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    靈芝深層培養(yǎng)液成分與保濕增效功能探究

    2021-12-27 11:03:16劉鐵平薛仲華曹紅森
    工業(yè)微生物 2021年6期

    劉鐵平,孫 勇,薛仲華,曹紅森

    1.上海禾向健康科技發(fā)展有限公司,上海 201199;2.華東理工大學(xué),上海 200237;3.上海漫虹生物科技有限公司,上海 202154

    隨著人民物質(zhì)生活水平的提高,純天然、多功能、無刺激、無副作用的化妝品越來越受人們的喜愛,具有保濕抗皺美白活性的天然產(chǎn)物在護(hù)膚品中應(yīng)用已成為化妝品行業(yè)未來發(fā)展方向。靈芝中含有豐富的靈芝單、多糖、氨基酸、多肽、三萜類等天然化合物成分,它們具有良好的吸濕保濕功效。具有保濕抗皺美白活性的天然產(chǎn)物在護(hù)膚品中應(yīng)用已成為化妝品行業(yè)未來發(fā)展方向[1-2]。

    研究表明靈芝具有抗氧化、延緩衰老、抗皺、美白等護(hù)膚作用,目前市場上絕大部分靈芝類護(hù)膚品是利用靈芝子實體提取液進(jìn)行加工的,其活性成分含量低、有效成分少,有重金屬殘留和農(nóng)藥殘留等缺點。靈芝深層培養(yǎng)液是利用靈芝菌種進(jìn)行深層培養(yǎng)而得,具有小分子功效成分豐富、活性高、含量高、易吸收、純天然、質(zhì)量穩(wěn)定可控等優(yōu)點[3-4]。

    由此可見,靈芝深層培養(yǎng)液將成為靈芝類保濕抗皺美白活性護(hù)膚品發(fā)展的未來方向。劉博等對靈芝深層培養(yǎng)液成分及復(fù)配的靈芝類護(hù)膚品在保濕抗皺增效功效方面做了初步實驗探究[5]。

    1 實驗儀器與試劑

    1.1 實驗儀器

    皮膚水份測試儀Corneometer CM825,德國CK公司。皮膚彈性測試 Cutometer dual MPA580,德國CK公司。皮膚快速光學(xué)成像系統(tǒng) PRIMOS lite,德國CK 司。VISIA-CR(CANFIELD,美國)。

    1.2 實驗試劑與材料

    靈芝Ganodermalucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.經(jīng)中國科學(xué)院微生物研究所鑒定并保藏于杭州雪域生物技術(shù)有限公司(No.2014394),為深層培養(yǎng)菌種。

    2 實驗方法

    2.1 靈芝深層培養(yǎng)液的制備[6-8]

    2.1.1用杭州雪域生物技術(shù)有限公司保藏靈芝菌種(No.2014394)為深層培養(yǎng)菌種,培養(yǎng)基為玉米淀粉1.5%、大豆蛋白1%、酵母膏0.5%、葡萄糖1%、硫酸鎂0.05%、磷酸二氫鉀0.1%等,與一定量水加入生物反應(yīng)器內(nèi),蒸汽滅菌后冷卻接種培養(yǎng)。

    2.1.2接種靈芝菌種后進(jìn)行生物反應(yīng)器內(nèi)液體深層培養(yǎng),培養(yǎng)參數(shù)為:罐壓0.1 Mp、溫度(26±1)℃、攪拌速度120 r/min~150 r/min、培養(yǎng)時間46 h~50 h。培養(yǎng)后液經(jīng)離心分離所得濾液即為靈芝深層培養(yǎng)液。

    2.2 靈芝護(hù)膚品性能及對照組比較[9-11]

