基于“悲則氣消”研究負(fù)面意識(shí)對(duì)大鼠能量代謝和經(jīng)絡(luò)之氣太赫茲輻射的影響

宋楠楠,趙吉超,杜菁,孫冷冰,西旺

(江西中醫(yī)藥大學(xué),江西 南昌 330004)

“悲則氣消”是中醫(yī)學(xué)對(duì)負(fù)面意識(shí)可以影響機(jī)體氣機(jī)功能的一種總結(jié)：悲傷抑郁可以耗傷肺氣，繼而出現(xiàn)氣短聲低、倦怠乏力、免疫功能下降等一系列健康問(wèn)題。而中醫(yī)學(xué)認(rèn)為人體是由形、氣、神3種要素構(gòu)成[1]，三者一體，協(xié)調(diào)統(tǒng)一，是健康的基本保證，反之當(dāng)三者失衡就會(huì)引發(fā)多種疾病?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》在幾千年前的養(yǎng)生觀中就強(qiáng)調(diào)保持“形與神俱”“真氣從之”才能百病不生?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明當(dāng)腦神經(jīng)系統(tǒng)受到悲觀抑郁情緒信息刺激時(shí)，可以引起機(jī)體功能和能量代謝的改變，繼而導(dǎo)致思維和行為的異常，甚至成為一種疾病。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，悲觀抑郁已成為影響國(guó)人身心健康的主要公共衛(wèi)生問(wèn)題。嚴(yán)重的抑郁癥[2]患者都存在高患病率、高復(fù)發(fā)率、高自殺率、易致殘的特點(diǎn)。世界衛(wèi)生組織預(yù)計(jì)到2020年抑郁癥將成為威脅人類健康的第二大疾患，這一社會(huì)醫(yī)療問(wèn)題已經(jīng)受到全世界的關(guān)注。雖然中醫(yī)學(xué)很早就提出形、氣、神協(xié)同工作的理念，強(qiáng)調(diào)七情對(duì)人體健康有著巨大的影響力[3]，總結(jié)了“怒則氣上、恐則氣下、悲則氣消”等病機(jī)，但是這些理念一直缺乏定性定量的系統(tǒng)研究，因此形、氣、神之間的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究和印證。

太赫茲[4](Terahertz radiation，THz)在電磁波譜中位于微波和遠(yuǎn)紅外之間，其頻率范圍在0.1～10 THz，這與人體細(xì)胞的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)頻率已經(jīng)十分接近，因此日本科學(xué)界預(yù)言太赫茲技術(shù)將成為改變未來(lái)世界的十大技術(shù)之首。近年來(lái)太赫茲技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中發(fā)展迅猛，借助生物體都具有不同太赫茲頻率的特點(diǎn)，太赫茲技術(shù)可以通過(guò)檢測(cè)光譜吸收系數(shù)、折射系數(shù)和反射系數(shù)來(lái)識(shí)別不同的生物分子、細(xì)胞結(jié)構(gòu)，甚至可以用于膠膜、結(jié)締組織、經(jīng)絡(luò)等不明確系統(tǒng)的探測(cè)。本課題組已經(jīng)在前期研究中發(fā)現(xiàn)了穴位周圍存在特殊的太赫茲磁場(chǎng)[5]，為中醫(yī)氣學(xué)說(shuō)和經(jīng)絡(luò)的研究提供新的思路和依據(jù)。同時(shí)根據(jù)“氣”所具有推動(dòng)、氣化、防御、固攝、溫煦等功能都需要一定能量供應(yīng)這一特點(diǎn)，檢測(cè)能量的代謝情況可以用來(lái)觀察體內(nèi)意識(shí)對(duì)于氣的影響情況。已經(jīng)有研究表明[6]抗抑郁治療可以影響下丘腦神經(jīng)多種能量相關(guān)腦腸肽。因此，為了要深入的研究悲觀憂郁意識(shí)對(duì)臟腑經(jīng)絡(luò)之氣的影響，本課題組分別對(duì)抑郁模型大鼠經(jīng)絡(luò)穴位的太赫茲波變化，以及CCK、Ghrelin、VIP等能量代謝相關(guān)腦腸肽變化進(jìn)行觀察分析，從物理學(xué)和生物學(xué)角度揭示悲觀情緒意識(shí)與臟腑經(jīng)絡(luò)之氣的關(guān)聯(lián)性，進(jìn)一步為中醫(yī)“形氣神一體”理論的現(xiàn)代研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

