聯(lián)檢速測(cè)卡快速檢測(cè)保健食品中他達(dá)拉非與西地那非

歐愛(ài)芬,羅奕銘,趙肅清

1(廣東工業(yè)大學(xué) 生物醫(yī)藥學(xué)院,廣東 廣州,511400)2(廣州城市職業(yè)學(xué)院,廣東 廣州,510405) 3(廣州瑞森生物科技有限公司,廣東 廣州,511400)

保健食品是指具有特定保健功能或者以補(bǔ)充維生素、礦物質(zhì)為目的的食品,適宜于特定人群食用,具有調(diào)節(jié)機(jī)體功能,不以治療疾病為目的,并且對(duì)人體不產(chǎn)生任何急性、亞急性或者慢性危害的食品[1-3]。目前保健食品可以申報(bào)的功能有27類,其中緩解體力疲勞類保健食品就是通過(guò)保健食品中的功效成分對(duì)人體進(jìn)行修復(fù)和調(diào)整,提升人體的精氣神,緩解體力疲勞[4]。但是不法商家在利益的驅(qū)使下,通過(guò)添加一些化學(xué)藥品到緩解體力疲勞類保健食品中來(lái)增強(qiáng)效果,尤以大量添加治療臨床勃起功能障礙的化學(xué)藥物最為普遍,其中最容易添加的是拉非和那非類[5-7]。而這些西藥必須在醫(yī)生的指導(dǎo)下才能使用,過(guò)量的使用他達(dá)拉非或者西地那非,容易導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)出現(xiàn)異常等現(xiàn)象[8-10]。2020年四平市食品藥品檢驗(yàn)所共篩查壯陽(yáng)類保健品206批,其中185批含有非法添加成分枸櫞酸西地那非,檢出率高達(dá)89.8%。因此對(duì)保健食品中的非法添加物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)是非常有意義的[11]。

目前保健食品中禁限用物質(zhì)的檢測(cè)方法主要是色譜[12-13]、色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)[14-15]和免疫分析技術(shù)[16-17]等。其中色譜技術(shù)包括高效液相色譜、氣相色譜、離子色譜等,色譜質(zhì)譜聯(lián)用包括氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用等,均具有檢測(cè)精密度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)[18-19],但是需要專門的儀器設(shè)備,專人技術(shù)人員操作,并且前處理與檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng),適用于實(shí)驗(yàn)室小批量樣品的檢測(cè)。免疫分析檢測(cè)包括放射性免疫分析技術(shù)、酶免疫分析技術(shù)和金標(biāo)免疫分析技術(shù)等[20]。免疫分析方法均具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確、快速、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)[21-23],其中放射性免疫分析技術(shù)使用的放射性同位素存在輻射和污染,常規(guī)的酶聯(lián)免疫檢測(cè)與金標(biāo)免疫檢測(cè)一次只能檢測(cè)一種違禁藥物,若要對(duì)同一種物質(zhì)的多種違禁藥物同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)需要進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn),操作繁瑣費(fèi)時(shí),因此,亟需建立一種能夠同時(shí)檢測(cè)多種違禁藥物的新型檢測(cè)方法。

本實(shí)驗(yàn)制備金標(biāo)記他達(dá)拉非-西地那非單克隆抗體,建立他達(dá)拉非與西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡,并對(duì)聯(lián)檢速測(cè)卡的靈敏度、準(zhǔn)確性及穩(wěn)定性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 材料與設(shè)備

他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)品、西地那非標(biāo)準(zhǔn)品,德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；他達(dá)拉非(抗原11.3 mg/mL,抗體8.5 mg/mL)、西地那非(抗原14.5 mg/mL,抗體9.8 mg/mL),廣州優(yōu)抗多生物技術(shù)有限公司；羊抗鼠二抗(5 mg/mL),洛陽(yáng)佰奧通實(shí)驗(yàn)材料中心；60份緩解疲勞類保健品樣品,第三方檢測(cè)單位。

牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),北京正將高科公司；氯金酸,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)、三羥甲基氨基甲烷(Tris),北京鼎國(guó)生物；檸檬酸三鈉、磷酸二氫鈉、碳酸鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、甲醇,廣州化學(xué)試劑廠；曲拉通100、聚乙烯吡咯烷酮(PVP40)、三(羥甲基)氨基甲烷、海藻糖、酪蛋白,廣州國(guó)藥中心；硝酸纖維素膜,Sartorius；玻璃纖維,韓感中國(guó)；吸水紙、pvc底板、鋁箔袋,廣州正明生物科技有限公司；表面活性劑S9(Tetronic1307)、表面活性劑S17(RHODASURF ON-870)、表面活性劑S21(BRIJ 35),揚(yáng)州惠爾科技有限公司；吐溫-20、吐溫-100,默克化工技術(shù)(上海)有限公司。

R5DD-2連續(xù)點(diǎn)膜機(jī),韓感；85-2數(shù)顯恒溫磁力攪拌器,常州越新儀器制作有限公司；HM3030三維劃膜噴金儀、WM-100金標(biāo)試紙分切機(jī),上海金標(biāo)生物科技有限公司；TGL-16M高速臺(tái)式冷凍離心機(jī),湖南湘儀實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；紫外分光光度儀,廣州分析測(cè)試中心；JEM 1400透射電鏡,日本電子株式會(huì)社；Nano Series Nano AS90型粒度測(cè)定儀,英國(guó)馬爾文儀器有限公司；Agilent 1200液相色譜-6410 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀,Agilent 公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溶液的配制

PBS緩沖液(pH 7.2～7.4)：稱取7.9 g NaCl,0.2 g KCl,0.24 g KH2PO4和1.8 g K2HPO4,溶于800 mL蒸餾水中,用HCl溶液調(diào)節(jié)溶液pH值至7.4,最后加蒸餾水定容至1 L。保存于4 ℃冰箱中備用。

他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)工作液：精密稱取10.00 mg他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇定容至10 mL,配制質(zhì)量濃度為1 mg/mL的他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；精密移取5 mL儲(chǔ)備液用PBS定容至50 mL,配制100 μg/mL的他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)工作液。

西地那非標(biāo)準(zhǔn)工作液：精密稱取10.00 mg西地那非標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇定容至10 mL,配制質(zhì)量濃度為1 mg/mL的西地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；精密移取5 mL儲(chǔ)備液用PBS溶液定容至50 mL,配制100 μg/mL的西地那非標(biāo)準(zhǔn)工作液。

重懸液：稱取三羥甲基氨基甲烷(Tris)5.85 g,蔗糖2.5 g,海藻糖2.5 g,BSA 1 g溶于150 mL水中,再加入2 mL吐溫-20。

1.2.2 膠體金溶液的制備

金溶膠的光散射性與溶膠顆粒的大小密切相關(guān),一旦顆粒大小發(fā)生變化,光散射也隨之發(fā)生改變,產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的顯著的顏色變化,這就是金溶膠用于免疫沉淀或免疫凝集試驗(yàn)的基礎(chǔ)[24-26]。

利用檸檬酸三鈉還原法制備金納米粒子,還原劑的含量與金納米粒子的粒徑大小密切相關(guān)。在其他條件保持不變的情況下,僅改變加入的檸檬酸三鈉的含量,可制得不同顏色的金溶膠,即不同粒徑的金溶膠。其中在紫紅色向酒紅色過(guò)渡的過(guò)程中,溶液最大吸收波長(zhǎng)528 nm的吸光度峰值最高,為最好的金顆粒選擇條件[25,27]。

檸檬酸三鈉的含量?jī)?yōu)化：取6個(gè)150 mL的圓底燒杯進(jìn)行鉻酸浸泡后用純水進(jìn)行洗滌,隨后分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%氯金酸水溶液100 mL,用加熱型磁力攪拌器加熱至沸騰,在攪拌狀態(tài)中于6個(gè)圓底燒杯中分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%檸檬酸三鈉水溶液0.3、0.45、0.7、1.0、1.5、2.0 mL,金黃色的氯金酸水溶液在5 min內(nèi)變色,保持沸騰15 min后停止加熱,冷卻后用蒸餾水定容到原體積,通過(guò)紫外分光光度儀、透射電鏡觀察選擇最佳顏色、吸收峰及粒徑指標(biāo)。

