FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)檢測(cè)性能評(píng)價(jià)

龍婷婷，鄧山鷹，張春瑩，蒙 強(qiáng)，江 虹

（四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科，成都 610041）

0 引言

糞便主要由食物殘?jiān)?、消化道分泌物、脫落?xì)胞及細(xì)菌等組成。糞便檢查對(duì)于了解消化器官功能、診療消化系統(tǒng)疾病及篩查相關(guān)寄生蟲等具有重要意義[1-3]。長(zhǎng)期以來，糞便常規(guī)檢查以手工操作為主，不僅費(fèi)時(shí)耗力、所受影響因素多、結(jié)果隨機(jī)性大，而且存在潛在的生物安全風(fēng)險(xiǎn)。我院較早地開展了糞便自動(dòng)檢驗(yàn)，并引進(jìn)FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)進(jìn)行臨床樣本檢測(cè)。該儀器于2019年問世，通過對(duì)FA160糞便分析儀的升級(jí)與完善，不僅提高了檢測(cè)效率，而且進(jìn)一步提高了圖像采集的清晰度。由于改進(jìn)了智能識(shí)別功能，對(duì)有形成分的檢測(cè)能力更強(qiáng)，大大提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。截至目前，該儀器的相關(guān)性能評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)未見報(bào)道。為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性，本研究對(duì)FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)的臨床應(yīng)用性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

陽性標(biāo)本：留取儀器檢測(cè)陽性，且經(jīng)手工法驗(yàn)證含有紅細(xì)胞（RBC）和/或白細(xì)胞（WBC）和/或真菌的新鮮標(biāo)本，將多份標(biāo)本混合組成含RBC、WBC及真菌等成分的陽性標(biāo)本；收集儀器檢測(cè)陽性，且經(jīng)手工法確認(rèn)含鉤蟲卵的新鮮標(biāo)本。

比對(duì)標(biāo)本：隨機(jī)選擇2020年4月20—24日本實(shí)驗(yàn)室接收的200例（40例/d）糞便標(biāo)本，其中男性106例、女性94例，年齡13～87歲，平均年齡（53.14±14.52）歲。

1.2 儀器和試劑

FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)（四川沃文特生物技術(shù)有限公司）和配套稀釋液（批號(hào)：1912091；效期：2020-12-01）、沖洗液（批號(hào)：1911163；效期：2021-11-26）、卡式便隱血試劑（批號(hào)：1911262；效期：2020-11-06）；條形便隱血檢測(cè)試劑（杭州艾博生物醫(yī)藥有限公司）；CX21光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；生理鹽水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：T20022607；效期：2023-01）。

1.3 檢驗(yàn)方法

1.3.1 FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)自動(dòng)檢測(cè)

嚴(yán)格按照儀器操作說明書進(jìn)行上樣、自動(dòng)檢測(cè)、審核結(jié)果等操作。

1.3.2 手工涂片鏡檢

挑選火柴頭大小的不正常部位或不同部位的糞便，用生理鹽水稀釋涂片。在低倍鏡下至少觀察10個(gè)視野，高倍鏡下至少觀察20個(gè)視野。所有操作均按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程和《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第4版）要求進(jìn)行[4]。查見RBC、WBC、真菌、寄生蟲蟲卵等即為陽性，用“＋”表示，“±”表示弱陽性，“－”表示陰性或未查見。

1.3.3 手工便隱血試驗(yàn)

將多點(diǎn)采集的疑似不正常部位的糞便標(biāo)本加入含稀釋液的樣品杯中，充分混勻后插入條形便隱血檢測(cè)試劑，5 min內(nèi)觀察結(jié)果[4]。試紙條質(zhì)控區(qū)和檢測(cè)區(qū)均顯示紅色條帶即為陽性。

1.4 檢測(cè)性能評(píng)價(jià)

1.4.1 空白試驗(yàn)