6周SPF級(jí)健康雄性SD鼠40只，體質(zhì)量(180±20)g，購(gòu)買(mǎi)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司，每日予以固體飼料，自由飲水，保持室溫(18±2)℃，濕度控制在(55±15)%，適應(yīng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.2 試劑

大鼠腦腸肽CCK、Ghrelin、VIP檢測(cè)試劑盒購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)優(yōu)爾生生物公司；生理鹽水(哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司)。

1.3 儀器

AL204型電子分析天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]，微量進(jìn)樣器(中國(guó)上海安亭微量進(jìn)樣器廠)，QL-861型混合器(其林貝爾儀器制造有限公司)，VERTEX 80v型遠(yuǎn)紅外光譜儀(德國(guó)Brucker公司)，902-ULTS型超低溫冰箱(德國(guó)賽默飛世爾科技有限公司)。

2 方法

2.1 造模

大鼠采用慢性不可預(yù)見(jiàn)溫和刺激配合孤養(yǎng)法造模14 d，即在單籠飼養(yǎng)情況下予以10種不可預(yù)知刺激因素：①突發(fā)束縛；②禁食12 h；③禁水12 h；④突發(fā)夾尾；⑤高溫環(huán)境5 min；⑥4 ℃冰水浸濕；⑦低電壓電擊10 s；⑧潮濕墊料；⑨陌生物體接觸；⑩噪音干擾1 h，采用隨機(jī)數(shù)字的方法，將各種刺激隨機(jī)分配到14 d隨機(jī)時(shí)間當(dāng)中。其中每日采用不同類型的刺激1～3種，使得大鼠不能預(yù)測(cè)并適應(yīng)。刺激14 d后采用懸尾實(shí)驗(yàn)(tail suspension test，TST)計(jì)算10 min內(nèi)大鼠掙扎的次數(shù)，判斷造模情況，當(dāng)出現(xiàn)停止掙扎間歇性的“不動(dòng)”與“絕望”的頻率升高，以及對(duì)外界的光、聲刺激表現(xiàn)敏感，攻擊性增強(qiáng)，晝夜節(jié)律消失，表示造模成功。

2.2 分組方法

利用Excel函數(shù)生成隨機(jī)數(shù)字的方法，將40只SD大鼠分為4組，分別為正常組、抑郁組、悲傷音樂(lè)組、歡快音樂(lè)組，每組10只。正常組適應(yīng)飼養(yǎng)1周，予以水和固體飼料，不做任何不良刺激。抑郁組適應(yīng)飼養(yǎng)1周后，每只單籠孤養(yǎng)，相互不可見(jiàn)，接受溫和刺激后14 d檢驗(yàn)造模成功，停止刺激但不予以治療。悲傷音樂(lè)組：飼養(yǎng)和刺激造模過(guò)程同抑郁模型組，接受刺激14 d后檢驗(yàn)造模成功，每日早晚播放悲傷商調(diào)民族音樂(lè)《二泉映月》30 min。歡快音樂(lè)組：飼養(yǎng)和刺激造模過(guò)程同抑郁模型組，接受刺激14 d后檢驗(yàn)造模成功，每日早晚播放徵調(diào)音樂(lè)《喜相逢》30 min。實(shí)驗(yàn)取得江西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物保護(hù)與倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。操作基本依照《赫爾辛基宣言》進(jìn)行。

2.3 行為學(xué)測(cè)試

給藥14 d后，觀察大鼠的活躍度一般行為學(xué)變化。通過(guò)負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)體力耐力情況，游泳試驗(yàn)：各組的大鼠喂食30 min后，將負(fù)重10%體質(zhì)量金屬尾絲的大鼠放入直徑約50 cm水箱中，控制水溫在(30±0.5)℃。使用秒表記錄開(kāi)始到出現(xiàn)下沉且不能迅速浮起的時(shí)間，其中停止計(jì)時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)為實(shí)驗(yàn)大鼠第一次完全沉入水中超過(guò)10 s，此時(shí)記錄時(shí)間。

