改良激光輔助孵化技術(shù)在解凍移植（FET）周期中的應(yīng)用

江旺航 吳成亮 蘇占營 辜敏

[摘要] 目的 探討改良激光輔助孵化技術(shù)（LAH）對凍融胚胎（D3、D5、D6）臨床結(jié)局的影響。 方法 回顧性分析2019年1月至2020年12月在本生殖中心實(shí)施玻璃化凍融胚胎移植的患者共計(jì)786例，其中進(jìn)行改良激光輔助孵化LAH 338例，傳統(tǒng)激光輔助孵化（LAH）448例。觀察兩組受精胚胎的復(fù)蘇率、胚胎植入率、臨床妊娠率、早期流產(chǎn)率、異位妊娠率等臨床指標(biāo)。 結(jié)果 兩組胚胎復(fù)蘇率、胚胎植入率、臨床妊娠率、早期流產(chǎn)率、異位妊娠率分別為100.00%和99.32%、49.35%和42.34%、62.43%和57.81%、9.48%和17.76%、1.42%和2.70%;改良LAH組的胚胎植入率、臨床妊娠率、早期流產(chǎn)率、異位妊娠率和傳統(tǒng)LAH組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），胚胎復(fù)蘇率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;改良LAH組中的囊胚（D5、D6）組臨床妊娠率、胚胎植入率與D3胚胎組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;囊胚（D5、D6）早期流產(chǎn)率、異位妊娠率與D3胚胎組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;兩組的胚胎復(fù)蘇率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 改良激光輔助孵化技術(shù)比傳統(tǒng)激光輔助孵化技術(shù)對凍融胚胎（D3、D5、D6）在臨床結(jié)局上有一定的優(yōu)化作用。

[關(guān)鍵詞] 改良激光鐳射;輔助孵化;凍融胚胎;臨床結(jié)局

[中圖分類號(hào)] R714.8? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2021）28-0083-05

Application of modified laser-assisted hatching technique in frozen-thawed embryo transfer （FET） cycle

JIANG Wanghang? ?WU Chengliang? ?SU Zhanying? ?GU Min

Department of Assisted Reproduction， Maternal and Child Health Hospital of Jiujiang City， Childrens' Hospital of Jiujiang City in Jiangxi Province， Jiujiang? 332000， China

[Abstract] Objective To explore the impact of modified laser-assisted hatching （LAH） technique on the clinical outcome of frozen-thawed embryos （D3， D5， D6）. Methods A total of 786 patients who underwent vitrification freeze-thaw embryo transfer in our reproductive center from January 2019 to December 2020 were retrospectively analyzed， including 338 cases of modified LAH and 448 cases of traditional LAH. The clinical indicators such as resuscitation rate， embryo implantation rate， clinical pregnancy rate， early miscarriage rate， and ectopic pregnancy rate of the fertilized embryos in the two groups were observed. Results The embryo resuscitation rates， embryo implantation rates， clinical pregnancy rates， early miscarriage rates， and ectopic pregnancy rates in the two groups were respectively 100.00% and 99.32%， 49.35% and 42.34%， 62.43% and 57.81%， 9.48% and 17.76%， 1.42% and 2.70%. The embryo implantation rates， clinical pregnancy rates， early miscarriage rates， and ectopic pregnancy rates in the modified LAH group showed differences with statistical significance （P<0.05） than the traditional LAH group， and there was no significant difference in the rates of embryo resuscitation（P>0.05）. The clinical pregnancy rates and embryo implantation rates of the blastocyst （D5， D6） group in the modified LAH group had statistically significant differences （P<0.05） than the D3 embryo group. The early miscarriage rates and ectopic pregnancy rates of the blastocyst （D5， D6） showed differences with statistical significance （P<0.05） than the D3 embryo group. The difference in embryo resuscitation rates between these two groups was not significant， without statistical significance （P>0.05）. Conclusion The improved laser-assisted incubation （LAH） technique was better than the traditional laser-assisted incubation technique in optimizing the clinical outcome of freeze-thaw embryos （D3， D5， D6）.