以儀器配套稀釋液作為空白標(biāo)本加入樣本管，用FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)連續(xù)檢測(cè)10次，分析RBC、WBC、真菌、膿細(xì)胞、寄生蟲蟲卵等的檢出情況及便隱血檢測(cè)結(jié)果。判斷標(biāo)準(zhǔn)：檢測(cè)結(jié)果為陰性則符合臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理要求，陽性或查見則不符合，以符合率≥95%作為空白試驗(yàn)通過的標(biāo)準(zhǔn)[5]。

1.4.2 重復(fù)性試驗(yàn)

取新鮮陽性標(biāo)本于FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)上連續(xù)檢測(cè)11次，分析第2～11次RBC、WBC、真菌、便隱血及寄生蟲蟲卵檢測(cè)結(jié)果與第1次檢測(cè)結(jié)果的一致性。判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果不能為陰性，且重復(fù)率≥95%判斷為合格[5]。

1.4.3 攜帶污染試驗(yàn)

取新鮮陽性標(biāo)本分別加入9個(gè)樣本管中，編號(hào)為P1～P9；再取樣本稀釋液分別加入9個(gè)樣本管中，編號(hào)為N1～N9；將上述2種樣本管按P1～P3、N1～N3、P4～P6、N4～N6、P7～P9、N7～N9順序依次用FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。判斷標(biāo)準(zhǔn)：N1～N9無病理成分檢出且便隱血試驗(yàn)陰性判斷為合格。

1.4.4 卡式便隱血試劑檢測(cè)范圍驗(yàn)證

根據(jù)卡式便隱血試劑說明書提供的線性范圍要求，制備濃度梯度分別為3 000、2 000、1 000、500、1、0.5、0.2、0.1、0.05和0.025μg/mL的血紅蛋白（Hb）液，用FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)濃度檢測(cè)3次。

1.4.5 儀器與手工法比對(duì)試驗(yàn)

對(duì)收集的比對(duì)標(biāo)本分別進(jìn)行FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)檢測(cè)及手工法檢測(cè)，觀察儀器檢測(cè)與手工法檢測(cè)結(jié)果的差異。對(duì)于結(jié)果不一致的，則通過手工法檢測(cè)復(fù)查儀器稀釋后的糞便懸液[6]。樣本比對(duì)總符合率≥80%判斷為合格。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)表示，采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢驗(yàn)，一致性采用Kappa檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 空白試驗(yàn)結(jié)果

10個(gè)樣本稀釋液管均未查出RBC、WBC、真菌、膿細(xì)胞、寄生蟲蟲卵等成分，且便隱血試驗(yàn)結(jié)果全部為陰性（見表1）。檢測(cè)符合率為100%，空白試驗(yàn)合格。

表1 FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)空白試驗(yàn)結(jié)果

2.2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

用FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)連續(xù)檢測(cè)陽性樣本11次，第2～11次的檢測(cè)結(jié)果與第1次的檢測(cè)結(jié)果完全一致（見表2），檢出RBC、WBC、真菌情況以及便隱血試驗(yàn)結(jié)果符合率均為100%。寄生蟲蟲卵陽性樣本重復(fù)檢測(cè)11次，結(jié)果均查見寄生蟲蟲卵，表明儀器檢測(cè)重復(fù)性好。

表2 FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.3 攜帶污染試驗(yàn)結(jié)果

在交叉檢測(cè)的樣本中，編號(hào)為P的樣本檢測(cè)出大量RBC、WBC和真菌孢子，且便隱血試驗(yàn)結(jié)果均呈陽性；編號(hào)為N的樣本檢測(cè)結(jié)果均為陰性（見表3）。儀器未出現(xiàn)交叉污染。

表3 FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)攜帶污染試驗(yàn)結(jié)果

2.4 卡式便隱血試劑檢測(cè)范圍驗(yàn)證結(jié)果

當(dāng)Hb濃度低于0.1μg/mL時(shí)，隱血試驗(yàn)結(jié)果為陰性；當(dāng)Hb濃度達(dá)到0.1μg/mL時(shí)，隱血試驗(yàn)逐漸顯示出弱陽性，且隨著濃度增大，陽性程度增強(qiáng)。但當(dāng)Hb濃度高達(dá)3 000μg/mL時(shí)，結(jié)果反而呈現(xiàn)陰性（見表4）。上述檢測(cè)結(jié)果與試劑說明書所述卡式便隱血試劑檢測(cè)陽性范圍為0.2～2 000μg/mL相符。