    以靈芝深層培養(yǎng)液代替?zhèn)鹘y(tǒng)護(hù)膚品配方中保濕劑組分制成靈芝保濕抗皺套裝,對照組為傳統(tǒng)配方。

    2.3 受試人群的選定

    選擇臉部為干性肌膚,臉部皮膚角質(zhì)層水分含量值小于65,眼部皮膚有皺紋,眼角皺紋評分大于等于3分(D0)受試者66名,年齡范圍在45~60周歲。受試者在臉部使用測試產(chǎn)品前、連用14 d后及連用28 d后分別進(jìn)行皮膚角質(zhì)層含水量、皮膚彈性、眼角圖像拍攝、臉部成像采集、自我評估問卷、并由1名專家評價員對受試者的眼角皺紋進(jìn)行視感評估。產(chǎn)品使用前后的評價結(jié)果通過統(tǒng)計學(xué)檢驗方法進(jìn)行比較從而判斷是否有統(tǒng)計學(xué)差異。

    2.4 檢測部位

    (1)皮膚角質(zhì)層含水量:臉頰部位;

    (2)皮膚彈性:外眼角兩側(cè);

    (3)眼角圖像拍攝:外眼角兩側(cè);

    (4)臉部成像采集:整臉;

    (5)自我評估問卷:整臉;

    (6)專家評估-眼角皺紋:外眼角兩側(cè)。

    2.5 檢測環(huán)境

    本次測試的測試環(huán)境為溫度 21.3 ℃~21.8 ℃,相對濕度 46.0%~55.0%,符合方案設(shè)計的要求。

    2.6 統(tǒng)計方法

    統(tǒng)計分析軟件為SPSS。在不同時間點的測量值與基礎(chǔ)值比較,使用前后比較,如果值為正態(tài)分布,則采用t檢驗方法進(jìn)行統(tǒng)計分析;如果非正態(tài)分布,可采用秩和檢驗方法進(jìn)行統(tǒng)計分析;

    統(tǒng)計方法均采用雙尾檢驗,檢驗水準(zhǔn)=0.05。

    安全性評價采用統(tǒng)計描述的方法,分析不良事件程度和不良事件持續(xù)時間。

    計算使用前的變化率,公式如下:

    使用產(chǎn)品第2周后的Δ(差值)=T2-T0

    使用產(chǎn)品第4周后的Δ(差值)=T4-T0

    使用產(chǎn)品第2周后:

    使用產(chǎn)品第4周后:

    式中,T0:使用試樣前受試區(qū)的皮膚參數(shù)本底值。

    T2:受試區(qū)使用試樣第 2 周后,皮膚參數(shù)數(shù)值。

    T4:受試區(qū)使用試樣第 4 周后,皮膚參數(shù)數(shù)值。

    N:受試者人數(shù)。

    3 測試依據(jù)

    3.1 樣本完成情況

    入組 66 名受試者,最終完成 66 名受試者,平均年齡為(48.95+0.07)歲。具體納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)見《附件 3:樣本完成情況》。

    3.2 產(chǎn)品使用及耐受性反饋情況

    每名受試者在 4 周內(nèi)按要求使用測試樣品,依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范 2015》[12],根據(jù)不良反應(yīng)記錄結(jié)果顯示無任何不良反應(yīng)出現(xiàn)。

    4 儀器檢測結(jié)果及統(tǒng)計分析

    4.1 皮膚角質(zhì)層含水量(Corneometer):

    皮膚含水量(角質(zhì)層)檢測結(jié)果見表1。

    表1 皮膚含水量(角質(zhì)層)檢測

    結(jié)果解釋:

    測試樣品連續(xù)使用第14 d、第28 d后,臉部皮膚(角質(zhì)層)含水量均有極顯著性上升(p<0.001)。

    連續(xù)使用對照區(qū)組產(chǎn)品后,臉部皮膚(角質(zhì)層)含水量在第 14 d、第 28 d均無顯著性差異(p>0.05);