將最優(yōu)的膠體金溶液裝入棕色密封容量瓶中,避光4～10 ℃保存待用。

1.2.3 金標(biāo)記他達(dá)拉非和西地那非單克隆抗體的制備

取6個(gè)1.5 mL的離心管,各吸取1 mL膠體金溶液于潔凈離心管中,加入一定量0.1 mol/L碳酸鉀溶液調(diào)節(jié)膠體金溶液pH值至6.5,混勻5 min后,在一系列裝有1 mL膠體金溶液的試管中加入他達(dá)拉非/西地那非抗體量分別為0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 μL,振蕩混勻,室溫放置20 min后,觀察離心管顏色,使溶液顏色保持紅色的最低濃度為最適抗體濃度。

在確定的最適金標(biāo)抗體濃度中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)10% BSA封閉15 min；在冷凍離心機(jī)11 000 r/min離心15 min,去除上清液后加入100 μL重懸液(標(biāo)記上的抗體膠體金,10倍濃縮),分別得到金標(biāo)記他達(dá)拉非和西地那非單克隆抗體溶液。

1.2.4 金標(biāo)抗體結(jié)合墊的制備

設(shè)定金標(biāo)噴金儀儀器程序,噴金體積為3 μL/cm2,速度為100 mm/s,將烘干好的樣品墊放置在噴金儀平臺(tái)上,設(shè)定好儀器,分別將標(biāo)記好的金標(biāo)記他達(dá)拉非和西地那非單克隆抗體溶液均勻地噴在金墊上后在烘房(35～40 ℃)放置6 h,待測(cè)。

1.2.5 樣品墊的制備

樣品墊處理液的選擇：制備20份基礎(chǔ)液,取400 mL PBS液體,加入2.75 g海藻糖、1.5 g BSA、1.9 g酪蛋白、1 mL曲拉通100作為基礎(chǔ)液。

配制不同濃度的吐溫-100、吐溫-20、表面活性劑S9、S17、S21作為樣品墊處理液分別加入到基礎(chǔ)液中,充分混勻,取適量的玻璃纖維完全浸泡,浸泡時(shí)間8～10 s,靜置后50 ℃烘箱烘烤10 h至完全烘干,組裝試劑卡后配合金標(biāo)墊使用,對(duì)比不同樣品墊處理液對(duì)膠體金免疫分析顯色效果的影響,篩選合適的樣品墊處理液體系。

1.2.6 劃膜

配制他達(dá)拉非抗原劃膜液：將原質(zhì)量濃度他達(dá)拉非抗原(11.3 mg/mL)用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%海藻糖PBS溶液稀釋至0.5 mg/mL(30 μL)；

配制西地那非抗原劃膜液：將原質(zhì)量濃度西地那非抗原(14.5 mg/mL)用PBS稀釋至0.3 mg/mL(30 μL)；

配制二抗劃膜液：將原質(zhì)量濃度羊抗鼠二抗(5 mg/mL)用1%海藻糖5%甲醇PBS溶液稀釋至1 mg/mL(60 μL)。

將配制好的劃膜液倒吸在劃膜針管上,硝酸纖維素膜粘在PVC底板上,放置于劃膜儀平臺(tái),設(shè)定劃膜儀主機(jī)程序,劃膜寬度為0.8 μL/cm,速度為110 mm/s；將包被好的硝酸纖維素膜放置于溫度35～40 ℃、濕度30%下的烘房或烘箱,烘干24～48 h,干燥后封袋保存?zhèn)溆?使他達(dá)拉非-OVA所劃線標(biāo)記為檢測(cè)線T1,西地那非-OVA所劃線標(biāo)記為檢測(cè)線T2,羊抗鼠二抗所劃線標(biāo)記為質(zhì)控線C。

