C-Jun在乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義的Meta分析*

宗 雪，居紅格，2

(1.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014060；2.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院)

據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)布的關(guān)于癌癥研究的數(shù)據(jù)顯示[1]:在全球范圍內(nèi)僅2020年新增乳腺癌患者已經(jīng)230萬例，在全部新確診癌癥中占11.7 %。死亡病例69萬例，是惡性腫瘤導(dǎo)致女性死亡的主要原因之一。乳腺癌已經(jīng)對全球女性的生命健康造成嚴(yán)重威脅，也加重了社會負(fù)擔(dān)。因此，降低乳腺癌死亡率，應(yīng)采取乳腺癌篩查、早預(yù)防、早治療等有效措施。當(dāng)前，尋找特異靶點進(jìn)行有效預(yù)防和治療是研究的熱點。轉(zhuǎn)錄因子c-Jun是核內(nèi)原癌基因，屬于AP-1家族成員，由單個外顯子構(gòu)成，由334個氨基酸構(gòu)成的蛋白JUN，編碼定位于細(xì)胞核，其分子量為39 kDa[2]。在AP-1的構(gòu)成和細(xì)胞增殖，分化，凋亡和腫瘤轉(zhuǎn)化過程中c-Jun都參與其中,并起到促進(jìn)作用[3]。據(jù)研究[4-6]，c-Jun在結(jié)直腸癌、宮頸癌和胃癌中表達(dá)水平較高，且與癌細(xì)胞的分化程度相關(guān)，分化程度越差，蛋白表達(dá)水平越高?，F(xiàn)有研究[1-12]，c-Jun在乳腺癌中的表達(dá)水平具有一定差異性。本研究采用薈萃分析方法探討c-Jun乳腺癌與其臨床特征的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1選擇研究文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn) (1)納入研究的文獻(xiàn)是關(guān)于c-Jun與乳腺癌及其臨床病理特征相關(guān)文獻(xiàn)，并且已經(jīng)在國內(nèi)外公開發(fā)表；(2)文獻(xiàn)中以病例對照的研究為主；(3)研究對象均為被確診的乳腺癌患者；(4)患者術(shù)前未接受其他相關(guān)特殊治療(放療、化療、靶向治療等)；(5)c-Jun檢測方法為免疫組化(IHC)，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量或嚴(yán)重程度判斷表達(dá)結(jié)果；(6)文獻(xiàn)未提供研究結(jié)果的效應(yīng)量，但可根據(jù)原始數(shù)據(jù)計算得出；(7)語言限于中、英文。

1.2文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn) (1)文獻(xiàn)中研究結(jié)果無法得出效應(yīng)量；(2)文獻(xiàn)屬重復(fù)發(fā)表、記錄的原始數(shù)據(jù)完整、樣本量偏少、文獻(xiàn)質(zhì)量差；(3)摘要、論述、綜述、等全文不夠完整的文獻(xiàn)；(4)樣本量研究對象為非人類的文獻(xiàn)。

1.3檢索策略 利用計算機(jī)，通過中國知網(wǎng)、萬方、維普等數(shù)據(jù)庫、中國生物醫(yī)學(xué)服務(wù)系統(tǒng)、PubMed網(wǎng)站、全球最權(quán)威的EMBASE數(shù)據(jù)庫、科克倫圖書館、Web of Science以及中國臨床試驗注冊中心進(jìn)行檢索。檢索的文獻(xiàn)截止時間到 2021-01，中文關(guān)鍵詞包括乳腺癌、乳癌、c-Jun原癌基因、c-Jun蛋白；English keywords include breast cancer, breast cancer, c-Jun proto-oncogene, and c-Jun protein;檢索采用主題詞和自由詞相結(jié)合的方式進(jìn)行，文獻(xiàn)語言僅限于中文和英文。

1.4文獻(xiàn)篩選和資料提取 2名研究人員根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)檢索搜到的文獻(xiàn)，并從最終納入的文獻(xiàn)中提取數(shù)據(jù)，包括文題、第一作者姓名、發(fā)表年份、總例數(shù)、c-Jun在乳腺癌組及對照組例數(shù)和表達(dá)水平等的情況，在不同時間提取2次文獻(xiàn)資料，分別計算組合效應(yīng)量，比較前后兩次的結(jié)果有無差異，有差異時由第3名研究者再次校對。

1.5文獻(xiàn)質(zhì)量評價 根據(jù)紐塞爾渥太華量表(Newsell-Ottawa Scale，NOS)，研究者從人群選擇研究、群體可比性和暴露因子測量三個方面對納入的文獻(xiàn)進(jìn)行了8個項目的獨立評分。0-5星代表低質(zhì)量研究，6-9星代表高質(zhì)量研究。

