Sysmex XN-9000復(fù)檢規(guī)則及3R規(guī)則在綜合醫(yī)院應(yīng)用中的評(píng)估

王小華

（福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 南平 353000）

SysmexXN-9000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析流水線（以下簡稱XN-9000），是在XE系列的基礎(chǔ)上增加了白細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞和有核紅細(xì)胞同時(shí)計(jì)數(shù)的“WNR通道”，幼稚細(xì)胞檢測(cè)的“WPC通道”和血小板熒光計(jì)數(shù)的“PLT-F通道”等。XN-9000較傳統(tǒng)的血細(xì)胞分析儀檢測(cè)質(zhì)量和效率都大幅提高。然而，在臨床實(shí)踐中工作人員對(duì)全自動(dòng)儀器的過分信賴導(dǎo)致血細(xì)胞檢驗(yàn)中形態(tài)學(xué)的觀察被忽視，以至于漏檢、漏診及誤診的現(xiàn)象屢有發(fā)生[1]。參照國際實(shí)驗(yàn)血液學(xué)學(xué)會(huì)推薦的“41條自動(dòng)CBC和DC復(fù)檢規(guī)則”[2]和國內(nèi)XE-2100血液分析儀復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組推薦的“23條復(fù)檢規(guī)則”[3]，并綜合考慮本實(shí)驗(yàn)室的情況和XN-9000儀器的性能，我們建立了本實(shí)驗(yàn)室的復(fù)檢規(guī)則和3R規(guī)則，以提高血液學(xué)檢測(cè)的質(zhì)量和效率。

1 材料與方法

1.1 一般資料 靜脈血液樣本來自2019年1～6月福建省南平市第一醫(yī)院門診和住院的患者，樣本使用EDTA-K2抗凝管采集，所有樣本均在2 h內(nèi)檢測(cè)，分別用XN-9000流水線自動(dòng)進(jìn)樣模式進(jìn)行檢測(cè)和SP-10進(jìn)行推片染色。

1.2 儀器與試劑 Sysmex XN-9000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀,試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品及SP-10全自動(dòng)推片機(jī)均由Sysmex公司提供；瑞氏染液由貝索公司提供；顯微鏡OLYMPUS-BX53。

1.3 方法

1.3.1 人員培訓(xùn) 根據(jù)第四版《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》和《白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考方法》，對(duì)相關(guān)檢驗(yàn)人員進(jìn)行培訓(xùn)[4-5]。儀器的操作、儀器結(jié)果的審核由主管檢驗(yàn)技師完成；顯微鏡鏡檢由2名具有豐富經(jīng)驗(yàn)的主管檢驗(yàn)技師完成，并進(jìn)行雙盲檢驗(yàn)。

1.3.2 檢測(cè)方法 樣本使用Sysmex XN-9000自動(dòng)進(jìn)樣模式進(jìn)行檢測(cè)，需2 h內(nèi)檢測(cè)完成。同時(shí)，SP-10推片機(jī)將需要鏡檢的樣本自動(dòng)制作涂片、固定、染色、洗脫和干燥。其他沒有自動(dòng)推片的樣本由人工制作血涂片，并用瑞氏染液進(jìn)行染色，保證推片和染色的質(zhì)量。鏡檢由經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人員按照培訓(xùn)的方法進(jìn)行。需鏡檢的內(nèi)容有：①估算白細(xì)胞和血小板數(shù)量。②白細(xì)胞形態(tài)分類：采用雙盲檢驗(yàn)對(duì)每張血涂片進(jìn)行分類200個(gè)白細(xì)胞，并觀察其形態(tài)。③觀察血小板和紅細(xì)胞的大小、形態(tài)及染色情況。④觀察有無巨大血小板、有無血小板聚集現(xiàn)象。⑤其他異常情況：有無核紅細(xì)胞、紅細(xì)胞冷凝集及瘧原蟲等寄生蟲。

