高效液相色譜法快速鑒別三七粉品質(zhì)

陳 博，毛希琴

（大連市食品檢驗(yàn)檢測(cè)院，遼寧 大連 116630）

三七，又名田七、金不換，具有止血散瘀、消腫定痛等功效。根據(jù)資料記載，三七常加工成粉末后服用[1]。當(dāng)三七被加工成粉末則失去了原有的性狀特點(diǎn)，易被摻偽、造假，偽劣難辨。據(jù)相關(guān)資料報(bào)道，三七粉的質(zhì)量由三七種植時(shí)間、個(gè)頭大小等因素決定，種植時(shí)間越長(zhǎng)、個(gè)頭越大的三七價(jià)格越高。因此，在利益驅(qū)使下，部分不良商家會(huì)在優(yōu)質(zhì)的三七粉中摻入種植時(shí)間短、個(gè)頭較小的三七粉末，甚至摻入三七葉或三七桿來(lái)以次充好，這些摻假或偽劣三七粉單靠感官檢驗(yàn)很難分辨，目前常見(jiàn)的鑒別方法有薄層色譜法、高效液相色譜法等[2,3]。

研究發(fā)現(xiàn)，三七的化學(xué)成分包括三七皂苷、人參皂苷、黃酮、多糖類等，其中皂苷類成分是三七的主要藥理活性成分。三七中公認(rèn)的活性皂苷類成分主要為人參皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd和三七皂苷R1

[3]。若三七粉中活性皂苷類成分含量越高，則該三七粉的品質(zhì)越好。利用高效液相色譜法可對(duì)三七粉中主要活性皂苷類成分進(jìn)行定量分析，因此可用來(lái)鑒別三七粉的品質(zhì)[4-8]?？紤]到標(biāo)物的成本以及縮短分離時(shí)間，本研究?jī)H以三七皂苷R1和人參皂苷Re、Rg1、Rb14個(gè)化合物作為三七粉品質(zhì)判定的指標(biāo)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260 Infinity II 型高效液相色譜儀；XW-80A型旋渦混合器（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；SK8300GT型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；CR22GⅡ型離心機(jī)（Hitachi Koki Co.,Ltd）。

1.2 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)過(guò)程所需的三七樣品來(lái)源見(jiàn)表1。

表1 三七樣品來(lái)源

三七皂苷R1對(duì)照品（批號(hào)11745-200415）、人參皂苷Rg1對(duì)照品（批號(hào)110703-200424）、人參皂苷Re對(duì)照品（批號(hào)110754-200421）、人參皂苷Rb1對(duì)照品（批號(hào)110704-200420），均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

甲醇、乙腈、乙酸乙酯均為色譜純?cè)噭疄榧兓?/p>

1.3 樣品處理

將5號(hào)樣品洗凈，干燥，粉碎，過(guò)150目篩。其余樣品均過(guò)150目篩后使用。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:依利特SinoChrom ODS-BP（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，按表2的梯度洗脫程序洗脫；流速:1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng):220 nm；柱溫:30℃；進(jìn)樣量:20 μl。

表2 流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精確稱取三七皂苷R1和人參皂苷Rg1、Re、Rb1對(duì)照品各2.5 mg于5 ml容量瓶中，用甲醇溶解定容，得三七皂苷R1和人參皂苷Rg1、Re、Rb1濃度分別為0.5 mg/ml的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 樣品溶液的制備

分別稱取5種三七粉各0.4 g于具塞離心管中，每個(gè)樣品按表3所示的提取溶劑從溶劑1→溶劑3依次提取，渦旋混勻，超聲提取10 min，再渦旋混勻，離心，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，即得樣品溶液1-1、2-1、3-1、4-1、5-1（溶劑1提?。?；1-2、2-2、3-2、4-2、5-2（溶劑2提取）；1-3、2-3、3-3、4-3、5-3（溶劑3提?。?/p>