1.6統(tǒng)計學(xué)分析 使用RevMan5.3軟件對納入研究的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。χ2檢驗用于檢驗納入文獻(xiàn)的異質(zhì)性。如果研究結(jié)果之間不存在異質(zhì)性或異質(zhì)性較小(I2≤ 50 %或P>0.1)，使用固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析；如果研究間存在顯著異質(zhì)性(I2> 50 %或P≤0.1)，則采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析。Meta分析的檢驗水平α = 0.05，結(jié)果以森林圖表示，RD值、OR值和相應(yīng)的95 % CI用于評估c-Jun乳腺癌與其臨床病理特征之間的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1文獻(xiàn)檢索結(jié)果 從各個數(shù)據(jù)庫共檢索3 311篇文獻(xiàn)，經(jīng)篩選，最終收錄5篇。文獻(xiàn)篩選過程及結(jié)果見圖1所示。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

2.2納入文獻(xiàn)的關(guān)鍵特征和質(zhì)量評估 共收錄5篇文章，其中英文2篇，中文3篇。納入文獻(xiàn)主要特征見表1，納入NOS文獻(xiàn)質(zhì)量等級見表2。

表1 納入研究基本特征

表2 NOS量表質(zhì)量評價

2.3Meta 分析結(jié)果

2.3.1乳腺癌中c-Jun陽性率 5篇[8-12]文獻(xiàn)報道了乳腺癌中c-Jun的表達(dá)情況，經(jīng)過對337例異質(zhì)性檢驗后，研究間異質(zhì)性較小(I2=30 %，P=0.22)，因此固定效應(yīng)模型的結(jié)果表明：c-Jun在乳腺癌的陽性率為82 %[RD=0.82，95 % CI(0.71，0.93)，P<0.00](圖2)。

圖2 單臂研究c-Jun在乳腺癌中的表達(dá)情況

2.3.2乳癌組和對照組中c-Jun表達(dá)情況 3篇文獻(xiàn)[8-10]報道了乳腺癌組與對照組c-Jun表達(dá)情況，其中乳腺癌組222例，對照組97例。經(jīng)異質(zhì)性檢驗，研究間異質(zhì)性較小(I2=41 %，P=0.19)，因此固定效應(yīng)模型結(jié)果顯示乳腺癌組c-Jun水平高于對照組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義[OR=10.79, 95 % CI(5.85, 19.89),P<0.00](圖3)。

圖3 乳腺癌組和對照組中c-Jun表達(dá)情況

2.3.3c-Jun在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)情況 有兩篇文獻(xiàn)[9,12]討論了乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，以及c-Jun表達(dá)，將已經(jīng)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的78例患者分在一組，27例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者為一組。由于研究中發(fā)現(xiàn)各組間異質(zhì)性較小(I2=0 %，P=0.98)，因此，顯示其結(jié)果采用固定效應(yīng)模型。組間c-Jun的表達(dá)水平存在差異，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，具有統(tǒng)計學(xué)意義[OR=9.61，95 % CI(2.27，40.69)，P=0.002](圖4)。

圖4 c-Jun有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)

2.3.4不同分化程度c-Jun表達(dá)情況 2篇[9-10]文獻(xiàn)報道了乳腺癌不同分化程度c-Jun表達(dá)情況，其中Ⅰ和Ⅱ級72例，Ⅲ級67例。各研究間異質(zhì)性較小(I2=0%，P=0.60)，故采用固定效應(yīng)模型結(jié)果顯示，兩組間c-Jun表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義[OR=0.99，95 % CI(0.36，2.77)，P=0.99](圖5)。

圖5 乳腺癌不同分級中c-Jun表達(dá)情況

2.4敏感性分析 采用隨機(jī)和固定模型，OR值、95% CI和I2一致，敏感性分析采用Stata 14.0，結(jié)果見圖4。分析納入文獻(xiàn)及其數(shù)據(jù)后，刪除任何一篇文章對結(jié)果影響不大，說明meta分析的結(jié)果是穩(wěn)定的(圖6)。

圖6 敏感性分析

3 討論

乳腺癌[12]是一種高度異質(zhì)性疾病，具有不同的組織學(xué)類型和不同的生物學(xué)臨床特征。Biro等人[13]根據(jù)腫瘤表面分子的表達(dá)將乳腺癌分為四種不同的分子亞型：luminal A、luminal B、HER2和base-like型。其中，三陰型惡性程度最高，侵襲性強，預(yù)后差。目前治療以手術(shù)以及放化療為主，沒有特異性治療。已有研究證明，乳腺癌致癌驅(qū)動分子可以作為乳腺癌治療靶點。翟婧彤等[14]發(fā)現(xiàn)，多腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制劑被證實對PALB2胚系突變的三陰性乳腺癌患者有一定的療效。Luo等[15]發(fā)現(xiàn)，CDK6可以作為腫瘤抗微環(huán)境的靶標(biāo)，其表達(dá)與三陰性乳腺癌患者組織中的血管生成和纖維化腫瘤微環(huán)境呈正相關(guān)。乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，涉及許多解釋乳腺癌發(fā)生機(jī)制的分子，尋找更好特異性靶點仍是研究者關(guān)注的熱點。

