相色譜法、薄層色譜法和分光光度法等。液相色譜因操作簡便、檢測效率高被廣泛應用。孫印石等[12]采用水超聲提取梅花鹿茸中的核苷，建立了UPLC 同時測定梅花鹿茸13 種核苷的方法，操作簡單，精密度高，穩(wěn)定性好，適用于動物樣品中核苷類成分檢測。張高慧等[11]采用高效液相色譜法檢測了梅花鹿尾和馬鹿尾中尿嘧啶、次黃嘌呤、尿苷和黃嘌呤含量，2 種鹿尾各核苷含量無顯著差異，但均以尿苷含量最高，分別為0.47和0.50 g/kg，黃嘌呤含量最低，分別為0.021和0.023 g/kg。

2.2 鹿尾中的多糖 多糖是10 個以上的單糖以糖苷鍵連接而成的大分子化合物[13]，具有抗腫瘤、抗衰老、增強機體免疫力、調(diào)血脂、降血糖等功能[14]，是中藥材重要的活性成分。提取多糖常用的方法有熱水煎煮法和超聲輔助提取法，含量測定方法有化學法、色譜法和毛細管電泳法等。宋佳等[15]通過比較熱水煎煮和超聲輔助2 種方法提取鹿茸多糖的效率，得出超聲輔助提取法具有操作簡單、提取效率高的優(yōu)點。宮瑞澤等[16]采用超聲輔助-水提醇沉法提取鹿茸多糖，苯酚-硫酸法測定總糖含量，取得較好結(jié)果。張高慧等[17]采用水熱回流法提取鹿尾多糖，苯酚-硫酸法測定總糖含量，闡明馬鹿尾多糖含量（5.86 g/kg）略高于梅花鹿尾（4.70 g/kg）。

2.3 鹿尾中的蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，具有酶功能、轉(zhuǎn)運功能和受體功能等。生物體生理和病理活動以及藥物對機體的作用主要通過蛋白質(zhì)實現(xiàn)[18]，且動物類中藥有效成分以蛋白多肽類為主，因此，研究蛋白質(zhì)對探討鹿尾的藥理功效及作用機理有重要意義。蛋白質(zhì)常用的提取方法有超聲輔助提取法、酶提取法和鹽析法等。酶提取法效率較高，適用于工業(yè)大生產(chǎn)；超聲輔助提取是一種新型綠色、高效的提取方法，其原理是通過影響分子內(nèi)部的三維結(jié)構(gòu)和活性基團分布，從而增強原料的溶解度，使蛋白分子更好的釋放出來[19]。蛋白質(zhì)含量測定方法有凱氏定氮法、雙縮脲法、Bradford 法和Bicinchoninic Acid 法等。凱氏定氮法測定總有機氮量較為準確，是目前食品粗蛋白測定最普遍的方法[20]。郭鑫等[21]參照GB 5009.5-2010，采用凱氏定氮法測定出干鹿尾粗蛋白占60.25%，表明鹿尾富含蛋白質(zhì)。

2.4 鹿尾中的氨基酸 氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，在生命活動中擔任重要角色。目前，鹿茸、鹿尾等功能食品中氨基酸含量測定以GB/T 5009.124-2003《食品中氨基酸的測定》為標準，運用氨基酸自動分析儀進行定量分析。其次，柱前衍生-高效液相色譜測定動、植物樣品氨基酸含量的方法逐漸成熟。唐曉雷等[22]運用柱前衍生-HPLC 測定鹿茸中17 種水解氨基酸含量；陸雨順等[23]運用柱前衍生-UPLC 測定油莎豆中17 種水解氨基酸含量。鄧鴻等[24]運用氨基酸自動分析儀檢出梅花鹿尾和馬鹿尾均含8 種必需氨基酸，包 括Thr、His、Lys、Phe、Leu、Ile、Met、Val，含量無顯著差異。董萬超等[25]對比分析了梅花鹿鹿茸、鹿尾、鹿筋、鹿血、茸血、鹿鞭和鹿心的氨基酸含量，茸血氨基酸含量（94.27%）最高，鹿尾氨基酸含量為61.56%，略高于鹿茸（59.84%）。張高慧[7]的研究表明，梅花鹿尾和馬鹿尾均檢出22 種氨基酸，以谷氨酸含量最高；均含7 種必需氨基酸，以賴氨酸含量最高；并且與鹿茸和鹿肉對比，不同鹿產(chǎn)品水解氨基酸含量高低順序不同，推測鹿尾蛋白結(jié)構(gòu)不同于鹿茸和鹿肉。趙卉等[26]的研究表明梅花鹿鹿茸、鹿血、鹿心、鹿尾和鹿角盤均含17 種氨基酸；鹿尾氨基酸含量為45.97%，低于鹿血和鹿心，高于鹿茸和鹿角盤。