2.4 太赫茲穴位檢測(cè)

將每只受測(cè)試大鼠穴位皮膚進(jìn)行剃毛，檢測(cè)時(shí)盡量保持大鼠處于安靜狀態(tài)，受測(cè)試腧穴包括膻中、氣海、肺俞、太淵、中府。受測(cè)試腧穴皮膚保持無(wú)毛發(fā)和破潰。取穴標(biāo)準(zhǔn)參考《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用腧穴名稱與定位標(biāo)準(zhǔn)》，每次每穴位檢測(cè)持續(xù)2 min，軟件自動(dòng)生成太赫茲輻射均值。見(jiàn)圖1。

圖1 大鼠太赫茲儀器檢測(cè)以及結(jié)構(gòu)示意圖

2.5 臟器指數(shù)和血清腦腸肽檢測(cè)

各組大鼠治療14 d后進(jìn)行活體太赫茲穴位輻射檢測(cè)以及行為學(xué)觀察后，尾部靜脈無(wú)菌采血，將血樣置于冰箱中靜置沉淀1 h，在恒溫離心機(jī)上以3 000 r/min離心10 min后抽取上層清液，注入EP管中備檢。按照 ELISA 試劑盒說(shuō)明逐一檢測(cè)血清中CCK、Ghrelin、VIP的含量。

將大鼠處死后摘取胸腺、脾臟和睪丸放在含有PBS緩沖液和生理鹽水的培養(yǎng)皿中反復(fù)洗滌，干燥表面水分以后確定各器官質(zhì)量，計(jì)算公式：器官指數(shù)=小鼠器官質(zhì)量(g)/小鼠體質(zhì)量(g)×100%。

2.6 數(shù)據(jù)分析

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，采用GraphPad Prism 8軟件和SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用ANOVAs分析多組數(shù)據(jù)間的差異。兩兩比較組間方差齊性采用LSD檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠行為及臟器指數(shù)變化

正常組和歡快音樂(lè)組大鼠表現(xiàn)十分活躍，雙眼靈動(dòng)，反應(yīng)迅速，皮毛光潔整齊，游泳時(shí)間較長(zhǎng)，體現(xiàn)出體力耐力良好。與之相對(duì)比，抑郁組模型大鼠出現(xiàn)明顯的氣虛癥狀，出現(xiàn)行動(dòng)緩慢，身體蜷縮，精神萎靡，食欲減退，活動(dòng)范圍減少等情況，辨證信息基本符合氣虛的證候表現(xiàn)。此外抑郁大鼠表現(xiàn)為毛發(fā)凌亂骯臟，敏感攻擊性明顯增強(qiáng)。同時(shí)悲傷音樂(lè)組大鼠的一般狀態(tài)較歡快音樂(lè)組和正常組差，但是優(yōu)于抑郁模型組。從各組大鼠脾臟、胸腺、睪丸指數(shù)來(lái)看，與正常組大鼠比較，抑郁組大鼠的免疫和性器官臟器指數(shù)顯著下降(P<0.05)，提示抑郁大鼠出現(xiàn)了明顯的性功能、免疫功能的下降，而經(jīng)過(guò)歡快音樂(lè)干預(yù)后臟器指數(shù)出現(xiàn)回調(diào)，經(jīng)過(guò)悲傷音樂(lè)干預(yù)后，抑郁大鼠臟器指數(shù)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示悲傷音樂(lè)沒(méi)有加重抑郁狀態(tài)，并且部分大鼠緩解了抑郁負(fù)面刺激的影響。見(jiàn)表1。

表1 大鼠負(fù)重游泳時(shí)間和臟器指數(shù)