1.2.7 膠體金免疫層析他達(dá)拉非-西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡組裝

將樣品墊、膠體金墊、已包被好抗原和二抗的硝酸纖維素(nitrocellulose filter,NC)膜、吸水紙依次粘貼到PVC底板上,切割成條,裝卡封口密封,置于干燥器中常溫保存?zhèn)溆谩?/p>

該法將他達(dá)拉非偶聯(lián)OVA,西地那非偶聯(lián)OVA作為包被抗原分別劃在NC膜上,當(dāng)樣品不含有他達(dá)拉非(西地那非)或含量低于其檢測(cè)靈敏度時(shí),金標(biāo)墊上釋放的金標(biāo)記特異性抗體與NC膜上的他達(dá)拉非(西地那非)偶聯(lián)OVA結(jié)合,因而被截留在該處顯紅色線。但當(dāng)樣品中他達(dá)拉非(西地那非)的含量高于其檢測(cè)靈敏度時(shí),金標(biāo)記特異性抗體會(huì)先與他達(dá)拉非(西地那非)結(jié)合,當(dāng)流到他達(dá)拉非(西地那非)偶聯(lián)OVA檢測(cè)線時(shí),則僅有少量或沒(méi)有金標(biāo)記特異性抗體能與相應(yīng)的包被抗原結(jié)合,此時(shí)在他達(dá)拉非(西地那非)上的檢測(cè)線不顯色或者顏色弱于質(zhì)控線。無(wú)論樣品中是否含有他達(dá)拉非(西地那非),金標(biāo)記鼠源特異性單克隆抗體都能與質(zhì)控線上的羊抗鼠二抗結(jié)合形成膠體金滯留而顯紅色。因此,結(jié)果的判定為當(dāng)T線的顏色與C線的顏色一樣或者強(qiáng)于C線時(shí),結(jié)果為陰性；當(dāng)T線的顏色弱于C線,或者無(wú)色時(shí),結(jié)果為陽(yáng)性；當(dāng)C線無(wú)色時(shí),則該試紙條無(wú)效。

1.2.8 樣品制備

1.2.8.1 陰性樣品的制備

采用第三方檢測(cè)公司提供的40份他達(dá)拉非、西地那非陰性保健品樣品。第三方檢測(cè)公司依據(jù)質(zhì)檢總局發(fā)布的2014年第4批119項(xiàng)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的通知“國(guó)質(zhì)檢認(rèn)〔2014〕614號(hào)”,采用標(biāo)準(zhǔn)SN/T 4054—2014《出口保健食品中育亨賓、伐地那非、西地那非、他達(dá)那非的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》,用液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS/MS)法對(duì)40份抗疲勞類保健樣品(均為液體)進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果均為陰性。

1.2.8.2 他達(dá)拉非和西地那非加標(biāo)陽(yáng)性樣品的制備

他達(dá)拉非(西地那非)加標(biāo)陽(yáng)性樣品的制備：分別移取他達(dá)拉非(西地那非)標(biāo)準(zhǔn)工作液0.5、1、2 μL于999.0、998.0、996.0 μL陰性樣品中混勻,配制成質(zhì)量濃度為50、100、200 μg/L的他達(dá)拉非(西地那非)加標(biāo)陽(yáng)性樣品。

1.2.8.3 實(shí)測(cè)陽(yáng)性樣品的準(zhǔn)備

采用第三方檢測(cè)公司提供的10份他達(dá)拉非與10份西地那非陽(yáng)性保健品樣品。第三方檢測(cè)公司依據(jù)質(zhì)檢總局發(fā)布的2014年第4批119項(xiàng)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的通知“國(guó)質(zhì)檢認(rèn)〔2014〕614號(hào)”,采用標(biāo)準(zhǔn)SN/T 4054—2014,用HPLC-MS/MS法對(duì)20份抗疲勞類保健品樣品(均為液體)進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 他達(dá)拉非與西地那非陽(yáng)性樣品結(jié)果 單位：μg/L

1.2.9 靈敏度

分別用PBS溶液將他達(dá)拉非和西地那非標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至0、50、100、200 μg/L的樣品液各10份。分別加100 μL于加樣口,反應(yīng)10 min,觀察試紙條的顯色情況,以T線顯色最淺時(shí)的稀釋度作為試紙條最低檢測(cè)濃度。

