新型生物藥劑對(duì)腐食酪螨的毒力測(cè)定

劉俊杰 駱昕 林金盛 馬林 李輝平 蔣寧 侯立娟 李翠新 曲紹軒*

(1 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所/江蘇省高效園藝作物遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210014；2 西南林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，云南 昆明 650224）

腐食酪螨Tyrophagus putrescentiae，屬于粉螨科Acaridae，食酪螨屬Tyrophagus，是一種世界廣泛分布的儲(chǔ)藏物害螨，經(jīng)常發(fā)生于儲(chǔ)藏食品中，也是食用菌的主要害螨之一[1-2]。腐食酪螨主要取食食用菌菌絲及子實(shí)體，也可為害各級(jí)菌種，在培養(yǎng)料上爬行并傳播各種雜菌，危害程度與螨的數(shù)量有關(guān)。被此螨為害的菌絲斷裂退化，不能長(zhǎng)出絮狀的絨毛菌絲，若是菌種用于生產(chǎn)，易導(dǎo)致絕收[2-3]。此螨主要為害海鮮菇、蟹味菇、金針菇、杏鮑菇、毛木耳、銀耳、猴頭菇、黑木耳、香菇、茶樹(shù)菇等30多種食用菌[4]。

腐食酪螨的生命周期短(僅4～7 d），在適宜溫度和濕度下，在多種食用菌上均有較高的內(nèi)稟增長(zhǎng)率，由于其個(gè)體小、生活隱蔽、繁殖力強(qiáng)，一旦發(fā)生極易暴發(fā)成災(zāi)[4-6]。對(duì)腐食酪螨的防治措施主要有物理防治、生物防治和化學(xué)防治，以化學(xué)防治為主。由于食用菌登記的化學(xué)藥劑只有一種，生產(chǎn)中不規(guī)范用藥頻繁發(fā)生，造成該螨對(duì)多種殺蟲(chóng)、殺螨劑的抗藥性增強(qiáng)，并對(duì)阿維菌素、噠螨靈、螺螨酯、有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥產(chǎn)生高抗性，防治害螨越來(lái)越困難[7-8]。因此，當(dāng)務(wù)之急是要科學(xué)選擇生物源及對(duì)環(huán)境生態(tài)友好，能有效控制腐食酪螨藥劑。筆者選擇近年10個(gè)新型生物藥劑，測(cè)定其對(duì)腐食酪螨的半致死濃度，為科學(xué)選用新型生物制劑防治腐食酪螨提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥劑與儀器

供試的10種新型的生物殺蟲(chóng)殺螨劑分別為4%米爾貝霉素可濕性粉劑，由浙江威爾達(dá)化工有限公司提供；0.4%蛇床子素可溶性液劑、0.5%小檗堿水劑、0.3%苦參堿水劑、0.5%藜蘆堿可溶性液劑、5%魚(yú)藤酮微乳劑、95%礦物油乳油和23%銀杏果提取物可溶性液劑，均由江蘇省農(nóng)藥總站提供；30%茶皂素水劑，為湖北綠天地生物科技有限公司產(chǎn)品；95%伊維菌素原藥，為山西康派偉業(yè)生物科技有限公司產(chǎn)品。對(duì)照藥劑為90%阿維菌素原藥，為上海源葉生物科技有限公司產(chǎn)品。

主要儀器有人工氣候箱SPX-2501，為上海博訊實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品；培養(yǎng)箱HPS-200，為哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品。

1.2 供試菌株和培養(yǎng)基（料）

香菇Lentinus edodes申香-215，由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供。

PDA培養(yǎng)基：葡萄糖13 g/L，馬鈴薯浸提粉4 g/L，瓊脂20 g/L，蛋白胨2 g/L。經(jīng)高壓滅菌后備用。

麥粒培養(yǎng)基：選擇無(wú)霉變無(wú)蟲(chóng)蛀的麥粒，提前浸泡12 h后，高壓滅菌備用。

1.3 香菇麥粒種制備

將直徑4 cm母種(申香215）塊接入裝有10 g麥粒培養(yǎng)基的250 mL的培養(yǎng)瓶中，25℃培養(yǎng)至菌絲滿(mǎn)瓶，放置于4℃冰箱備用。

1.4 供試螨蟲(chóng)

2012年取樣于江蘇省豐縣師寨鎮(zhèn)張寨村毛木耳產(chǎn)區(qū)腐食酪螨，現(xiàn)培養(yǎng)于江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所食用菌實(shí)驗(yàn)室。培養(yǎng)條件：培養(yǎng)箱溫度(24±1）℃，空氣相對(duì)濕度80%±5%，飼料為香菇菌絲(麥粒培養(yǎng)基），飼養(yǎng)方法同趙紅炎等[9]。

1.5 室內(nèi)毒力試驗(yàn)