1.4 涂片鏡檢陽性判讀標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)國際制定的12條鏡檢陽性規(guī)則，國內(nèi)血液學(xué)專家將規(guī)則進(jìn)行進(jìn)一步的完善，統(tǒng)一國內(nèi)的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)[6]。修改后的判讀標(biāo)準(zhǔn)為：①RBC體積大小不均一（細(xì)胞體積大小相差1倍以上）；RBC淡染區(qū)擴(kuò)大（大于1/2淡染區(qū)的紅細(xì)胞多于30.00%）；若血涂片中發(fā)現(xiàn)寄生蟲即可認(rèn)為其紅細(xì)胞形態(tài)有改變。②PLT聚集（原則上是血小板輕微小堆聚集）。③巨大血小板大于15.00%。④Dohle小體的中性粒細(xì)胞大于10.00%。⑤有空泡變性的中性粒細(xì)胞大于10.00%。⑥有中毒顆粒的中性粒細(xì)胞大于10.00%。⑦原始和幼稚細(xì)胞大于1.00%。⑧早幼粒細(xì)胞和中性中幼粒細(xì)胞大于1.00%。⑨中性晚幼粒細(xì)胞大于2.00%。⑩有核紅細(xì)胞大于或等于2.00%；異常淋巴細(xì)胞大于5.00%。?漿細(xì)胞≥1.00%[7]。

1.5 復(fù)檢規(guī)則的驗(yàn)證以及結(jié)果的判讀 以涂片鏡檢為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)1032例全血樣本（包括門診和病房患者樣本）的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，并計(jì)算使用本實(shí)驗(yàn)室制定的復(fù)檢規(guī)則后的血涂片復(fù)檢率。并統(tǒng)計(jì)真陽性率、假陽性率、真陰性率、假陰性率。真陽性的定義為觸犯了復(fù)檢規(guī)則且人工鏡檢結(jié)果也是陽性；真陰性的定義為未觸犯復(fù)檢規(guī)則且人工鏡檢結(jié)果同為陰性；假陰性的定義為未觸犯復(fù)檢規(guī)則但人工鏡檢結(jié)果為陽性；假陽性的定義為觸犯了復(fù)檢規(guī)則但人工鏡檢結(jié)果為陰性。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)檢規(guī)則及3R規(guī)則 本實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢規(guī)則參考2005年國際血液學(xué)組織制定的“41條自動(dòng)CBC和DC的復(fù)檢規(guī)則”，以及2008年XE-2100血細(xì)胞復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)協(xié)作組制定的《XE-2100自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則》，結(jié)合我院患者的情況以及XN-9000儀器的性能，建立本實(shí)驗(yàn)室血液分析復(fù)檢規(guī)則與XN-9000的3R規(guī)則。見表1和表2。

表1 本實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢規(guī)則

表2 XN-9000血常規(guī)檢測(cè)3R規(guī)則

2.2 1032例樣本的血常規(guī)復(fù)檢情況 對(duì)1032例樣本的血常規(guī)復(fù)檢情況進(jìn)行評(píng)估并優(yōu)化。見表3。統(tǒng)計(jì)分析1032例樣本的真陽性率、假陽性率以及真陰性率、假陰性率指標(biāo)，真陽性224例（21.70%），假陽性50例（4.85%），真陰性743例（72.00%），假陰性15例（1.45%），總體符合967例（93.70%）。

表3 1032例血常規(guī)復(fù)檢情況

2.3 500例全血標(biāo)本驗(yàn)證結(jié)果 選擇500例全血標(biāo)本（主要為血液病和腫瘤化療患者）對(duì)建立的復(fù)檢規(guī)則及3R規(guī)則進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果見表4。結(jié)果顯示：準(zhǔn)確率為93.00%；需推片復(fù)檢的標(biāo)本有145例，推片率為29.00%；假陽性標(biāo)本20例（4.00%）；假陰性標(biāo)本15例（3.00%），符合國際規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)（小于5.00%），且無病理細(xì)胞漏檢，假陰性的原因主要是儀器漏報(bào)少量巨大血小板和輕微血小板聚集。見表4。