[Key words] Modified laser; Assisted hatching; Frozen-thawed embryo; Clinical outcome

透明帶是一種包裹在人類卵母細(xì)胞和早期胚胎周圍的由糖蛋白、碳水化合物和透明帶特種蛋白構(gòu)成13～15 μm厚非細(xì)胞結(jié)構(gòu)。透明帶有兩層的，外層稍厚，內(nèi)層薄而有彈性。透明帶在著床前參與精子頂體反應(yīng)并促進(jìn)精子卵子融合，防止多精子受精以維護(hù)早期胚胎的三維結(jié)構(gòu)，形成保護(hù)屏障。人類在內(nèi)的大多數(shù)哺乳動(dòng)物胚胎，發(fā)育至囊胚階段后，透明帶因囊胚腔擴(kuò)張逐漸變薄，這一過程叫自然孵化。囊胚先從透明帶中釋放再進(jìn)入宮腔，以使滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞與子宮內(nèi)膜細(xì)胞接觸，從而著床。胚胎和子宮共同作用使透明帶在宮腔中消失。一些學(xué)者可以觀察到哺乳動(dòng)物囊胚孵化前的擴(kuò)張和透明帶變薄及人類囊胚的體外培養(yǎng)中，孵化階段透明帶還會(huì)發(fā)生周期性的收縮和膨脹，這樣使囊胚擴(kuò)張和透明帶糖蛋白的張力形成，經(jīng)過多次周期性的收縮膨脹，透明帶厚度逐漸變薄，直至破裂。滋養(yǎng)層細(xì)胞從透明帶破裂口延伸突出，最終整個(gè)囊胚孵出于透明帶外，胚胎定位，著床、植入于子宮內(nèi)膜。胚胎先要能順利孵出，才能在子宮內(nèi)膜上著床。胚胎在體外培養(yǎng)過程中可能會(huì)缺少細(xì)胞溶解素等物質(zhì)，從而導(dǎo)致透明帶變硬，滋養(yǎng)層細(xì)胞可以分泌溶解素，使透明帶可以變軟容易破口。Sehiewe等[1]證實(shí)過胚胎在體外培養(yǎng)環(huán)境中，溶解素的數(shù)量會(huì)減少，而且質(zhì)量會(huì)變差，從而會(huì)導(dǎo)致囊胚很難從透明袋中孵出，從而無法在內(nèi)膜上著床。Manna等[2]通過評估透明帶消失的時(shí)間，也證實(shí)胚胎在體外培養(yǎng)透明帶會(huì)硬化從而阻礙胚胎孵出或延長囊胚擴(kuò)張時(shí)間，缺少子宮分泌的溶解透明帶物質(zhì)，也可導(dǎo)致胚胎很難孵出。在體外授精（IVF）過程中，隨著女性年齡增加、卵泡刺激素（FSH）水平升高都可以導(dǎo)致胚胎透明帶加厚或者畸形，也會(huì)使胚胎在子宮環(huán)境下孵出困難。Wood[3]認(rèn)為胚胎在冷凍過程中容易受到損傷進(jìn)而可能會(huì)減弱其著床的能力;而且冷凍復(fù)蘇過程也增加了透明帶在囊胚孵出過程中的阻力，使囊胚很難孵出，采用輔助孵化（Assisted hatching，AH）可優(yōu)化早期卵裂胚胎和囊胚[4]的擴(kuò)張和孵出，從而提高其臨床的各項(xiàng)指標(biāo)。

