泌尿系腫瘤患者手術(shù)后聯(lián)合DC-CIK免疫細(xì)胞治療有效性及不良反應(yīng)

肖永平 潘鈺嬌 陶文學(xué) 王帆 任曉雯

作者單位：甘肅省武威腫瘤醫(yī)院生物免疫治療室，甘肅，武威733000

泌尿系腫瘤是發(fā)生于泌尿系統(tǒng)的腫瘤，其內(nèi)部接觸環(huán)境為尿液［1-2］。大量報(bào)道顯示，泌尿系腫瘤發(fā)展快、難以治愈，且近年來(lái)發(fā)病率不斷上升，嚴(yán)重威脅患者的生命安全，臨床治療腫瘤的方法有很多，如手術(shù)、化療、靶向放療、中醫(yī)治療以及免疫治療，提倡手術(shù)切除［3-4］。部分泌尿系腫瘤患者術(shù)后存在轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，泌尿系統(tǒng)腫瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)率在64%左右，但針對(duì)不同分期的患者，術(shù)后復(fù)發(fā)幾率存在一定差異，因此對(duì)于手術(shù)患者而言，術(shù)后根據(jù)腫瘤分期差異，應(yīng)結(jié)合實(shí)際情況對(duì)應(yīng)聯(lián)合其他治療方式，以提高預(yù)后效果，化療雖然治療效果較好，但是毒副反應(yīng)較大，不利于機(jī)體的恢復(fù)。樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic Cells，DC）作為機(jī)體功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞（Antigen presenting cell，APC），誘導(dǎo)形成抗原特異性細(xì)胞T 淋巴細(xì)胞（Antigen specific cell T lymphocyte，CTL），提高機(jī)體免疫力［5-6］。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（Cytokine-induced killer cells，CIK）是患者外周血中單個(gè)核細(xì)胞，通過(guò)多種細(xì)胞因子培養(yǎng)，獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞，有抗腫瘤活性的T 淋巴細(xì)胞功能，同時(shí)兼顧非限制性腫瘤殺傷的功能［7］。因此目前生物細(xì)胞免疫治療（Biological cell immunotherapy，DC-CIK）是泌尿系腫瘤治療的重要輔助方法，本研究對(duì)患者進(jìn)行分組，觀(guān)察輔助治療有效率及不良反應(yīng)，具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年12月至2020年12月于甘肅省武威腫瘤醫(yī)院收治的80 例泌尿系腫瘤患者作為研究對(duì)象，根據(jù)治療差異性分兩組，各40 例，其中對(duì)照組：男25 例，女15 例；平均年齡（56.28±2.14）歲；腫瘤直徑平均（3.01±0.82）cm；腫瘤分期：T122 例，T29 例，T37 例，T42 例。治療組：男24 例，女16 例；平均年齡（57.178±2.14）歲；腫瘤直徑平均（3.11±0.32）cm；腫瘤分期［8］：T120 例，T210 例，T36 例，T44 例。兩組資料均衡可比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合《臨床腫瘤診療指南》［8］中泌尿系腫瘤的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均自愿參加本研究；③均具有手術(shù)耐受性。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神病患者；②體溫＞37℃；③凝血功能異常者；④研究所用藥物過(guò)敏者。研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2 方法

兩組患者均進(jìn)行腹腔鏡根治術(shù)，術(shù)后進(jìn)行常規(guī)抗感染、利尿、穩(wěn)定血壓。

對(duì)照組：術(shù)后第3 周開(kāi)始化療，第1 天、第8 天注射吉西他濱（北京協(xié)和藥廠(chǎng)；國(guó)藥準(zhǔn)字H20103522），初始劑量：1 000 mg/m2的標(biāo)準(zhǔn)，第2 d注射葡萄糖氯化鈉溶液1 000 mL，再注射順鉑（山東鳳凰制藥；國(guó)藥準(zhǔn)字H20056422），劑量：70 mg/m2，一期為一周，持續(xù)治療4 w。