1.2.10 假陽(yáng)性率試驗(yàn)

采用他達(dá)拉非-西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡對(duì)40份經(jīng)HPLC-MS/MS檢測(cè)為陰性的樣品進(jìn)行檢測(cè),并分別以含他達(dá)拉非/西地那非為0和100 μg/L的樣品液作為陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照,計(jì)算假陽(yáng)性率。

1.2.11 假陰性率試驗(yàn)

采用他達(dá)拉非-西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡對(duì)40份陽(yáng)性樣品液(10份為200 μg/L他達(dá)拉非加標(biāo)陽(yáng)性樣品,10份為200 μg/L西地那非加標(biāo)陽(yáng)性樣品,10份他達(dá)拉非實(shí)測(cè)陽(yáng)性樣品,10份西地那非實(shí)測(cè)陽(yáng)性樣品)進(jìn)行檢測(cè),并分別以含他達(dá)拉非/西地那非為0和100 μg/L的樣品液作為陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照,計(jì)算假陰性率。

1.2.12 他達(dá)拉非-西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡的重復(fù)性

測(cè)試基質(zhì)為抗疲勞口服液,采用空白樣品及他達(dá)拉非與西地那非添加量分別為200 μg/L的加標(biāo)樣本進(jìn)行驗(yàn)證,取3個(gè)批號(hào)的檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè),每一個(gè)水平10個(gè)平行,計(jì)算檢出概率(probability of detection,POD)值(檢出陽(yáng)性結(jié)果次數(shù)占所有檢測(cè)結(jié)果的比率)。

2 結(jié)果與分析

2.1 膠體金溶液的制備

由表2、圖2可知,當(dāng)1%檸檬酸加入量為1 mL時(shí),制備的金溶膠顏色及粒徑最適用于膠體金免疫層析檢測(cè),如此制備的金溶膠其可見(jiàn)光區(qū)最高吸收峰在525 nm。

2.2 金標(biāo)記他達(dá)拉非-西地那非單克隆抗體的制備

膠體金溶液與不同質(zhì)量濃度他達(dá)拉非-西地那非單克隆抗體結(jié)合,混勻靜置后,通過(guò)顏色判斷,使溶液保持通透紅色,且使用量最低的為最適抗體質(zhì)量濃度,最終確定他達(dá)拉非-西地那非單克隆抗體為8.5和7.84 μg/mL。

表2 氯金酸中檸檬酸三鈉的加入量對(duì)金溶膠粒徑的影響Table 2 Effect of the amount of Trisodium citrate in chloroauric acid on the particle size of gold Sol

圖2 金溶膠結(jié)合效果圖Fig.2 Results of Gold Sol binding effect注:1～6分別表示1%檸檬酸0.3、0.45、0.7、1、1.5、2 mL

2.3 樣品墊處理液的優(yōu)化

處理液中加入表面活性劑可起到增溶的作用,促使分子的有效基團(tuán)暴露并進(jìn)行充分的反應(yīng),從而提升反應(yīng)的靈敏度。由表3可知,基礎(chǔ)液中添加不同的表面活性劑對(duì)樣品測(cè)定時(shí)的顯色效果影響較大,基礎(chǔ)液中添加質(zhì)量濃度為0.5%的吐溫-20效果為最佳。

表3 不同表面活性劑的選擇結(jié)果Table 3 Selection results of different surfactant

2.4 靈敏度

如圖3所示,他達(dá)拉非和西地那非在各梯度濃度下的顯色檢測(cè)呈現(xiàn)梯度變化。當(dāng)他達(dá)拉非和西地那非質(zhì)量濃度在200 μg/L時(shí),2種檢測(cè)物的檢測(cè)線均無(wú)明顯顯色,質(zhì)控線顯色；2種檢測(cè)物含量分別在50、100 μg/L時(shí),檢測(cè)線稍有顯色,質(zhì)控線顯色；當(dāng)樣品中不含他達(dá)拉非和西地那非時(shí),質(zhì)控線和檢測(cè)線都有明顯的顯色。這表明了所制備的膠體金免疫層析試紙條具有良好的敏感性與特異性,可判定該膠體金檢