輔助孵化激光法（Laserassisted hatching，LAH）是各種輔助孵化技術(shù)[5]中的一種，相對于其他輔助孵化技術(shù)更簡便、快速、安全[6]，目前大多數(shù)生殖中心采用LAH將新鮮胚胎和凍融胚胎的透明帶進(jìn)行削薄或開口化處理，以望改善其移植后的臨床結(jié)局[7]。我中心將傳統(tǒng)的LAH進(jìn)行改良，經(jīng)過改良激光輔助孵化技術(shù)在進(jìn)行孵化時(shí)，處理的范圍更大，更符合胚胎著床的生理過程，同時(shí)切除透明帶的部位更大（<1/4），不會(huì)在孵出中產(chǎn)生嵌頓，而且選擇在解凍第二步（細(xì)胞仍處于皺縮期）開始激光孵化，不直接接觸透明帶內(nèi)的細(xì)胞，可以最大程度上避免對細(xì)胞的熱損傷，接觸透明帶的位置、切除厚度、作用時(shí)間等均優(yōu)于薄化和打小孔。本研究將改良激光輔助孵化技術(shù)運(yùn)用于解凍移植周期中，使凍融胚胎的胚胎植入率和臨床妊娠率提高并且降低異位妊娠率、流產(chǎn)率，對促進(jìn)試管嬰兒成功率的提高具有一定的臨床意義[8]，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年1月至2020年12月在我院生殖醫(yī)學(xué)中心施行解凍移植周期的患者作為研究對象（共786個(gè)周期），納入標(biāo)準(zhǔn)[9]：①年齡<40歲;②施行IVF-ET技術(shù)的周期，胚胎發(fā)育為D3、D5、D6[10]三期的胚胎;③D5、D6囊胚優(yōu)胚率（4BB級(jí)別以上包括4BB）和D3優(yōu)胚率（卵裂球數(shù)≥7個(gè)，碎片率<25%）標(biāo)準(zhǔn)不一樣，三期胚胎優(yōu)胚率均達(dá)到85%以上。排除標(biāo)準(zhǔn)[11-16]：①染色體異常者;②生殖系統(tǒng)畸形者;③輸卵管積水者;④子宮內(nèi)膜薄者;⑤子宮內(nèi)膜異位癥者;⑥5期和6期冷凍囊胚者;⑦因胚胎的優(yōu)劣而影響臨床結(jié)局者。根據(jù)患者知情同意后進(jìn)行改良激光輔助孵化技術(shù)分為改良LAH組338個(gè)周期和傳統(tǒng)LAH組448個(gè)周期。

1.2 方法

1.2.1 促排卵和IVF-ET? 采用常規(guī)方法進(jìn)行促排卵、取卵、體外受精和胚胎培養(yǎng)，采用的試劑為瑞典Vitrolife系的G1和G2。胚胎質(zhì)量評估內(nèi)容有卵裂球的數(shù)目、碎片百分比、大小均勻度及發(fā)育速度。D3期移植1～2枚胚胎，移植后剩余的胚胎再經(jīng)過患者知情同意后，將其冷凍保存或繼續(xù)培養(yǎng)成D5/D6期的囊胚再冷凍保存起來。將自然周期或激素替代周期作為FET子宮內(nèi)膜的準(zhǔn)備方案，囊胚評分采用Gardner評分標(biāo)準(zhǔn)，其詳細(xì)內(nèi)容如下[17]。根據(jù)囊胚腔的大小和是否孵化將囊胚的發(fā)育分為6個(gè)時(shí)期：1期：早期有腔室囊胚，囊胚腔小于胚胎總體積的1/2;2期：囊胚腔體積≥胚胎總體積的1/2;3期：完全擴(kuò)張囊胚，囊胚腔完全占據(jù)了胚胎的總體積;4期：擴(kuò)張囊胚，囊胚腔完全充滿胚胎，胚胎總體積變大，透明帶變薄;5期：正在孵出的囊胚，囊胚的一部分從透明帶中逸出;6期：孵出的囊胚，囊胚全部從透明帶中逸出。處于3～6期的囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)質(zhì)量分級(jí)：A級(jí)：細(xì)胞數(shù)目多，排列緊密;B級(jí)：細(xì)胞數(shù)目少，排列松散;C級(jí)：細(xì)胞數(shù)目很少。3～6期的囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞分級(jí)：A級(jí)：上皮細(xì)胞層由較多的細(xì)胞組成，結(jié)構(gòu)致密;B級(jí)：上皮細(xì)胞層由不多的細(xì)胞組成，結(jié)構(gòu)松散;C級(jí)：上皮細(xì)胞層由稀疏的細(xì)胞組成。