參照駱昕等[8]的胃毒觸殺聯(lián)合毒力測(cè)定方法。將供試藥劑在預(yù)試的基礎(chǔ)上稀釋5～6個(gè)濃度，每個(gè)濃度重復(fù)4次，設(shè)浸入清水為空白對(duì)照。分別用移液器吸取2 mL藥液至干凈的玻璃瓶中，取1 g香菇麥粒種放入玻璃瓶中浸泡5 min后取出，含藥劑的5粒香菇麥粒種放在底部鋪有濾紙的25 mL養(yǎng)蟲(chóng)瓶中(養(yǎng)蟲(chóng)瓶先用同一濃度同一藥劑潤(rùn)洗）；分層過(guò)濾法收集腐食酪螨成螨0.10 g，用ddH2O沖洗3次，用吸水紙吸干水分后，放入100 mL養(yǎng)蟲(chóng)瓶?jī)?nèi)，顯微鏡下向每個(gè)裝有含藥劑香菇麥粒種的養(yǎng)蟲(chóng)瓶中挑入30只成螨，然后置于25℃、空氣相對(duì)濕度75%±5%、無(wú)光照的培養(yǎng)箱中。試驗(yàn)均為生物制劑，因此統(tǒng)計(jì)48 h的半致死濃度(LC50）。在體視顯微鏡下檢查螨的存活情況，用0號(hào)毛刷輕觸螨體及附肢，不動(dòng)的即視為死亡。統(tǒng)計(jì)各個(gè)濃度梯度死亡的螨數(shù)量。

1.6 數(shù)據(jù)分析

螨蟲(chóng)的死亡率按照以下的公式計(jì)算：

校正死亡率=[(處理組死亡率-對(duì)照組死亡率）/(1-對(duì)照組死亡率）]×100%

毒力測(cè)定所得數(shù)據(jù)用SPSS21軟件進(jìn)行相關(guān)分析和回歸分析，得出相關(guān)系數(shù)R、毒力回歸方程y=ax+b、LC50值及其95%置信區(qū)間。

2 結(jié)果與分析

10種新型生物藥劑對(duì)腐食酪螨的毒力測(cè)定回歸方程及LC50值見(jiàn)表1。由表1可知，處理48 h后，對(duì)照藥劑(90%阿維菌素）的毒力最高(LC50為0.015 mg/L）。在10種新型生物藥劑中，對(duì)腐食酪螨成螨的毒力依次為：4%米爾貝霉素可濕性粉劑＞0.4%蛇床子素可溶性液劑＞0.5%小檗堿水劑＞0.3%苦參堿水劑＞0.5%藜蘆堿可溶性液劑＞5%魚(yú)藤酮微乳劑＞95%伊維菌素原藥＞23%銀杏果提取物可溶性液劑＞30%茶皂素水劑＞95%礦物油乳油。其中以4%米爾貝霉素可濕性粉劑的毒力最強(qiáng)，LC50為2.606 mg/L，0.4%蛇床子素可溶性液劑次之，LC50為17.105 mg/L，95%礦物油乳油的毒力最弱，LC50為8 839.321 mg/L。

表1 48 h后10種新型生物殺蟲(chóng)殺螨劑對(duì)腐食酪螨成螨的毒力測(cè)定

10種新型生物藥劑對(duì)腐食酪螨成螨的毒力測(cè)定結(jié)果表明，其中95%伊維菌素原藥、23%銀杏果提取物可溶性液劑、30%茶皂素水劑和95%礦物油乳油等藥劑對(duì)腐食酪螨成螨毒力很弱，說(shuō)明這些藥劑不能用于防治腐食酪螨的成螨。

3 小結(jié)與討論

腐食酪螨作為儲(chǔ)糧的主要害螨之一，一般采用磷化氫、磷化鋁等熏蒸劑防治，但這些熏蒸劑大都是劇毒品，對(duì)人、畜都有很大的危害性。而腐食酪螨對(duì)磷化氫及常用的殺蟲(chóng)劑如DDT、林丹、環(huán)戊二烯類(lèi)、除蟲(chóng)菊酯、有機(jī)磷、噠螨靈、螺螨酯、阿維菌素等已產(chǎn)生抗性[7-8]。因此，試驗(yàn)?zāi)康木褪窃噲D在新型的生物源殺蟲(chóng)殺螨劑中尋找高效低毒的藥劑來(lái)防治腐食酪螨，降低防治該螨對(duì)人、畜、環(huán)境生態(tài)帶來(lái)的負(fù)面影響，促進(jìn)食用菌產(chǎn)業(yè)的綠色健康可持續(xù)發(fā)展。

試驗(yàn)未涉及田間藥效，采用的胃毒觸殺聯(lián)合毒力測(cè)定的結(jié)果可為田間防治腐食酪螨生物制劑的選擇和用量提供數(shù)據(jù)參考。綜合腐食酪螨室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果，90%阿維菌素原藥和4%米爾貝霉素可濕性粉劑的毒力最強(qiáng)，二者均屬于大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑，是目前已知的最有效的殺蟲(chóng)、殺螨劑[10]；植物源殺蟲(chóng)劑0.4%蛇床子素可溶性液劑、0.5%小檗堿水劑、0.3%苦參堿水劑對(duì)腐食酪螨具有一定的毒殺作用。因此建議在腐食酪螨發(fā)生初期交替施用90%阿維菌素、米爾貝霉素或蛇床子素、小檗堿、苦參堿等藥劑，降低螨口基數(shù)，同時(shí)能延緩害螨產(chǎn)生抗藥性，這些藥劑具有無(wú)交互抗性、安全等特點(diǎn)[11-12]，可作為防治腐食酪螨的備選安全藥劑在田間應(yīng)用，但田間應(yīng)用前應(yīng)評(píng)價(jià)這些生物藥劑對(duì)腐食酪螨的田間防治效果與安全性，不可盲目使用。