3.2 各組大鼠穴位太赫茲波變化

各組大鼠分別測(cè)試了與氣機(jī)關(guān)系最為密切的膻中、氣海、肺俞、太淵、中府5個(gè)穴位，其中與正常組相比，抑郁組大鼠各穴位的太赫茲波輻射明顯下降(P<0.01)，提示隨著負(fù)面信息的刺激，大鼠的經(jīng)絡(luò)之氣的強(qiáng)度下降。經(jīng)過(guò)歡快音樂(lè)干預(yù)后，各穴位的太赫茲輻射強(qiáng)度出現(xiàn)一定回調(diào)(P<0.05)，給予悲傷音樂(lè)刺激后，穴位的太赫茲波磁場(chǎng)沒(méi)有進(jìn)一步減退，在肺經(jīng)穴位太淵、中府的變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在膻中穴的太赫茲輻射與抑郁組相比出現(xiàn)了明顯的上升(P<0.01)，提示悲傷音樂(lè)沒(méi)有加重抑郁狀態(tài)，與歡快音樂(lè)的效果十分接近，說(shuō)明從穴位太赫茲輻射的角度看，不同意識(shí)信息刺激對(duì)于不同穴位和經(jīng)絡(luò)影響存在差異。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠穴位的太赫茲變化

3.3 各組大鼠血清腦腸肽指標(biāo)變化

治療14 d后與正常組相比，抑郁組大鼠血清Ghrelin、CCK、VIP的蛋白含量下降，具有顯著性差異(P<0.05)，與抑郁組相比，悲傷音樂(lè)組血清Ghrelin、CCK、VIP的蛋白含量無(wú)明顯變化，歡快音樂(lè)組血清中腦腸肽含量明顯回升(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血清Ghrelin、CCK、VIP的蛋白含量

4 討論

《淮南子·原道訓(xùn)》中提到：“形者，生之舍也；氣者生之充也；神者，生之制也。一失位則三者傷矣”，在傳統(tǒng)中醫(yī)理論中，形、氣、神三者的平衡協(xié)調(diào)是健康的一大保障。三者相互為用，互相影響[7]。其中“神”接近于人體的意識(shí)，“形”反映了人體的經(jīng)絡(luò)、臟腑組織、皮肉筋脈骨；“氣”體現(xiàn)了維持生命功能的不可見(jiàn)物質(zhì)，三者的失常紊亂，是疾病發(fā)生的主要原因。例如在幾千年前中醫(yī)經(jīng)典《傷寒論》就記載了“奔豚氣”“臟躁”“百合病”“梅核氣”等疾病[8]，都是“神”出現(xiàn)了功能障礙，繼而引發(fā)的氣和形的整體失常。因而《素問(wèn)·上古天真論篇》強(qiáng)調(diào)只有“恬淡虛無(wú)，真氣從之，精神內(nèi)守”才能“病安從來(lái)”，以及“形與神俱”才能“盡終其天年，度百歲乃去”?？梢?jiàn)《黃帝內(nèi)經(jīng)》從幾千前就關(guān)注到形、氣、神三者一體對(duì)于健康的重要性。