1.2.2 兩組激光破膜設(shè)備和參數(shù)? 本中心采用激光破膜儀為Research instrument（Saturn Active），激光功率為300 mW，脈沖寬度為0.001～2.000 ms。在高倍顯微鏡下尋找胚胎，再切換激光物鏡下，電腦鼠標(biāo)控制位置，科學(xué)調(diào)整激光發(fā)射時(shí)間。傳統(tǒng)激光輔助孵化在透明帶打孔薄化和打孔，激光半徑為3.8 μm，脈沖寬度為 0.158 ms;改良激光輔助孵化主要是消除<1/4透明帶（包含冷凍前激光皺縮時(shí)透明帶開孔處），激光半徑為 9.7 μm，脈沖寬度為0.405 ms。

1.2.3 玻璃化冷凍和試劑? 囊胚在冷凍前要進(jìn)行激光法，人工在透明帶打孔皺縮，等到囊腔快完全皺縮后再冷凍。采用的試劑為日本加藤VT101玻璃化冷凍試劑盒，在室溫25℃左右先將胚胎轉(zhuǎn)移至平衡（ES）液，卵裂球和囊胚分別在ES液中的平衡時(shí)間為5～6 min和7～8 min。再將胚胎轉(zhuǎn)移至玻璃化（VS）液，在60 s內(nèi)將胚胎裝載到日本加藤Cryotop冷凍載桿上，最后投入液氮中保存。

1.2.4 玻璃化冷凍胚胎的解凍和試劑? 解凍采用的試劑是日本加藤VT102玻璃化解凍試劑盒，將裝載有凍胎的載桿放入事先在37℃預(yù)溫的解凍液WS1中停留1 min，轉(zhuǎn)入WS2液中停留3 min，再依次轉(zhuǎn)移胚胎至解凍液WS3、WS4液各停留5 min，最后將胚胎轉(zhuǎn)入已經(jīng)平衡好的囊胚培養(yǎng)液G2（Vitrolife系列，瑞典）中。胚胎復(fù)蘇的標(biāo)準(zhǔn)為解凍后胚胎復(fù)蘇的細(xì)胞數(shù)≥50%總細(xì)胞數(shù)。

1.2.5 傳統(tǒng)激光輔助孵化及胚胎移植和試劑? 卵裂期胚胎在解凍復(fù)蘇完成轉(zhuǎn)入囊胚培養(yǎng)液G2（Vitrolife系列，瑞典）皿后，進(jìn)行激光法人工在透明帶打孔薄化和打孔，囊胚在冷凍前要進(jìn)行激光法人工在透明帶打孔皺縮，復(fù)蘇后不進(jìn)行激光處理。孵化后用含10%人血清蛋白的囊胚培養(yǎng)液G2（Vitrolife系列，瑞典）洗滌數(shù)次，移入囊胚培養(yǎng)液，待培養(yǎng)2～3 h后再移植。移植胚胎后給予黃體支持，移植后14 d查驗(yàn)血HCG，移植后28 d B超檢查見孕囊為臨床妊娠。

1.2.6 改良激光鐳射輔助孵化及胚胎移植和試劑? 卵裂期胚胎、5期以下囊胚在解凍第二步（此時(shí)囊胚未完全擴(kuò)張）立即行改良激光輔助孵化技術(shù)，在相對較大或碎片較多的卵周間隙區(qū)域，采用非接觸式的激光顯微操作系統(tǒng)RI（Saturn Active），調(diào)整其激光靶心定位于該處的透明帶，點(diǎn)擊激光切換成連續(xù)發(fā)射鍵模式，連續(xù)發(fā)射激光削除<1/4透明帶（包含冷凍前激光皺縮時(shí)透明帶開孔處），保證中心部位完全穿破透明帶。整個(gè)輔助孵化過程在30 s內(nèi)完成。孵化后用含10%人血清蛋白的囊胚培養(yǎng)液G2（Vitrolife系列，瑞典）洗滌數(shù)次，移入囊胚培養(yǎng)液，待培養(yǎng)2～3 h后再移植。移植胚胎后給予黃體支持，移植后14 d查驗(yàn)血HCG，移植后28 d B超檢查見孕囊為臨床妊娠。