2.5 鹿尾中的性激素 激素是由特定細胞分泌，對機體代謝或生理功能起調(diào)控作用的高活性微量有機分子。激素測定主要有液-質(zhì)聯(lián)用、薄層層析等化學檢測方法和放射免疫、酶聯(lián)免疫等免疫檢測方法。液-質(zhì)聯(lián)用能高效精確定性和定量，但儀器成本高，需精密的凈化前處理，適用于實驗室精密定量[27]。免疫分析法是利用抗原和抗體的特異結(jié)合反應進行檢測，只適用于樣品少、單一成分的定量，檢測成分多時會增加實驗成本，且重復操作繁瑣。鄧鴻[24]采用免疫分析法測得馬鹿尾睪酮（4.49 ng/g）和雌二醇（0.48 ng/g）含量均比梅花鹿尾睪酮（2.28 ng/g）和雌二醇（0.29 ng/g）含量約高1 倍。董萬超等[25]測得梅花鹿尾睪酮、雌二醇、孕酮和皮質(zhì)醇的含量分別為2.00、0.40、0.13 和1.40 ng/g；雌二醇含量與鹿鞭相近，其它3 者均顯著低于鹿鞭。張高慧[7]對梅花鹿尾和馬鹿尾性激素的對比研究表明，2種鹿尾雌二醇含量無顯著差異，分別為0.57和0.48 ng/g，該結(jié)果與董萬超所得結(jié)果一致，與鄧鴻測得雌二醇結(jié)果相差較大；梅花鹿尾和馬鹿尾睪酮含量分別高達39.44 和58.40 ng/g，孕酮含量分別為2.51和4.85 ng/g，該結(jié)果與前二者的結(jié)果相差約20 倍，推測因鹿尾通過激素調(diào)控自身多種生理行為，故激素分泌量受性別、生育時期等因素影響較大。

2.6 鹿尾中的脂肪酸 脂肪酸是一端含羧基的脂肪族碳氫長鏈，為機體主要的能量來源，具有降血脂、提高免疫力、防治冠心病等功效[28]。目前，食品中脂肪酸測定以GB 5009.168-2016 為依據(jù)，運用氣-質(zhì)聯(lián)用儀進行定性和定量分析。董萬超等[25]運用氣相色譜在梅花鹿7 種副產(chǎn)品中均檢出棕櫚酸、棕櫚油酸、棕櫚二烯酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸7 種脂肪酸；鹿尾總脂肪酸含量為84.91%，低于茸血和鹿血，高于其它4 種鹿產(chǎn)品。張高慧[7]先將鹿尾脫脂并進行甲酯化處理后，采用氣-質(zhì)聯(lián)用法對梅花鹿尾和馬鹿尾中脂肪酸進行定性和定量分析，確定梅花鹿尾含16 種脂肪酸，馬鹿尾含除C20:1 外的15 種脂肪酸；2 種鹿尾脂肪酸含量均只占總脂肪的30%左右。