圖3 梯度質(zhì)量濃度顯色結(jié)果Fig.3 The results of color gradient concentration

測(cè)試紙卡對(duì)他達(dá)拉非和西地那非的檢測(cè)限均為200 μg/L。此外,當(dāng)?shù)我毫繛?00～120 μL,判讀結(jié)果無(wú)明顯差異。但是當(dāng)?shù)我毫砍^(guò)200 μL,膠體金試紙條會(huì)出現(xiàn)死金現(xiàn)象,或者層析墊因浸泡太多液體而出現(xiàn)假陽(yáng)性。因此優(yōu)選滴液量為100～120 μL。通過(guò)圖3可知,檢測(cè)卡的穩(wěn)定性及色度辨析達(dá)到判讀要求,可以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè),對(duì)監(jiān)管檢測(cè)工作提供便捷的檢測(cè)利器。

2.5 假陽(yáng)性率試驗(yàn)

對(duì)40份經(jīng)HPLC-MS/MS法檢測(cè)為陰性的樣品進(jìn)行檢測(cè),以他達(dá)拉非200 μg/L、西地那非200 μg/L為判定限進(jìn)行判斷,40份樣品均為陰性,該40份樣品的假陽(yáng)性率為0,見(jiàn)圖4。

圖4 前10個(gè)樣品顯色結(jié)果Fig.4 Color rendering results of the first 10 samples

2.6 假陰性率試驗(yàn)

他達(dá)拉非-西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡對(duì)20份陽(yáng)性樣品進(jìn)行檢測(cè),以他達(dá)拉非200 μg/L、西地那非200 μg/L為判定限進(jìn)行判斷,20份樣品均為陽(yáng)性,該20份樣品的假陰性率為0,見(jiàn)表4。

表4 樣品陽(yáng)性樣本檢測(cè)結(jié)果Table 4 Test results of positive samples

2.7 他達(dá)拉非-西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡的重復(fù)性測(cè)試

由表5可知,3個(gè)不同批次的他達(dá)拉非-西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡的檢測(cè)結(jié)果均未出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng),表明方法重復(fù)性較好。

表5 重復(fù)性測(cè)試結(jié)果Table 5 Result of repeatability

3 結(jié)論與討論

目前還沒(méi)有關(guān)于同時(shí)檢測(cè)他達(dá)拉非與西地那非的免疫層析分析方法的報(bào)道。本文成功建立快速檢測(cè)保健食品中非法添加抗疲勞藥物他達(dá)拉非與西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡,通過(guò)大量樣本的測(cè)試,梯度濃度顯色結(jié)果表明：他達(dá)拉非-西地那非聯(lián)檢速測(cè)卡的靈敏度分別為西地那非200 μg/L、他達(dá)拉非200 μg/L,質(zhì)量濃度梯度性可以有效確認(rèn)樣本的半定量結(jié)果,整個(gè)檢測(cè)時(shí)間不超過(guò)10 min。通過(guò)大批實(shí)際樣品及加標(biāo)樣品的測(cè)試,假陽(yáng)性率和假陰性率均為0,重復(fù)性好,達(dá)到預(yù)期的測(cè)試效果。同時(shí)通過(guò)測(cè)試,檢測(cè)滴液量為100～120 μL。

該方法采用膠體金免疫層析技術(shù),一個(gè)檢測(cè)卡用于同一個(gè)樣品中2種類似的違禁藥物的檢測(cè),有效降低了制作成本,縮短檢測(cè)時(shí)間,比單檢技術(shù)更快捷方便,適應(yīng)于抽檢現(xiàn)場(chǎng)大批量的樣品初篩。但是本研究沒(méi)有體系化的測(cè)試檢測(cè)卡的保質(zhì)期,沒(méi)法確保產(chǎn)品在長(zhǎng)期保存條件下的穩(wěn)定性,后續(xù)應(yīng)進(jìn)行保質(zhì)期穩(wěn)定性測(cè)試。