中藏藥制劑治療牦牛腹瀉病的效果研究

黃向月，何世明，吳錦波，余康健，陸 勇，劉 建，余忠華

（阿壩藏族羌族自治州畜牧科學(xué)技術(shù)研究所，四川 紅原 624402）

近年來，隨著國家獸用抗生素減少使用政策的實施，多項研究報道了中藥及其提取物將成為防控牛羊腹瀉病的一種主要手段。為此，我們根據(jù)中藥理論和多個經(jīng)驗方形成三個處方，比較處方之間、原藥材和提純液對牦牛腹瀉的防治效果，并研究其對牦牛肝、腎和小腸的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 在四川省阿壩州各縣選擇自然發(fā)病的腹瀉牦牛、牦牛犢和部分健康牦牛、牦牛犢作為研究對象。試驗期間各試驗點牛群自由飲水，飼養(yǎng)管理條件一致。

1.2 中藏藥方劑 處方一：黃連、白頭翁、黃柏、秦皮、金銀花、生地、赤芍、丹皮、照白杜鵑葉、珠芽蓼、巖白菜等。

處方二：漆樹子、石榴皮、桂皮、芒硝、蛇床子、白姜、藍翠雀花、光明鹽等。

處方三：多穗蓼、兔耳草、翼首草、船形烏頭、茜草、止瀉木子、巖白菜、藏馬兜鈴等。

每個處方應(yīng)用現(xiàn)代中藏藥加工技術(shù)分別制成散劑及口服液。口服液規(guī)格：20 mL∕支，每1 mL相當于原生藥1 g。

1.3 臨床治療試驗 隨機選擇不同腹瀉程度的牦牛犢及成年牦牛分別進行三個處方的灌服給藥，每個處方用藥的牦牛不少于15頭。牦牛犢每頭1支，成年牛每頭2支，2次∕d，連續(xù)用5 d。療效判定標準如下：

顯效：腹瀉癥狀明顯減輕；治愈：腹瀉癥狀基本消失；無效：治療效果不佳，采用輔助治療后仍未改善。

1.4 制劑篩選試驗 利用現(xiàn)代中藏藥加工新工藝分別使用原藥材、提純液兩種方式制備藥劑，比較臨床治療效果。

1.5 安全性試驗 隨機選擇20頭成年牦牛均分為4組，分別按0、1、3、5倍劑量灌服給藥。即0倍劑量：不給藥，正常采食，1倍劑量：20 mL∕次·頭，3 倍劑量：60 mL∕次·頭，5 倍劑量：100 mL∕次·頭。2 次∕d，連續(xù)用藥15 d。屠宰后剖檢，分別采集肝臟、腎臟及小腸組織進行HE染色，檢查組織是否存在病理學(xué)變化。

1.6 擴大臨床試驗 在阿壩州各縣組建多個試驗牛群，選擇自然發(fā)病的腹瀉牦牛和牦牛犢，灌服給藥，每個處方不少于50 頭，劑量和療效判定標準同1.3。

1.7 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)使用SPSS軟件進行顯著性檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各處方對腹瀉牦牛犢、成年牦牛的治療效果 由于散劑在使用時存在喂服不便、容易浪費繼而計量不準確等缺點，因此選擇將藥物制成口服液的方式給藥。通過對不同程度腹瀉牦牛犢及成年牦牛進行臨床試驗，結(jié)果得出處方一、二、三對腹瀉牦牛犢的治愈率分別為87.72%、81.08%、75.00%，處方一、二、三對腹瀉成年牦牛的治愈率分別為81.25%、72.41%、80.00%。其中處方一對腹瀉牦牛犢的治愈率顯著高于處方二對腹瀉成年牦牛的治愈率（P＜0.05），其他各處方的治愈率差異均不顯著（圖1）。圖2顯示各處方對腹瀉牦牛犢、成年牦牛均有一定的治療效果，且處方一對腹瀉牦牛犢及成年牦牛的有效率高達98.25%、96.88%（有效率＝有效樣本數(shù)∕總樣本數(shù)×100%，有效樣本數(shù)＝治愈樣本數(shù)＋顯效樣本數(shù)）。從以上兩個結(jié)果來看，處方一對腹瀉牦牛犢、成年牦牛的治療效果均優(yōu)于處方二和三，因此選擇處方一（暫命名“牛羊腹瀉口服液”）作為后續(xù)試驗的確定方藥。