表4 500例全血標(biāo)本驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

盡管目前全自動(dòng)血液分析儀極大的提高了工作效率，但儀器檢測(cè)仍只是作為一種篩查方法，遇到比較異常情況時(shí)，依然需要用顯微鏡進(jìn)行手工復(fù)檢，而且制定合理的儀器復(fù)檢規(guī)則是提高檢驗(yàn)效率和準(zhǔn)確性的重要工作[8-9]。本實(shí)驗(yàn)室建立的復(fù)檢規(guī)則和3R規(guī)則是基于XN儀器的性能和國際“41條自動(dòng)CBC和DC復(fù)檢規(guī)則”和國內(nèi)“23條復(fù)檢規(guī)則”的基礎(chǔ)上完成的，并遵從如下原則：①復(fù)檢規(guī)則盡可能包含儀器所有檢驗(yàn)參數(shù)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征。②在保證異常病理細(xì)胞不漏檢的前提下盡可能降低復(fù)檢率。③具有診斷意義的檢驗(yàn)參數(shù)不能出現(xiàn)假陰性，其他的假陰性率不得大于5.00%。④在假陰性率低于規(guī)定的前提下降低假陽性率。

本研究通過對(duì)1032例樣本的結(jié)果進(jìn)行分析，初步評(píng)估了本實(shí)驗(yàn)室24條血液分析復(fù)檢規(guī)則和11條XN儀器的3R規(guī)則的準(zhǔn)確性，結(jié)果顯示準(zhǔn)確率為93.70%；需推片復(fù)檢的標(biāo)本196例，推片率為18.99%；假陽性標(biāo)本50例（4.85%），符合國際規(guī)定的小于5.00%。采用主要是血液科和腫瘤科的全血標(biāo)本對(duì)復(fù)檢規(guī)則及3R規(guī)則進(jìn)行驗(yàn)證可行性及可靠性，結(jié)果顯示準(zhǔn)確率為93.00%；需要推片復(fù)檢的標(biāo)本有145例，推片率為29.00%；假陽性標(biāo)本20例（4.00%），儀器報(bào)警存在原始細(xì)胞或幼稚細(xì)胞，而鏡檢發(fā)現(xiàn)原始細(xì)胞或幼稚細(xì)胞比例＜1.00%；假陰性標(biāo)本15例（3.00%），符合國際規(guī)定的小于5%，且無血液病理細(xì)胞漏檢，漏報(bào)的主要是輕微的巨大血小板和少量血小板聚集。本次驗(yàn)證的復(fù)檢率和假陰性率均低于文獻(xiàn)報(bào)道的35%和4.5%[10]，這可能與XN儀器的新通道和新檢測(cè)模式有關(guān)：“WNR通道”增加了有核紅細(xì)胞修正功能，并且能給予定值結(jié)果，這有助于應(yīng)對(duì)來自兒科、血液科及腎內(nèi)科等科室的特殊檢測(cè)要求；低值白細(xì)胞樣本檢測(cè)模式為正常檢測(cè)模式計(jì)數(shù)量的3倍，提高了低值白細(xì)胞的檢測(cè)精密度和異常細(xì)胞檢出率，降低假陰性；PLT-F采用惡嗪為熒光染料，對(duì)核酸進(jìn)行特異性的染色，檢測(cè)低值PLT及排除白細(xì)胞碎片、紅細(xì)胞碎片的干擾能力更強(qiáng)[11-13]。鑒于XN-9000的性能及以上新增的新通道和新檢測(cè)模式，我們制定了適用于XN-9000的3R規(guī)則，包括Repeat（儀器原因的重新檢測(cè)）；Rerun（計(jì)數(shù)原因的重新檢測(cè)）；Reflex（PLT低值或干擾問題的PLT-F通道，WBC低值問題的LW模式）。在復(fù)檢規(guī)則的基礎(chǔ)上，增加3R規(guī)則，可以大大的減少復(fù)檢率，并且提高工作質(zhì)量。

由于醫(yī)院特色臨床學(xué)科及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求的差別[14]，各實(shí)驗(yàn)室需建立符合自身情況的個(gè)性化血液分析復(fù)檢規(guī)則。復(fù)檢規(guī)則不可片面地強(qiáng)調(diào)降低復(fù)檢率，忽視檢驗(yàn)質(zhì)量。盡管從目前的數(shù)據(jù)分析，本實(shí)驗(yàn)復(fù)檢率和假陰性率均低于相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，然而本實(shí)驗(yàn)也存在一些不足之處，本驗(yàn)證的樣本數(shù)偏少，僅500例，在后續(xù)的工作中，還會(huì)不斷增加樣本對(duì)本規(guī)則進(jìn)行驗(yàn)證、補(bǔ)充和完善，以提高血細(xì)胞分析質(zhì)量和技術(shù)水平。