    測量值:皮膚角質(zhì)層含水量越高,說明皮膚角質(zhì)層水分含量越高。

    (n.s.”表示無統(tǒng)計學(xué)差異,*代表0.01

    4.2 皮膚角質(zhì)層水分含量(Corneometer)測試產(chǎn)品與對照區(qū)域?qū)Ρ惹闆r

    皮膚含水量(角質(zhì)層)檢測結(jié)果見表2。

    表2 皮膚含水量(角質(zhì)層)檢測結(jié)果

    (n.s.”表示無統(tǒng)計學(xué)差異,*代表0.01

    結(jié)果解釋:

    連續(xù)使用樣品的區(qū)域使用的第14 d、第28 d后,使用靈芝保濕套裝的臉部皮膚(角質(zhì)層)含水量均極顯著性高于對照組(p<0.001)。

    測量值:皮膚(角質(zhì)層)含水量值越高,角質(zhì)層水分含量就越高。

    4.3 皮膚彈性值(Cutometer R2)

    皮膚彈性值檢測結(jié)果見表3。

    表3 皮膚彈性值檢測結(jié)果

    連續(xù)使用測試樣品后的第14 d(見圖3),臉部皮膚彈性值在無顯著性差異(p>0.05),在產(chǎn)品使用的第 28 d有非常顯著性上升(0.001

    (n.s.表示無統(tǒng)計學(xué)差異,*代表0.01

    連續(xù)使用對照組產(chǎn)品后,臉部皮膚彈性值在使用第14 d、第28 d均無顯著性差異(p>0.05)。

    測量值:產(chǎn)品試樣的皮膚彈性值越接近 1,皮膚彈性就越好。

    4.4 皮膚彈性值(Cutometer)測試產(chǎn)品與對照區(qū)域?qū)Ρ惹闆r

    皮膚彈性值檢測結(jié)果見表4。

    表4 皮膚彈性值檢測結(jié)果

    連續(xù)使用測試樣品區(qū)域的第14 d和28 d(見圖4),測試樣品對臉部皮膚彈性值與對照組對比無顯著性差異(p>0.05)。

    (n.s.表示無統(tǒng)計學(xué)差異,*代表0.01

    4.5 測試樣品對眼角皺紋(Sa)影響

    眼角皺紋檢測結(jié)果見表5。

    表5 眼角皺紋(Sa)檢測結(jié)果

    連續(xù)使用測試產(chǎn)品靈芝保濕套裝后(見圖5),眼角皺紋在產(chǎn)品使用的第14 d、第28 d均有下降,但均無顯著性差異(p>0.05)。

    (n.s.表示無統(tǒng)計學(xué)差異,*代表0.01

    連續(xù)使用測試樣品區(qū)域的第14 d和28 d,測試樣品對眼角皺紋與對照組對比無顯著性差異(p>0.05)。

    測量值:產(chǎn)品試樣的Sa 值越小,眼角皺紋粗糙度就越小。

    連續(xù)使用測試產(chǎn)品靈芝保濕套裝 14 d后(見表6),有57.58%的受試者感到肌膚緊實光滑,57.58%的受試者感到肌膚細(xì)膩有光澤,42.42%的受試者感到肌膚更柔軟了,51.52%的受試者感到細(xì)紋有改善,42.42%的受試者感到皺紋有改善,60.61%的受試者感到皮膚彈性有提升,66.67%的受試者感到皮膚有水潤感,有 66.67%的受試者覺得總體有改善,72.73%的受試者對產(chǎn)品的總體感到滿意。

    表6 14 d后受試者自我評估

    連續(xù)使用測試產(chǎn)品靈芝保濕套裝28 d后(見表7),有 60.61%的受試者感到肌膚緊實光滑,57.58%的受試者感到肌膚細(xì)膩有光澤,51.52%的受試者感到肌膚更柔軟了,63.64%的受試者感到細(xì)紋有改善,60.61%的受試者感到皺紋有改善,51.52%的受試者感到皮膚彈性有提升,60.61%的受試者對產(chǎn)品的總體感到滿意。