1.3觀察指標(biāo)及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

胚胎移植14 d后進(jìn)行HCG檢測，移植后28 d行B超監(jiān)測，觀察到孕囊為臨床妊娠。12周前發(fā)生的胚胎停育為早期流產(chǎn)，統(tǒng)計(jì)中觀察到胎心搏動(dòng)孕囊數(shù)目即種植胚胎數(shù)目同移植胚胎數(shù)目的比例為胚胎種植率;臨床妊娠患者數(shù)目同進(jìn)行胚胎移植患者數(shù)目的比例為臨床妊娠率;早期流產(chǎn)數(shù)目同妊娠患者數(shù)目比例為早期流產(chǎn)率。異位妊娠是指孕囊著床位置于子宮體腔外，其中包括宮外妊娠和宮內(nèi)外同時(shí)妊娠。主要觀察這些胚胎復(fù)蘇率、胚胎植入率、臨床妊娠率、異位妊娠率、早期流產(chǎn)率等臨床指標(biāo)。復(fù)蘇（胚胎存活）率=復(fù)蘇胚胎存活數(shù)/復(fù)蘇胚胎總數(shù)×100%。臨床妊娠率=凍融臨床妊娠周期數(shù)/凍融移植周期數(shù)×100%。胚胎植入率（著床率）=孕囊數(shù)/凍融總移植周期數(shù)×100%。早期流產(chǎn)率=孕12周內(nèi)自然流產(chǎn)周期數(shù)/凍融臨床妊娠周期數(shù)×100%。異位妊娠率=異位妊娠周期數(shù)/凍融臨床妊娠周期數(shù)×100%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組臨床結(jié)局比較

通過比較改良LAH組338例和傳統(tǒng)LAH組448例的周期結(jié)果，再對周期結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，兩組年齡、不孕年限、不孕類型、內(nèi)膜厚度、移植胚胎數(shù)、胚胎復(fù)蘇率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），改良LAH組在臨床妊娠率、胚胎植入率上數(shù)值均高于傳統(tǒng)LAH組（57.81%，42.34%），且早期流產(chǎn)率、異位妊娠率要低于傳統(tǒng)LAH組（17.76%，2.70%），兩組胚胎植入率、臨床妊娠率、異位妊娠率、早期流產(chǎn)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2改良LAH組中D3、D5、D6的各項(xiàng)臨床指標(biāo)比較

改良LAH組中D3，D5，D6的年齡、不孕年限、不孕類型、內(nèi)膜厚度、移植胚胎數(shù)、胚胎優(yōu)胚率，胚胎復(fù)蘇率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），改良LAH組中的囊胚（D5、D6）組臨床妊娠率、胚胎植入率與D3胚胎組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;囊胚（D5、D6）組的異位妊娠率、流產(chǎn)率與D3胚胎組的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3討論

AH是在20世紀(jì)90年代得到應(yīng)用。激光輔助孵化具有定位準(zhǔn)確、操作時(shí)間短、胚胎暴露于體外時(shí)間短、可重復(fù)使用、無須昂貴的操作儀器等優(yōu)勢，可有效降低輔助生殖周期成本，與其他孵化方式相比，是一個(gè)相對安全、有效的選擇。理論上將AH應(yīng)用于解凍移植（FET）可以提高FET中凍融胚胎的臨床效果[18]。馮清等[19]首先在卵裂胚胎上采用AH技術(shù)，從而展開AH的臨床實(shí)踐研究。也有學(xué)者經(jīng)研究表明，采用AH技術(shù)顯著提高臨床妊娠率[20]。還有研究表明，凍融復(fù)蘇周期、高齡、高FSH、胚胎透明帶異常是AH的常見適應(yīng)證[21-23]。雖然傳統(tǒng)LAH有以上諸多優(yōu)點(diǎn)但傳統(tǒng)LAH有以下缺點(diǎn)：一傳統(tǒng)LAH開孔過大，卵裂球容易跑出透明帶，開孔過小容易發(fā)生卵裂球嵌頓;二激光光束過大，且激光時(shí)機(jī)不當(dāng)，易損傷卵裂球。這兩點(diǎn)也會(huì)影響著床率、臨床妊娠率、異位妊娠率、早期流產(chǎn)率。改良LAH在透明帶上開孔的大小通常是30～40 μm，而且選擇在解凍第二步（細(xì)胞仍處于皺縮期）開始激光孵化，不直接接觸透明帶內(nèi)的細(xì)胞，可以最大程度上避免對細(xì)胞的熱損傷[24]。