2.7 鹿尾中的無機元素 無機元素涉及維持機體代謝、電解質(zhì)和體液平衡，對肌肉興奮、骨骼發(fā)育和細胞膜的通透性起重要作用。然而，一些重金屬元素如Pb、Cd、Hg、As等的攝入超過一定限量會危害人體健康。因此，檢測鹿尾無機元素對了解鹿尾營養(yǎng)價值和食用安全性有重要意義。無機元素測定最常用的方法有電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法[29]、火焰原子吸收光譜法和石墨爐原子吸收光譜法[30]等。ICP-MS 結(jié)合了高電離效率的電感耦合等離子體技術(shù)和定性能力強的質(zhì)譜技術(shù)，靈敏度高、速度快、線性范圍廣[31]。鄧鴻等[24]采用原子吸收法和電感耦合等離子體光譜法檢出梅花鹿尾和馬鹿尾均含20 種無機元素，以Na、K、P 含量占比較高，各元素含量2 者無顯著差異。董萬超等[25]檢出梅花鹿尾含K、Na、Ga、Mg、Fe、P、Al、Ba、B、Cd、Co、Cr、Cu、Li、Mn、Mo、Ni、Pb、Sr、Ti、V、Zn 共22 種無機元素，相較于其它鹿副產(chǎn)品，鹿尾中Mg、Cu 含量相對較高。張高慧[7]的研究表明，梅花鹿尾和馬鹿尾中Cu、Pb、Cd、Hg、As 5 種重金屬元素含量均遠低于《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標準》規(guī)定的限量值。

2.8 鹿尾腺及其分泌物的化學成分 尾腺是鹿皮腺中占比最大的腺體，遍及尾皮內(nèi)側(cè)包裹尾椎，呈黑褐色帶細小顆粒的片層，厚度視個體差異而異；質(zhì)地類似肝臟組織，能分泌特殊氣味的物質(zhì)調(diào)控自身多種行為。MULLER-SCHWARZ D[3]用氣相色譜從馴鹿尾腺分泌物中鑒別出以下飽和醛和短鏈酸：正庚醛、正辛醛、乙酸、正壬醛、丙醛、異丁醛、正癸醛、正丁酸、和一個異戊酸與甲基丁酸未分離的混合物，這些醛和酸在馴鹿的瞼板腺和趾間腺分泌物中也有發(fā)現(xiàn)，但以尾腺含量最高。BAKKE J M 等[9]確定馬鹿尾腺分泌物含以下8 種化合物：氨甲環(huán)酸、苯甲酸、苯酚、苯乙酸、鄰甲酚、間甲酚、三苯基丙酸、乙基苯酚。此外，不同種源、性別和采樣時間的馬鹿，分泌物的組成和含量也有顯著差異，但不與采樣時間呈相關(guān)性。KAMEWAKA Y[8]的研究表明尾腺分泌氣體的分泌率隨季節(jié)明顯變化，于9-11 月期間分泌較為旺盛；雌鹿尾腺比雄鹿尾腺大，在妊娠期更為顯著，因此推測尾腺受激素調(diào)控。李淑芳[32]建立了適合鹿尾腺蛋白的雙向電泳體系，并結(jié)合蛋白質(zhì)組學和生物信息學等技術(shù)對不同性別梅花鹿和馬鹿尾腺蛋白的組成、表達和生物功能的差異做了對比研究。結(jié)果表明，同性別的不同鹿種尾腺蛋白含量差異顯著，同種鹿不同性別間無顯著差異；馬鹿尾腺蛋白總量顯著高于梅花鹿尾腺。并且，將尾腺蛋白按功能分為5 類，分別為抗氧化和免疫保護蛋白、體內(nèi)物質(zhì)運輸和儲存蛋白、運動和支持蛋白、物質(zhì)能量代謝調(diào)節(jié)蛋白以及功能未明確的蛋白；還發(fā)現(xiàn)尾腺蛋白中的過氧化物氧還酶2、過氧化物氧還酶6、GST、HSP70、HSP60、HSP27 和白蛋白與機體抗氧化密切相關(guān)，S100A4、S100A10、S100A11、內(nèi)居蛋白、膜聯(lián)蛋白A1、膜聯(lián)蛋白A2、膜聯(lián)蛋白A4、α-烯醇化酶、泛素和溶酶體與機體免疫密切相關(guān)。