圖1 各處方對腹瀉牦牛犢、成年牦牛的治愈率比較

圖2 各處方對腹瀉牦牛犢、成年牦牛的有效率比較

2.2 不同提取方法所得“牛羊腹瀉口服液”的療效對比 臨床治療試驗表明，使用提純液和原藥材制成的口服液的治愈率分別為80.17%、81.28%（圖3），兩者差異不顯著，因此選擇更方便加工的提純液作為方藥的提取工藝。

圖3 不同提取方式的治愈率比較

2.3 不同劑量“牛羊腹瀉口服液”對牦牛內(nèi)臟組織的影響 對0、1、3、5倍劑量服藥的腹瀉牦牛剖檢，進行肝臟、腎臟及小腸組織病理學(xué)檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1、3、5倍劑量組的小腸黏膜結(jié)構(gòu)大致正常，出現(xiàn)淋巴細胞和個別嗜酸性粒細胞浸潤并伴隨輕、中度炎癥，而不給藥組的小腸黏膜表面被破壞，部分腺體結(jié)構(gòu)紊亂并伴隨重度炎癥；各組的黏膜下層及肌壁未見異常。此外，各劑量組肝小葉、門管及膽管結(jié)構(gòu)基本正常，有輕、中度炎癥細胞浸潤，偶見血竇及血管擴張出血。各劑量組腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)結(jié)構(gòu)均大致正常，伴有輕、中度炎癥細胞浸潤。

2.4 “牛羊腹瀉口服液”在阿壩州內(nèi)各縣應(yīng)用的結(jié)果 對自然發(fā)病的腹瀉成年牦牛進行口服液灌服治療，結(jié)果該口服液對26 658頭腹瀉牦牛的治愈率高達79.54%；對13 652頭牦牛犢進行預(yù)防性給藥，結(jié)果牦牛犢腹瀉發(fā)病率僅為8.36%，該口服液對牦牛犢的預(yù)防保護率為91.63%。

表1 “牛羊腹瀉口服液”在阿壩州內(nèi)各縣的應(yīng)用結(jié)果

3 分析與結(jié)論

腹瀉發(fā)生與多種復(fù)雜因素有關(guān)，可能由寄生蟲、病毒、真菌和細菌感染的單個或多個因素引起，也可能受一系列營養(yǎng)、環(huán)境或管理條件的影響所致［1-2］。本試驗借鑒了中藏醫(yī)治療腹瀉病的成方經(jīng)驗，利用綠色中藏藥形成3 個治療牦牛腹瀉性疾病的處方，通過對不同劑型的比較，決定以口服液的形式制成“牛羊腹瀉口服液”用于后續(xù)試驗。之后對不同腹瀉程度的牦牛犢、成年牦牛進行臨床治療，比較各處方的治愈率和有效率，篩選出處方一為試驗藥方。

采用雙盲臨床試驗方法驗證了處方一的提純液口服液和原藥材口服液對腹瀉牦牛的治療效果。結(jié)果表明不同提取工藝的口服液，其治療效果差別不大，但因使用提純液比原藥材更加方便快捷，最終確定該口服液以提純液口服液的方式投產(chǎn)。

為了考察“牛羊腹瀉口服液”對靶動物的安全性，通過急性毒性試驗，檢測肝臟、腎臟及小腸組織病理學(xué)變化，結(jié)果顯示不同劑量口服液可能對小腸黏膜有保護作用，而對小腸黏膜下層及肌壁結(jié)構(gòu)無明顯影響。各劑量組肝組織的肝小葉、門管及膽管，腎組織的腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)等結(jié)構(gòu)均大致正常，偶見異常水腫、出血。趙娟等［3］研究表明，與抗生素治療腹瀉相比，中藥療法可明顯減輕藥物對靶動物免疫功能和消化吸收功能的影響。本試驗結(jié)果與之相近，證明了“牛羊腹瀉口服液”的安全性。

擴大臨床試驗是對“牛羊腹瀉口服液”臨床療效和安全性的進一步驗證，通過該口服液在各地的應(yīng)用示范，確定其對牦牛腹瀉病的療效顯著。已有研究證實，極大可能引起犢牛嚴重腹瀉的隱孢子蟲病在部分國家如新西蘭、阿根廷和法國等的流行率為16%～52%［4-5］。除此之外，出生在寒冷冬季的新生犢牛，由于對環(huán)境的適應(yīng)性較差，且體溫過低而恢復(fù)力較差，容易發(fā)生腹瀉，其發(fā)病率在11.7%～28.8%之間［6］。擴大臨床試驗中，牦牛犢預(yù)防性服用“牛羊腹瀉口服液”后，腹瀉發(fā)病率僅為8.36%，保護率達到91.63%，且與病毒性腹瀉疫苗聯(lián)合用藥的效果更佳。