    表7 28 d后受試者自我評估

    5 保濕基礎(chǔ)物質(zhì)與保濕機(jī)理

    據(jù)文獻(xiàn)報道,對靈芝深層發(fā)酵液進(jìn)行高壓液相分析,對照各類化合物標(biāo)準(zhǔn)峰及特征峰,可大致得出靈芝深層發(fā)酵液中有較多的糖類、氨基酸或多肽類等,靈芝發(fā)酵液中多糖等物質(zhì)的含量要比空白基液及培養(yǎng)基多,對保濕增濕效果明顯。

    5.1 靈芝多糖保濕機(jī)理 [13-14]

    靈芝多糖一般由D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-木糖、L-巖藻糖、L-阿拉伯糖等單糖組成多糖。保濕作用機(jī)理:① 單與多糖分子中的羥基、羧基等極性基團(tuán)可與水形成氫鍵而結(jié)合大量的水分。多糖分子之間各種鏈相互交織成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),有很強的固水作用。另外在多糖與皮膚中纖維狀蛋白質(zhì)共同組成含大量水分的膠狀基質(zhì)。② 多糖具有良好的成膜性能??稍谄つw表面形成一層均勻的薄膜.減少皮膚表面的水分蒸發(fā),使得水分從基底組織彌散到角質(zhì)層,保存皮膚自身的水分而完成潤膚作用。因此多糖的高吸水性和良好的成膜性完美結(jié)合,能為皮膚提供很好的保濕增濕效果。③ 多糖具有良好的成膜性能。靈芝深層發(fā)酵液中多糖等物質(zhì)能使水分從皮膚基底組織彌散到角質(zhì)層,保存皮膚自身的水分而起到潤膚作用,為皮膚提供很好的保濕增濕效果。

    5.2 討論

    (1)靈芝深層發(fā)酵液保濕效果明顯好于空白對照液。通過體內(nèi)法和體外法保濕效果綜合評價,及利用皮膚分析系統(tǒng),進(jìn)行保濕效果對比,結(jié)果顯示靈芝深層發(fā)酵液保濕效果明顯優(yōu)于空白對照液。體外法中實驗結(jié)果表明靈芝深層深層發(fā)酵液保濕率高于未發(fā)酵液,表明靈芝深層發(fā)酵液保濕效果更加好,可進(jìn)一步加以利用和研究。

    (2)靈芝深層中深層發(fā)酵液有較多的糖類、氨基酸或多肽類,且比未發(fā)酵液多,這些物質(zhì)中部分還有羥基與水分子形成氫鍵,達(dá)到鎖住水分達(dá)到保濕效果。靈芝發(fā)酵液具體成分及其保濕機(jī)理仍有待進(jìn)一步的研究。靈芝在發(fā)酵過程中發(fā)生怎樣的物質(zhì)變化,對皮膚保濕作用機(jī)理,起保濕作用的具體物質(zhì),有待進(jìn)一步用實驗方法來論證。

    6 展望

    實驗證明靈芝經(jīng)過深層發(fā)酵后保濕效果有很大的提高,但對靈芝深層發(fā)酵液的深度開發(fā)還需進(jìn)一步研究和論證。有以下幾方面:

    (1)可將靈芝發(fā)酵液以一定的形式和配比制成保濕水、保濕潤滑霜、面膜、抗皺增白霜等,發(fā)揮靈芝深層發(fā)酵液保濕增濕性能。為化妝品市場提供含中草藥成分的系列護(hù)膚品,物美價廉,安全可靠。

    (2)通過高壓液相分析,靈芝深層發(fā)酵液中有效成分有糖類、氨基酸或多肽類等,但它們具體含量和結(jié)構(gòu)型式尚未完全清楚。應(yīng)繼續(xù)深入研究靈芝深層發(fā)酵前后具體成分變化,檢測其化學(xué)結(jié)構(gòu),探討靈芝深層發(fā)酵液保濕機(jī)理。

    (3)進(jìn)一步開發(fā)化妝品保濕功效評價方法,更能科學(xué)解釋皮膚保濕性能,完善評價方法,制定相關(guān)保濕標(biāo)準(zhǔn)。

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