治療組：給予DC-CIK免疫細(xì)胞治療，術(shù)前1 d飲食清淡，取患者患者外周靜脈血50 mL，送至生物細(xì)胞中心GMP 實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行誘導(dǎo)、培養(yǎng)7 d；然后將DC 細(xì)胞與CIK 按一定比例進(jìn)行培養(yǎng)12～14 d，將培養(yǎng)出DC-CIK 細(xì)胞混懸液分為3 份，在常溫條件下，輸入50 mL 滅菌生理鹽水后，通過(guò)7 號(hào)針頭輸血器靜脈回輸至患者，并靜脈沖入2 mg 地塞米松（廠(chǎng)家：安徽城市藥業(yè)；國(guó)藥準(zhǔn)字H34020484），以30～40 滴/min 輸入，連續(xù)3 d。注意回輸細(xì)胞時(shí)若溫度≤2℃時(shí)，須保溫運(yùn)輸?；剌敿?xì)胞時(shí)間＞1 h 或溫度≥37.0℃，須低溫（2～8℃）保存和運(yùn)輸，運(yùn)輸過(guò)程避免劇烈震蕩，持續(xù)治療4 w。

1.3 檢查指標(biāo)［8］

①有效率：治療后對(duì)兩組患者療效進(jìn)行評(píng)定，其中完全緩解（治療后，病灶完全消失時(shí)間≥4 w）、部分緩解（病灶直徑縮小超過(guò)30%時(shí)間≥4 w）、疾病穩(wěn)定（病灶縮小不超過(guò)30%時(shí)間＜4 w）、疾病進(jìn)展（不符合以上標(biāo)準(zhǔn)）；有效率=［（總例數(shù)-疾病進(jìn)展）/總例數(shù)］×100%。②血清腫瘤標(biāo)志物水平：治療前后，取靜脈血5 mL，檢測(cè)糖類(lèi)抗原50（CA50）、癌胚抗原（CEA）、細(xì)胞角質(zhì)蛋白19 片段抗原21-1（CYFRA21-1）。③免疫功能：治療前后，取患者靜脈外周血5 mL，采用流式細(xì)胞儀（美國(guó)貝克曼）檢測(cè)T 淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）的變化。④炎性因子水平：治療前后，取5 mL 空腹靜脈血，離心速率3 000 r/min，時(shí)間20 min，置入冰箱冷凍待測(cè)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）于白介素-2（Interleukin-2，IL-2），白介素-γ（Interferon γ，IFN-γ）及白介素-6（Interleukin-6，IL-6）。⑤記錄兩組不良反應(yīng)例數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理；計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組有效率比較

治療后，治療組有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組有效率比較［n（%）］Table 1 Comparison of effective rates between the two groups［n（%）］

2.2 兩組腫瘤標(biāo)志物比較

治療后，兩組血清腫瘤標(biāo)志物水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組腫瘤標(biāo)志物水平比較（±s）Table 2 Comparison of tumor marker levels between the two groups（±s）

表2 兩組腫瘤標(biāo)志物水平比較（±s）Table 2 Comparison of tumor marker levels between the two groups（±s）

組別治療組對(duì)照組t 值P 值n 40 40 CEA（ng/mL）治療前22.75±4.66 22.54±4.43 0.207 0.837治療后9.85±2.36 9.47±2.45 0.706 0.482 CA50（U/mL）治療前28.05±14.96 27.72±14.85 0.099 0.921治療后11.76±3.65 11.41±3.43 0.442 0.660 CYFRA21-1（ng/mL）治療前5.35±1.66 5.34±1.43 0.029 0.977治療后3.25±1.06 3.17±1.05 0.339 0.735

2.3 兩組免疫功能比較

治療后，治療組免疫功能CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于對(duì)照組，CD8+低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 兩組免疫功能比較（±s）Table 3 Comparison of immune function between the two groups（±s）