本研究中，兩組數(shù)據(jù)按激光打孔方式和時(shí)機(jī)不同分為傳統(tǒng)激光輔助孵化和改良激光輔助孵化兩組，兩組年齡，不孕年限，不孕類型，內(nèi)膜厚度，移植胚胎，胚胎復(fù)蘇率等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明兩組的一般資料一致。而且研究中的冷凍解凍胚胎都是有兩名熟練掌握人類胚胎冷凍解凍臨床操作技術(shù)的胚胎師隨機(jī)完成的。操作人員對標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程和試劑使用、載桿使用熟練并嚴(yán)格執(zhí)行，盡量消除研究過程中的由操作人員引起的試驗(yàn)誤差。本研究結(jié)果顯示，改良LAH組在臨床妊娠率、胚胎植入率上數(shù)值均高于傳統(tǒng)LAH組（57.81%，42.34%），且早期流產(chǎn)率、異位妊娠率要低于傳統(tǒng)LAH組（17.76%，2.70%），兩組胚胎植入率、臨床妊娠率、異位妊娠率、早期流產(chǎn)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），可能是改良LAH的熱損傷小，不易發(fā)生卵裂球嵌頓，從改良激光輔助孵化技術(shù)看要優(yōu)于傳統(tǒng)激光輔助孵化技術(shù)，從而胚胎植入率高，臨床妊娠率也高，透明帶打孔直接將胚胎暴露于子宮環(huán)境，人為地干擾了胚胎的內(nèi)環(huán)境，內(nèi)膜和胚胎的分子交互可能會(huì)影響胚胎著床，改良LAH組在臨床妊娠率、胚胎植入率上數(shù)值均不同程度高于傳統(tǒng)LAH組，且流產(chǎn)率、異位妊娠率要低于傳統(tǒng)LAH組。

胚胎發(fā)育至囊胚階段后透明帶已經(jīng)比卵裂胚更薄。故兩種激光輔助孵化方式對囊胚都能有效減少冷凍過程中透明帶變硬帶來的阻力。這兩種激光孵化方式的作用效果可能被囊胚的高著床率和高妊娠率的特點(diǎn)掩蓋而無明顯差異。如果后續(xù)再統(tǒng)計(jì)傳統(tǒng)激光輔助孵化的D3，D5，D6分組，可能還會(huì)得知主要差距是在D3這組里。本研究顯示，改良LAH組D3，D5，D6在年齡、不孕年限、不孕類型、內(nèi)膜厚度、移植胚胎數(shù)、胚胎復(fù)蘇率上比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），其中改良LAH組中的D3臨床妊娠率和胚胎植入率均低于D5和D6的，且異位妊娠率和早期流產(chǎn)率都偏高于D5和D6的。

本研究也有局限性：一作為回顧性研究，在患者選擇上有一定隨機(jī)性，二兩組時(shí)間跨度比較大，樣本量相差也比較大，三部分患者還在待孕狀態(tài)，無法統(tǒng)計(jì)總流產(chǎn)率和活產(chǎn)率，在后期追蹤活產(chǎn)率等臨床數(shù)據(jù)，再進(jìn)行兩組中的D3、D5、D6分別比較。

綜上所述，改良LAH組在臨床結(jié)局上要優(yōu)于傳統(tǒng)LAH組，并且在改良LAH組中，D5和D6胚胎的臨床結(jié)局均優(yōu)于D3胚胎的臨床結(jié)局。

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（收稿日期：2021-04-07）