意識(shí)(神)是對(duì)于機(jī)體各種功能(氣)的影響是十分迅速的。如《素問(wèn)·舉痛論》所說(shuō)：“怒則氣上，喜則氣緩，思則氣結(jié)，悲則氣消，恐則氣下，驚則氣亂?！彼蕴剿鞅瘋麘n郁等負(fù)面意識(shí)對(duì)于人體之氣升降出入的作用機(jī)制對(duì)于疾病的治療有著重要意義。在本實(shí)驗(yàn)中課題組發(fā)現(xiàn)通過(guò)溫和刺激以及孤養(yǎng)法造成的抑郁大鼠明顯出現(xiàn)了倦怠、活動(dòng)范圍下降、體力耐力下降等表現(xiàn)，從一般行為學(xué)可以看出，悲傷的負(fù)面意識(shí)刺激，可以使大鼠的氣機(jī)收斂和消散，符合中醫(yī)傳統(tǒng)“悲則氣消”的理論。這種氣虛的變化還可從能量代謝的角度來(lái)體現(xiàn)，CCK[9]、Ghrelin、VIP都是與能量有關(guān)的腦腸肽[10]，腦腸肽(brain-gut peptide)是在腦和胃腸道中雙重分布的肽類，肽類受到神經(jīng)功能的影響，又進(jìn)一步參與機(jī)體的消化和能量代謝[11]?，F(xiàn)今國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)意識(shí)到“腦腸軸”[12]的存在，這一發(fā)現(xiàn)與傳統(tǒng)中醫(yī)的形、氣、神理論不謀而合。在本實(shí)驗(yàn)中經(jīng)過(guò)歡快音樂(lè)治療，CCK、Ghrelin、VIP的表達(dá)水平都出現(xiàn)了回調(diào)，能量代謝的水平隨即提升，表現(xiàn)在證候方面的變化是機(jī)體活力的增強(qiáng)，這與行為學(xué)的觀察結(jié)果一致，歡快音樂(lè)組的大鼠無(wú)論從游泳時(shí)間還是活躍度上都得到改善。同時(shí)意識(shí)對(duì)于形體的影響可以從臟器指數(shù)的變化得到印證。與正常組相比，在悲傷憂郁意識(shí)刺激下，大鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)明顯下降，說(shuō)明大鼠的免疫功能受到影響，睪丸指數(shù)下降則提示性功能受到損傷。同時(shí)以上形體的改變經(jīng)過(guò)歡快音樂(lè)的治療都有一定程度的改善，說(shuō)明正面和負(fù)面意識(shí)對(duì)于形體存在著一定程度的影響。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“氣”是一種具有很強(qiáng)活力、并且運(yùn)行不息的極精微物質(zhì)[13]，由于難以辨認(rèn)和觀察，所以有學(xué)者認(rèn)為可以用量子或磁場(chǎng)來(lái)解析氣這種無(wú)形物質(zhì)。太赫茲波的波段介于電磁波與遠(yuǎn)紅外的頻率之間，同時(shí)基于任何物質(zhì)都存在一個(gè)固有頻率的特點(diǎn)[14]，太赫茲技術(shù)可以用來(lái)探測(cè)穴位周圍氣機(jī)的變化[15]，研究發(fā)現(xiàn)悲觀抑郁刺激對(duì)于穴位[16]周圍氣的影響較為明顯，基本符合中醫(yī)“悲則氣消”的特征。經(jīng)過(guò)歡快音樂(lè)干預(yù)后，穴位周圍的氣場(chǎng)得以增強(qiáng)，其中以肺經(jīng)的原穴太淵、中府、肺俞變化較為明顯，而氣海和膻中受到音樂(lè)影響較小。尤其是悲傷音樂(lè)沒(méi)有降低膻中穴的氣場(chǎng)，反而得到加強(qiáng)。課題組推測(cè)抑郁組穴位氣場(chǎng)變化強(qiáng)度可能與臟象理論中“肺在志為悲”有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)存在的一個(gè)問(wèn)題是課題組發(fā)現(xiàn)悲傷音樂(lè)并沒(méi)有加重大鼠的負(fù)面狀態(tài)，沒(méi)有達(dá)到實(shí)驗(yàn)最初預(yù)期，甚至在膻中穴太赫茲強(qiáng)度測(cè)量中悲傷音樂(lè)的效果還好于歡快音樂(lè)，課題組考慮藝術(shù)家創(chuàng)作的音樂(lè)與噪音不同，無(wú)論是悲傷或者喜悅的節(jié)律之所以被人們喜愛(ài)，是因?yàn)樗囆g(shù)音樂(lè)節(jié)律本身就在一個(gè)適合生物修復(fù)的波段上，或者動(dòng)物還無(wú)法理解人類的藝術(shù)音樂(lè)代表的情感。

綜上所述，課題組發(fā)現(xiàn)悲傷憂郁負(fù)面意識(shí)可以通過(guò)影響大鼠體內(nèi)與能量代謝[17]有關(guān)的腦腸肽，從而減低氣的相關(guān)功能，通過(guò)檢測(cè)經(jīng)絡(luò)穴位周圍太赫磁波輻射也可以發(fā)現(xiàn)經(jīng)絡(luò)之氣受到情緒意識(shí)的影響，實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了中醫(yī)“悲則氣消”理論的合理性，從實(shí)驗(yàn)角度體現(xiàn)了“形氣神一體”的特點(diǎn)。