表3 兩組免疫功能比較（±s）Table 3 Comparison of immune function between the two groups（±s）

組別治療組對(duì)照組t 值P 值n 40 40 CD3+（%）治療前49.35±6.79 50.42±6.87 0.701 0.486治療后63.23±7.36 56.76±7.45 3.907 0.000 CD4+（%）治療前21.45±4.96 21.72±4.45 0.256 0.798治療后40.76±5.65 34.71±5.43 4.883 0.000 CD8+（%）治療前32.75±6.46 31.54±6.43 0.840 0.404治療后23.45±4.36 26.77±5.45 3.008 0.004 CD4+/CD8+治療前0.65±0.19 0.66±0.20 0.229 0.819治療后1.73±0.16 1.31±0.15 12.112 0.000

2.4 兩組炎性因子比較

治療后，治療組IL-2、IFN-γ、TNF-α 高于對(duì)照組，IL-6 低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 兩組炎性因子比較（±s）Table 4 Comparison of inflammatory factors between the two groups（±s）

表4 兩組炎性因子比較（±s）Table 4 Comparison of inflammatory factors between the two groups（±s）

組別治療組對(duì)照組t 值P 值n 40 40 IL-2（ng/L）治療前9.35±2.99 9.32±2.42 0.049 0.961治療后13.78±2.26 12.06±2.25 3.411 0.001 IL-6（pg/mL）治療前2.35±19.99 2.32±10.42 0.008 0.993治療后1.23±0.26 1.36±0.25 2.279 0.025 IFN-γ（ng/L）治療前8.65±2.46 8.54±2.43 0.201 0.841治療后13.45±3.16 10.77±3.15 3.799 0.000 TNF-α（ng/mL）治療前7.15±2.09 7.12±2.42 0.059 0.953治療后10.23±1.06 8.16±1.05 8.775 0.000

2.5 兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較

治療后，治療組不良反應(yīng)發(fā)生率低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 兩組不良發(fā)應(yīng)發(fā)生率比較［n（%）］Table 5 Comparison of incidence of adverse reactions between the two groups［n（%）］

3 討論

泌尿系腫瘤臨床常采用手術(shù)治療，根據(jù)進(jìn)展期腫瘤的實(shí)際情況，臨床常輔助化療、放療、分子靶向治療等治療手段，雖然可以使患者的存活率增高，但是其副作用明顯，具有較高的復(fù)發(fā)性，進(jìn)一步破壞機(jī)體免疫力［9］。相關(guān)研究表明，大部分腫瘤患者存在自身免疫功能失調(diào)，機(jī)體免疫力大幅度下降，導(dǎo)致無(wú)法有效抵御外來(lái)致病因子，無(wú)法識(shí)別、清除體內(nèi)突變細(xì)胞，導(dǎo)致這些細(xì)胞大量滋生，無(wú)法抑制，造成腫瘤轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散［10-12］。因此對(duì)于術(shù)后殘留的微小病灶需要體內(nèi)免疫功能配合，幫助清除。而腫瘤免疫治療就是通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體抵抗腫瘤免疫活性，打破免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤的耐受性，增強(qiáng)患者體內(nèi)抗腫瘤的免疫活性，糾正腫瘤防御功能，重建免疫系統(tǒng)，清除病灶，有利于避免腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等，從而達(dá)到提高治療效果的作用，本研究為提高治療效果術(shù)后聯(lián)合DC-CIK免疫細(xì)胞治療，結(jié)果提示，聯(lián)合DC-CIK免疫治療效果確切。DC 細(xì)胞能夠提取腫瘤抗原呈遞給CIK 細(xì)胞，完成腫瘤細(xì)胞特異性殺傷，其安全性、持久性、全面性、選擇性較高，完全實(shí)現(xiàn)了個(gè)體化治療的特性，從而改變患者的病情。

