Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義

彭強(qiáng) 余昌俊

據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國胃癌的發(fā)病率位居世界第一，每年死亡人數(shù)高達(dá)30 萬人，嚴(yán)重危害了患者的生命健康［1-2］。尋找診斷胃癌、評估病情的特異性標(biāo)志物意義重大［3］。目前，已有較多相關(guān)研究證實(shí)人類表皮生長因子受體-2（Human epidermal growth factor receptor 2，HER-2）、胃蛋白酶原（Pepsinogen，PG）、軸突導(dǎo)向生長因子4D（Semaphorin 4D，Sema4D）對胃癌的診斷具有一定價值［4］。HER-2 是一種糖基化多肽性分泌因子，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用［5］。PG 是一種消化性蛋白酶，主要有PGI及PGⅡ，其中PGⅡ與胃底黏膜病變有較高相關(guān)性［6］。Sema4D蛋白具有促進(jìn)腫瘤血管發(fā)生的作用［7］，是繼血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）后，又一促血管新生因子。本文就Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行分析，旨在為胃癌的研究提供參考數(shù)據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年10月至2016年1月收治的100 例胃癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合《內(nèi)科學(xué)（第九版）》中胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］；②參與研究前3月均未參與其他治療；③病例資料完整；④無其他消化系統(tǒng)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并白血病等血液疾病者；②三月內(nèi)服用過抗生素者；③合并精神障礙者；④存在其他惡性腫瘤者；⑤合并風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病者。男68 例，女32 例，平均年齡（55.21±6.37）歲。收集患者的胃癌組織及癌旁（距離胃癌組織5 cm 以上）正常組織作為胃癌組和癌旁正常組織組。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過，受試者或其家屬已簽署知情同意書。

1.2 方法

采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清PGⅡ，患者空腹采靜脈血3 mL，抗凝離心后以-20℃保存。實(shí)驗(yàn)時將血漿以37℃溫浴箱孵化，同時取出PGⅡ試劑盒，等溫度達(dá)到28℃時，開始配制標(biāo)準(zhǔn)品液，加樣并密封保存，洗板4～7 次，將反應(yīng)板置于酶標(biāo)儀里分別測定其水平。PGⅡ試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司。

采用免疫組化染色法檢測Her-2蛋白、Sema4D蛋白。兔抗人HER2 單克隆抗體、兔抗人Sema4D 單克隆抗體均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，檢測試劑盒均購自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司，檢測均嚴(yán)格按照檢測說明書進(jìn)行。陽性判定標(biāo)準(zhǔn)［9］：腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)或細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，反之則為陰性。陽性細(xì)胞比例評分：≤5%為0 分，＞5%～25%為1 分，＞25%～50%為2 分，＞50%～75%為3 分，＞75%為4 分；染色強(qiáng)度評分：未染色為0 分，淡黃色為1分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。染色指數(shù)=陽性細(xì)胞比例評分+染色強(qiáng)度評分。染色指數(shù)＞3 分為陽性；染色指數(shù)≤3 分為陰性。陽性率=陽性例數(shù)/總例數(shù)×100%。

所有患者均在出院后通過電話、微信、到院復(fù)診等方式進(jìn)行為期5年的隨訪，隨訪直至隨訪期結(jié)束或患者死亡。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，影響胃癌患者預(yù)后生存的危險(xiǎn)因素以Logistic 回歸分析，以P＜0.05 為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白表達(dá)情況比較

胃癌組Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白陽性表達(dá)率均高于癌旁正常組織組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

圖1 胃癌組織中Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白免疫組化染色圖（SP，×500）Figure 1 Immunohistochemical staining of Her-2 protein,PGⅡand Sema4D protein in gastric cancer tissue（SP，×500）

表1 兩組Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白表達(dá)情況比較［n（%）］Table 1 Expression of HER-2 protein，PG Ⅱand Sema4D between the two groups［n（%）］

2.2 Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

腫瘤直徑（≥5 cm）、分化程度（低分化）、TNM分期（Ⅲ期～Ⅳ期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（有）患者的Her-2、PG Ⅱ及Sema4D蛋白的陽性表達(dá)率更高（P＜0.05）。見表2。

表2 Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白與臨床病理參數(shù)的關(guān)系［n（%）］Table 2 the relationship between HER-2 protein，PG Ⅱand Sema4D protein and clinicopathological parameters［n（%）］