縱觀上述研究，對尾腺的研究集中在分泌物的化學成分及生理功能的探討，而諸如尾腺作為“鹿尾精”對人體起補益作用的主要活性成分和相關(guān)作用機理等方面仍有很大研究空間。

3 鹿尾藥理研究進展

傳統(tǒng)醫(yī)學認為鹿尾是陰精所聚之處，即所謂“陽氣聚于角，陰血聚于尾”，即說為“首”者鹿茸，聚陽氣精華，為“尾”者鹿尾，聚陰血精華，因其位于鹿體末端更接近腎臟而具有比鹿茸更強的補腎強體功效[33]。董萬超等[34]灌胃給予雌、雄大鼠不同劑量的鹿尾粉，研究鹿尾對不同性別大鼠性腺的影響。結(jié)果表明，鹿尾能明顯增加雄性大鼠睪丸、前列腺、貯精囊、提肛肌、海綿球肌的重量和雌性大鼠子宮、卵巢的重量。老元飛[35]將鹿尾與中藥配伍應用于治療腰椎間盤突出，取得了顯著療效。徐海娜[36]灌胃給予雌雄大、小鼠不同性別的梅花鹿尾粉，研究不同性別的梅花鹿尾對動物生長發(fā)育、消化代謝、免疫抗炎、性激素和活動機能方面的影響。結(jié)果表明，不同性別梅花鹿尾對大鼠各項生長發(fā)育指標均無顯著影響；梅花鹿尾能顯著增加雄性大鼠血清中IL-2、IgG、睪酮的含量和睪丸指數(shù)以及增加雌性大鼠血清中IL-2、IgG 的含量，但對雌雄大鼠血清中IgM、IgA、孕酮水平和肝、脾指數(shù)均無顯著性影響；不同性別的梅花鹿尾產(chǎn)生的影響無顯著差異。除此之外，梅花鹿尾對小鼠抗疲勞、抗炎具有顯著作用，且推測其可以增強小鼠記憶力；不同性別的梅花鹿尾對以上作用效果無顯著差異。

綜上所述，鹿尾具有多種藥理功效，對機體的神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)等均有一定影響。當前鹿尾藥理活性研究的難點在于一些動物模型如腎陽虛、月經(jīng)不調(diào)等婦科疾病難以合理建立，增強記憶力、治療神經(jīng)衰弱、頭暈耳鳴等模型缺乏成熟的檢測指標和分子作用機制支撐，致使鹿尾藥理研究停滯不前。

4 小結(jié)

綜上所述，鹿尾的確含有多種活性成分并且具有一定的藥理功效。迄今為止，鹿尾化學成分檢測缺乏系統(tǒng)性，其組分復雜，但沒有一種成分是鹿尾特有。今后鹿尾化學成分研究重點應是揭示鹿尾中更多的功能性成分；鹿尾藥理研究較少，尤其在機制通路方面較為空缺，今后應在探討鹿尾藥理作用的基礎(chǔ)上，結(jié)合藥物化學、分子生物學和藥理學等學科探討鹿尾藥理作用機制。鹿尾腺作為鹿尾最重要的特有部位，具有較大的研究潛能。人們口中相傳的“鹿尾精”更是具有極其神奇的效果，但目前還無任何研究證明其主要活性成分及相關(guān)的作用機理?！奥刮簿睂嵸|(zhì)為何尚需進行全面的成分定性和定量分析，其“神奇功能”也要通過大量藥理研究進行探索和驗證。鹿尾化學成分和藥理活性的研究應該均為實際應用服務。對不同鹿尾化學成分和藥理活性進行對比研究，可以闡明鹿尾的特殊之處，為不同鹿尾的品質(zhì)評價和鹿尾功能產(chǎn)品的開發(fā)提供理論支持。