本次研究提示，聯(lián)合治療可以改善患者血清因子表達(dá)水平。近年來(lái)，臨床上廣泛應(yīng)用DC-CIK免疫細(xì)胞治療泌尿系腫瘤，DC 是具有相對(duì)特異性表面物質(zhì)的典型樹(shù)突狀形態(tài)細(xì)胞，可以移至淋巴器官，刺激初始型T 細(xì)胞增殖活化，是最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞［13-15］。同時(shí)DC 分泌多種細(xì)胞因子，其中IFN-α 可以誘導(dǎo)CTL，干擾B 淋巴細(xì)胞增殖；同時(shí)可以吞噬凋亡或壞死細(xì)胞；DC 活化后增加TNF 家族細(xì)胞因子的表達(dá)；抑制腫瘤細(xì)胞增殖，增強(qiáng)殺傷腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞功能。CIK 細(xì)胞是腫瘤殺傷細(xì)胞的一種，同時(shí)兼有溶瘤效應(yīng)、非主要組織相容性復(fù)合體（MHC）限制性殺瘤的特點(diǎn)，可通過(guò)自身細(xì)胞毒性及自身分泌性細(xì)胞完成殺傷，DC-CIK 細(xì)胞共培養(yǎng)，促進(jìn)DC 成熟同時(shí)可增強(qiáng)CIK 細(xì)胞的細(xì)胞毒性，抑制多耐藥腫瘤細(xì)胞，其療效“1+1＞2”。同時(shí)IL-6 是肝細(xì)胞刺激因子，刺激活化B 細(xì)胞增殖，分泌抗體，CIK 體外大量增殖后回輸時(shí)無(wú)需IL-2參與，保證體內(nèi)IL-2 含量，促進(jìn)T 細(xì)胞活化，增殖NK 細(xì)胞，有利于減少患者發(fā)熱、寒戰(zhàn)，安全性高，誘導(dǎo)人體自身免疫細(xì)胞活化，可降低機(jī)體排斥反應(yīng)、毒副作用，但對(duì)機(jī)體腫瘤標(biāo)志物水平影響不大，這一點(diǎn)表3 已證實(shí)，提示術(shù)后聯(lián)合免疫細(xì)胞治療對(duì)腫瘤標(biāo)志物水平影響較小。

機(jī)體抗腫瘤免疫中以細(xì)胞免疫為主，在細(xì)胞免疫中起主導(dǎo)地位的是T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫，其中CD3+是成熟T 細(xì)胞，CD4+是輔助性T 細(xì)胞，對(duì)效應(yīng)細(xì)胞抗腫瘤有促進(jìn)作用，CD8+則是抑制性T 細(xì)胞，對(duì)免疫應(yīng)答有抑制作用，CD4+/CD8+正常時(shí)范圍處于1.5-2.0 之間，表示免疫功能穩(wěn)定，可保證機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。本研究結(jié)果提示術(shù)后聯(lián)合DC-CIK免疫細(xì)胞治療，提高了細(xì)胞毒效應(yīng)，啟動(dòng)患者體內(nèi)先天、后天免疫反應(yīng)，調(diào)節(jié)免疫功能，從而增強(qiáng)細(xì)胞殺傷性及特異性，阻止或延緩腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)。由于，患者術(shù)后體質(zhì)較弱，免疫系統(tǒng)受損，對(duì)殘存腫瘤細(xì)胞殺傷能力較弱，容易被不利因素影響，DC-CIK 細(xì)胞特異性殺傷殘留腫瘤細(xì)胞，有效防止復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，提高患者的免疫能力，二者聯(lián)用，療效顯著提升，降低不良反應(yīng)發(fā)生率。本次研究中，治療后組間不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示聯(lián)合DC-CIK免疫細(xì)胞治療可增強(qiáng)用藥安全性。

綜上所述，對(duì)兩組泌尿系腫瘤術(shù)后患者進(jìn)行DC-CIK免疫細(xì)胞治療可顯著提升其有效性，提高機(jī)體免疫力，減少患者機(jī)體不良反應(yīng)。