c-Jun[16-17]最早在家禽中發(fā)現(xiàn)，與禽肉瘤逆轉(zhuǎn)錄病毒 ASV17 基因同源，是第一個發(fā)現(xiàn)的致癌轉(zhuǎn)錄因子。有研究發(fā)現(xiàn)[18]，生理功能的c-Jun可以促進(jìn)胚胎肝臟發(fā)育以及肝臟和皮膚再生。病理功能的c-Jun參與致癌基因誘導(dǎo)的肝臟和皮膚腫瘤的形成。突變的致癌基因激活下游的絲裂原激活蛋白激酶(MAPKs)信號，然后MAPK促進(jìn)c-Jun絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化和活化，形成同源二聚體c-Jun-c-Jun或異源c-Jun-c-fos和c-Jun-ATF[17-21]。這些二聚體與cAMP反應(yīng)元件(CRE)DNA序列TGACGTCA結(jié)合，直接驅(qū)動轉(zhuǎn)錄激活細(xì)胞周期蛋白D1和表皮生長因子，在細(xì)胞外參與細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞增殖，進(jìn)行信號的轉(zhuǎn)錄應(yīng)答[19-20]。

現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，c-Jun在某些腫瘤內(nèi)呈高表達(dá)水平。Oya等[21]發(fā)現(xiàn)，c-Jun高表達(dá)與獲得性囊性腎臟疾病和腎細(xì)胞癌非典型細(xì)胞異常增殖有關(guān)，強調(diào)了c-Jun活化在腎細(xì)胞癌早期癌變中的作用。Liu[22]等發(fā)現(xiàn)，c-Jun在卵巢癌的表達(dá)水平明顯高于癌旁，強調(diào)了其過表達(dá)抑制了miR-6089的抑癌作用并增強了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和增殖。

在目前關(guān)于乳腺癌組織中c-Jun表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系的研究，結(jié)果存在分歧。朱鳳雪[23]通過印跡蛋白研究發(fā)現(xiàn)，c-Jun蛋白在乳腺癌患者中的表達(dá)水平低于正常乳腺組織，在晚期TNM III期乳腺癌中其表達(dá)水平低于TNM I期。而在程瑞雪、劉曉麗、Tiniakos等[8-10]研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌中c-Jun的蛋白表達(dá)水平，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于腫瘤旁組織。本研究結(jié)果提示c-Jun在乳腺癌組中表達(dá)率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.00)。劉曉麗、Langer等[9,12]經(jīng)過對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的研究，認(rèn)為c-Jun在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌中表達(dá)有一定差異性。本次研究結(jié)果，c-Jun在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，呈高表達(dá)，與淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組的表達(dá)存在差異，有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)。在研究分化程度時，Langer等[10]認(rèn)為c-Jun在低分化組中高表達(dá)。而劉曉麗等[9]認(rèn)為，它在高分化組中高表達(dá)，本研究結(jié)果認(rèn)為，c-Jun在這兩組的表達(dá)分化差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.99)。

萬芳[24]通過印跡蛋白發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細(xì)胞中，c-Jun呈高表達(dá)，且c-Jun表達(dá)水平在雌激素受體陰性與陽性的乳腺癌細(xì)胞中有所不同，陰性高于陽性。趙煥[25]研究發(fā)現(xiàn)，c-Jun的表達(dá)情況隨乳腺導(dǎo)管內(nèi)增生性病變加重而增加，在浸潤性導(dǎo)管癌中顯著增加。進(jìn)一步證實高水平表達(dá)的c-Jun促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生，且與病變程度相關(guān)。

目前c-Jun在乳腺癌中治療的研究表明[26-28]，作為立早癌基因，c-Jun 與乳腺癌增殖和血管生成存在一定關(guān)系，c-Jun 的過表達(dá)導(dǎo)致ER +乳腺癌細(xì)胞對他莫昔芬的敏感性降低。因此，阻止腫瘤血管生成，c-Jun靶向治療是一種有效的新方法。有關(guān)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的研究發(fā)現(xiàn)[29]，帕那替尼(一種酪氨酸激酶抑制劑)可通過ERK/c-Jun信號通路抑乳腺癌肺轉(zhuǎn)移(BCLM)相關(guān)基因的表達(dá)。c-Jun也是BCLM的關(guān)鍵因素和潛在藥物靶標(biāo)。

綜上所述，本組meta分析結(jié)果表明c-Jun高表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)，c-Jun在乳腺癌進(jìn)展中起重要作用，提示c-Jun有可能作為乳腺癌潛在治療靶標(biāo)。

這項研究在某些方面仍然存在缺陷：(1)通過廣泛的數(shù)據(jù)庫搜索檢索到了5篇文獻(xiàn)，病例總數(shù)少，研究樣本少，結(jié)果可能受到一定影響；(2)部分文獻(xiàn)不能完全檢索數(shù)據(jù)，因此無法進(jìn)行完整全面分析；(3)c-Jun的判讀標(biāo)準(zhǔn)不同，結(jié)果的統(tǒng)計會有一定差異，還需要更大的樣本和更好的實驗研究來驗證結(jié)果。