表4 FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)卡式便隱血試劑檢測(cè)范圍驗(yàn)證結(jié)果

2.5 儀器與手工法比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果

FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)所報(bào)告的RBC、WBC、真菌與手工法檢測(cè)符合率分別為99.0%、97.5%、96.5%，Kappa值分別為0.852、0.802、0.701，RBC、WBC一致性較好，真菌一致性一般（見表5）。且FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)對(duì)有形成分的檢出率更高，經(jīng)χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法統(tǒng)計(jì)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。儀器與手工法檢測(cè)便隱血的符合率為96.0%，Kappa值為0.870，結(jié)果一致性極好（見表6），且差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。儀器與手工法結(jié)果比對(duì)合格。對(duì)于便隱血比對(duì)中結(jié)果不一致的8例樣本，經(jīng)再次檢測(cè)復(fù)查，其中有6例陽性、2例陰性，表明FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)檢測(cè)糞便隱血準(zhǔn)確性比手工法更高。

表5 FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)與手工法檢測(cè)糞便有形成分結(jié)果比對(duì)單位：例

表6 FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)與手工法檢測(cè)糞便隱血結(jié)果比對(duì)單位：例

3 討論

糞便檢測(cè)由于取材方便、無創(chuàng)，且對(duì)消化系統(tǒng)相關(guān)疾病診療存在重要意義，因此成為臨床三大常規(guī)檢查項(xiàng)目之一[7]。但長(zhǎng)期以來落后的檢測(cè)技術(shù)嚴(yán)重阻礙了糞便檢驗(yàn)的發(fā)展，難以適應(yīng)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程。為提高糞便檢驗(yàn)水平，拓展其臨床應(yīng)用價(jià)值，2009年科瑞杰醫(yī)療器械公司研發(fā)了第一臺(tái)數(shù)字化全自動(dòng)操作糞便檢驗(yàn)儀，開創(chuàng)了我國(guó)糞便自動(dòng)檢驗(yàn)的先河[8]。隨后各種糞便自動(dòng)檢測(cè)設(shè)備應(yīng)運(yùn)而生，并不斷推陳出新[9-10]。其中，沃文特公司研制的FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)采用軌道式進(jìn)樣，可自動(dòng)采集標(biāo)本理學(xué)性狀圖像，并能一站式完成樣本稀釋、混勻過濾、穿刺吸樣、采圖傳輸、計(jì)算機(jī)識(shí)別等過程，具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快捷、干擾因素少、生物安全度高等優(yōu)勢(shì)。