表3 樣品溶液的提取溶劑

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取2 μl、5 μl、10 μl、15 μl、20 μl、25 μl混合對(duì)照品儲(chǔ)備液分別注入高效液相色譜儀中，按2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄各色譜峰峰面積，再以混合對(duì)照品溶液的進(jìn)樣量(μl)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得出線性回歸方程，如表4所示。用高效液相色譜儀在2.1的色譜條件下對(duì)混合對(duì)照品儲(chǔ)備液進(jìn)行分析，可見(jiàn)人參皂苷Re和人參皂苷Rg1合并出峰，而三七皂苷R1和人參皂苷Rb1均能達(dá)到較好的基線分離。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:各成分線性關(guān)系良好（表4）。

表4 混合對(duì)照品儲(chǔ)備液線性回歸方程

3 結(jié)論與討論

為了對(duì)不同三七粉中不同極性化合物的含量進(jìn)行充分比較，對(duì)所有樣品采取3種極性不同的溶劑體系（表3）按順序提取（樣品用1號(hào)溶劑提取后，殘?jiān)?號(hào)溶劑繼續(xù)提取，最后用3號(hào)溶劑提取經(jīng)2號(hào)溶劑提取后的殘?jiān)?，再?duì)最終的提取液進(jìn)行液相色譜分析，得到的色譜分離譜圖如圖1、圖2和圖3所示。

圖1 不同三七樣品在50%甲醇溶液提取條件下的分離譜圖

圖2 不同三七樣品在100%甲醇溶液提取條件下的分離譜圖

圖3 不同三七樣品在甲醇-乙酸乙酯（1+2）混合溶液提取條件下的分離譜圖

在本研究的色譜條件下，三七皂苷R1和人參皂苷Rb1均能達(dá)到較好的基線分離，但人參皂苷Re和人參皂苷Rg1合并出峰[8-11]。表明人參皂苷Re和人參皂苷Rb1是2個(gè)較難分離的化合物，將2個(gè)化合物基線分離需要較長(zhǎng)的時(shí)間。因本論文只是快速鑒別方法，為了節(jié)約分析時(shí)間，僅對(duì)人參皂苷Re和人參皂苷Rg1進(jìn)行合并計(jì)算，這并不影響對(duì)產(chǎn)品品質(zhì)的判斷。5號(hào)樣品通過(guò)形狀可判斷為正品三七，因而可以將該樣品的粉末作為優(yōu)質(zhì)品進(jìn)行對(duì)照，比較其他4個(gè)不同來(lái)源三七粉的質(zhì)量。

從3種不同極性提取液的提取條件下5個(gè)樣品的色譜分離譜圖來(lái)看，100%甲醇條件下皂苷類化合物已經(jīng)基本提取完全，甲醇-乙酸乙酯（1+2）混合溶液中僅有少量的人參皂苷Rb1，三七皂苷R1、人參皂苷Re+Rg1已經(jīng)基本沒(méi)有。因此，如果以4種活性皂苷類成分作為三七粉質(zhì)量鑒別的指標(biāo)，用100%甲醇作為提取溶劑即可。

比較不同極性提取液的提取條件下5個(gè)樣品的色譜分離譜圖，可以看出，1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)樣品與5號(hào)樣品相比，3號(hào)樣品4種活性皂苷類成分的含量最高，說(shuō)明質(zhì)量最優(yōu)。1號(hào)、2號(hào)樣品的品質(zhì)也不錯(cuò)。但是4號(hào)樣品中幾乎沒(méi)有活性皂苷類成分，基本可以判定為偽品。

實(shí)驗(yàn)證明，可以用100%甲醇作為提取條件提取三七粉，并通過(guò)高效液相色譜法對(duì)提取液中三七皂苷R1和人參皂苷Re、Rg1、Rb14個(gè)化合物定量分析的結(jié)果作為三七粉品質(zhì)判定的指標(biāo)。