2.3 影響胃癌患者預(yù)后生存的單因素分析

隨訪資料顯示100 例胃癌患者死亡41 例，存活59 例，死亡率為41.00%，存活率59.00%。腫瘤直徑、分化程度、TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為影響患者預(yù)后生存的單因素（P＜0.05），年齡、性別非影響患者預(yù)后生存的單因素（P＞0.05）。見表3。

表3 影響胃癌患者預(yù)后生存的單因素分析［n（%）］Table 3 univariate analysis of prognostic factors in patients with gastric cancer［n（%）］

2.4 影響胃癌患者預(yù)后生存的多因素分析

logistic 分析結(jié)果顯示：腫瘤直徑、分化程度、TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Her-2、PGⅡ、Sema4D蛋白表達(dá)均為影響患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見表4。

表4 影響胃癌患者預(yù)后生存的多因素分析Table 4 multivariate analysis of prognostic factors in patients with gastric cancer

3 討論

胃癌惡性程度高，早期癥狀不明顯且進(jìn)展迅速，術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及死亡的風(fēng)險(xiǎn)較高。因此，尋找和腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的分子標(biāo)志物對胃癌患者的診療及預(yù)后具有重要意義。Saiyin 等人［10］研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者的發(fā)病與Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白表達(dá)水平有關(guān)。HER-2 是一種具有活性的跨膜蛋白，屬于VEGF 家族成員。人體健康狀態(tài)下HER-2 單體保持著非激活狀態(tài)，與需HER-2蛋白的絡(luò)氨酸磷酸化后，參與了基因表達(dá)、DNA 合成代謝，具有介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)磷酸化等生理功能［11］。病理狀態(tài)下，HER-2 通常呈現(xiàn)出高表達(dá)水平，導(dǎo)致細(xì)胞迅速增殖引起腫瘤，其在腫瘤細(xì)胞的生長增殖過程中扮演了重要角色。國外文獻(xiàn)顯示，Her-2蛋白可抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)胃癌腫瘤細(xì)胞存活，在胃癌的發(fā)展中具有重要作用，是預(yù)測胃癌預(yù)后的一個重要參考指標(biāo)［12］。

PGⅡ是一種蛋白酶的前體，合成于胃黏膜組織并進(jìn)行分泌，與胃底黏膜病變有較高相關(guān)性，能夠作為初步判斷胃癌組織的病理情況［13］。Sema4D蛋白屬于Semaphorins 家族，具有促進(jìn)腫瘤血管發(fā)生的作用，多項(xiàng)研究顯示，Sema4D蛋白在血管病變、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮了重要作用，同時也在肺癌組織、乳腺癌組織等癌癥組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)［14］。本研究結(jié)果顯示Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白在胃癌組織中的陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織，與上述文獻(xiàn)研究結(jié)果相一致，進(jìn)一步佐證了Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白呈高表達(dá)水平時可反映機(jī)體癌變的發(fā)生。腫瘤直徑（≥5 cm）、分化程度（低分化）、TNM 分期（Ⅲ期～Ⅳ期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（有）患者的Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白的陽性表達(dá)率更高，與既往對胃癌組織的研究結(jié)果一致［15］，說明Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白的表達(dá)與胃癌病理參數(shù)具有一定關(guān)系。

相關(guān)文獻(xiàn)顯示，Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白與胃癌細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、增殖、凋亡以及信號傳導(dǎo)的關(guān)系緊密，參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展，三者表達(dá)水平影響著胃癌患者后期的預(yù)后及生存率［16］。PGⅡ及Sema4D蛋白表達(dá)水平與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，是判斷胃癌患者疾病程度與預(yù)后的分子標(biāo)志物［17］。本研究Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑、分化程度、TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Her-2、PGⅡ、Sema4D蛋白表達(dá)均為影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這與既往研究一致［18］，進(jìn)一步提示Her-2、PGⅡ及Sema4D蛋白通過參與腫瘤細(xì)胞的分化、浸潤和轉(zhuǎn)移影響胃癌患者臨床結(jié)局。

綜上所述，Her-2蛋白、PGⅡ及Sema4D蛋白在胃癌組織中為高表達(dá)狀態(tài)，三者的表達(dá)水平能夠作為評估胃癌患者預(yù)后生存率的分子標(biāo)志物和腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)。