本研究對(duì)FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)進(jìn)行了檢測(cè)性能評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示：樣本稀釋液10次檢測(cè)均未查出RBC、WBC、真菌等成分，且便隱血結(jié)果全為陰性，空白試驗(yàn)合格。陽性標(biāo)本重復(fù)檢測(cè)11次，第2～11次檢測(cè)結(jié)果與第1次檢測(cè)結(jié)果完全一致，儀器重復(fù)性好。裝有稀釋液的樣本管交叉放置于陽性樣本中，并用FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，陽性標(biāo)本均檢測(cè)到RBC、WBC和真菌，且便隱血試驗(yàn)陽性；而稀釋液樣本管檢測(cè)結(jié)果全為陰性，表明儀器無攜帶污染，與該系列產(chǎn)品FA160糞便分析儀的相關(guān)報(bào)道一致[11]。經(jīng)驗(yàn)證，卡式便隱血試劑檢測(cè)陽性范圍與儀器說明書所述Hb濃度在0.2～2 000μg/mL范圍相符。通過比對(duì)試驗(yàn)可知，F(xiàn)A280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)與人工法檢測(cè)糞便RBC、WBC、真菌及便隱血結(jié)果符合率均在90%以上，結(jié)果一致性總體較好，符合臨床要求。由于寄生蟲蟲卵檢出率相對(duì)較低，數(shù)據(jù)存在偏差，有待擴(kuò)大樣本量再進(jìn)行寄生蟲蟲卵檢出情況比對(duì)。FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)報(bào)告的有形成分檢出率及便隱血陽性率均高于手工法，分析其可能的原因包括：（1）儀器采集的視野數(shù)多于人工鏡檢要求的視野數(shù)，提高了有形成分的檢出率[12]；（2）手工取樣存在較大的隨機(jī)性，容易漏檢，而FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)為全樣本混勻，可降低漏檢的概率；（3）儀器所需標(biāo)本量大于手工涂片的標(biāo)本量，在一定程度上提高了陽性率。當(dāng)然，儀器所報(bào)告的陽性結(jié)果并非全為真陽性，在比對(duì)試驗(yàn)中，RBC有2例假陽性，WBC有4例假陽性，真菌有4例假陽性，幾乎都是食物殘?jiān)男螒B(tài)干擾。故而，手工法仍然是形態(tài)識(shí)別的金標(biāo)準(zhǔn)[13]，當(dāng)儀器報(bào)告結(jié)果時(shí)，必須通過人工審核，保證結(jié)果準(zhǔn)確無誤，才能發(fā)送檢驗(yàn)報(bào)告。便隱血試驗(yàn)比對(duì)中有8例標(biāo)本結(jié)果不一致，經(jīng)手工法復(fù)查FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)稀釋后的糞便懸液，結(jié)果有6例陽性、2例陰性，可能與標(biāo)本選擇部位不同、反應(yīng)時(shí)間控制不一致、試劑的靈敏度不同以及肉眼對(duì)陽性檢測(cè)線的判讀存在主觀性等因素有關(guān)。由比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果可知，儀器的靈敏度較高，僅1例WBC、3例真菌為假陰性，故而用儀器法篩查糞便標(biāo)本或?qū)⒔o臨床檢驗(yàn)工作帶來較大的便利。

FA280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)是糞便檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展和不斷完善的成果，實(shí)現(xiàn)了樣本處理的自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，有助于提高糞便檢測(cè)的陽性率及檢測(cè)效率，可有效避免交叉污染，降低人工鏡檢的生物安全風(fēng)險(xiǎn)，保護(hù)檢驗(yàn)者及環(huán)境衛(wèi)生。但儀器檢驗(yàn)也存在自身的不足：在識(shí)別糞便顏色和性狀時(shí)容易受反光因素干擾；對(duì)于一些大小、形態(tài)與細(xì)胞等有形成分相似的糞便殘?jiān)着凶x錯(cuò)誤；對(duì)于一些原蟲類寄生蟲（如藍(lán)氏賈第鞭毛蟲卵、人芽囊原蟲和阿米巴包囊等）的識(shí)別能力較差；針對(duì)標(biāo)本量不同的標(biāo)本無法自動(dòng)調(diào)整稀釋液體積，導(dǎo)致糞便懸液過稀或過濃，影響涂片結(jié)果；在Hb含量過高的糞便檢查中，便隱血試劑可因“鉤狀效應(yīng)”出現(xiàn)假陰性結(jié)果[14]。故而儀器檢測(cè)尚不能完全取代人工鏡檢，需制定相應(yīng)的復(fù)檢規(guī)則[15]，儀器報(bào)告結(jié)果也應(yīng)經(jīng)過人工審核確認(rèn)后再發(fā)送。同時(shí)要保證檢驗(yàn)質(zhì)量，務(wù)必要做好檢測(cè)前和檢測(cè)后的質(zhì)量控制，為臨床提供準(zhǔn)確可靠的診療指標(biāo)。

總體而言，F(xiàn)A280自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果與手工法比對(duì)合格，儀器性能良好，適用于臨床糞便標(biāo)本的檢測(cè)。