鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤組織中HPV/補(bǔ)體C3C4表達(dá)及意義

馬汝顯 周玲

作者單位：安徽省宿州市第一人民醫(yī)院耳鼻喉科，安徽，宿州234000

鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤（nasalcavity orparana-Sinonasalinvertedpapilloma，NIP）是一種具有潛在的復(fù)發(fā)和癌變傾向特征的良性腫瘤，其惡化大部分是由于人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus，HPV）HPV？感染所導(dǎo)致，以涕中帶血絲、膿性涕、反復(fù)頭疼為癥狀表現(xiàn)［1］。近些年來(lái)，隨著人們工作以及生活壓力的增大，該病的患病頻率逐漸升高，對(duì)患者的生活質(zhì)量和生命健康影響巨大［2］。目前臨床治療該病的方法為鼻腔乳頭狀瘤摘除術(shù)，其治療效果隨著醫(yī)療水平的上升而提高，但有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［3］，該病具有高復(fù)發(fā)率特點(diǎn)。HPV 是一種感染皮膚、黏膜的嗜皮性DNA 病毒，能夠引起機(jī)體免疫反應(yīng)。而補(bǔ)體C3、C4 是補(bǔ)體系統(tǒng)中最常見(jiàn)的組分，在機(jī)體免疫反應(yīng)中異常激活，從而導(dǎo)致其外周血中的表達(dá)升高。已有研究將補(bǔ)體C3C4 運(yùn)用于紅斑狼瘡的診斷。但目前關(guān)于其在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的診斷應(yīng)用鮮有研究。基于此，本研究探討鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤組織中HPV/補(bǔ)體C3C4表達(dá)及意義。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年3月至2020年9月本院收治的鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者為觀察組（73例），選取同期收治的無(wú)鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者為對(duì)照組（32例）。兩組患者一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。見(jiàn)表1。

表1 一般資料比較（±s）Table 1 Complement of Table 1 General information（±s）

表1 一般資料比較（±s）Table 1 Complement of Table 1 General information（±s）

組別觀察組對(duì)照組t/χ2值P 值n 73 32年齡（歲）57.14±7.23 57.18±7.25 0.026 0.979性別男/女38/35 17/15 0.010 0.919

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照《乳頭狀瘤。實(shí)用耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)》［4］擬定：①單側(cè)病變，持續(xù)性鼻塞；②嗅覺(jué)退化；③面部僵硬；④涕血、頭部疼痛、鼻息肉、濃性涕；⑤經(jīng)影像學(xué)確診。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡20～64 歲；意識(shí)清醒并簽署同意書(shū)；排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重的基礎(chǔ)性疾??；患有精神疾?。煌瑫r(shí)患有其他鼻?。蝗焉锲趮D女；月經(jīng)期女性；依從性較差患者。

1.3 方法

①患者在檢查前不可食用高嘌呤、高蛋白食品，且抽取靜脈血必須要在空腹10 小時(shí)后的次日清晨。②補(bǔ)體C3、C4水平檢測(cè)：使用散射比濁法檢測(cè)。采集患者3 mL 的靜脈血液放入采血管，離心吸取外周血血清，放入冰箱保存待檢驗(yàn)。血清補(bǔ)體C3、C4，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀（山東科博有限公司，型號(hào)：BK-600）及原裝配套試劑檢測(cè)。正常范圍值：補(bǔ)體C3 為（0.85～2.00）g/L；C4 為（0.12～0.40）g/L。③HPV 檢測(cè)：取鼻腔鼻竇組織和局部粘液制作樣本進(jìn)行檢測(cè)，標(biāo)本常規(guī)經(jīng)4%甲醛（規(guī)格：溶液劑20 mL 西安天正藥用輔料有限公司國(guó)字準(zhǔn)號(hào)H53031618）固定石蠟（規(guī)格：500 mL 西安天正藥用輔料有限公司國(guó)字準(zhǔn)號(hào)H49815831）包埋4 μm厚連續(xù)切片。采用免疫組織化學(xué)Envision 二步法染色。用山羊IgG（Normal Goat IgG）代替一抗作陰性對(duì)照，用抗體稀釋液作1∶100 稀釋。用DAB（北京紀(jì)寧生物工程有限公司）顯色后進(jìn)行染色、封片。兩組切片在四百倍光學(xué)顯微鏡下觀察，陽(yáng)性細(xì)胞為淺黃顆粒；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于四分之一（-）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于四分之一（+）。感染率= 有/無(wú)鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者標(biāo)本陽(yáng)性數(shù)/總調(diào)查例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用軟件統(tǒng)計(jì)SPSS 22.0 處理數(shù)據(jù)。符合正態(tài)分布以及方差齊性的計(jì)量資用（）表示，行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。采用ROC 曲線分析C3、C4 對(duì)其預(yù)測(cè)價(jià)值；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組補(bǔ)體C3、C4水平比較

觀察組鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者的補(bǔ)體C3、C4水平較對(duì)照組明無(wú)鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者明顯更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組補(bǔ)體C3、C4水平比較（±s）Table 2 The expression of two groups of complement C3 and C4（±s）

表2 兩組補(bǔ)體C3、C4水平比較（±s）Table 2 The expression of two groups of complement C3 and C4（±s）

組別觀察組對(duì)照組t 值P 值n 73 32--C3（g/L）1.03±0.24 0.85±0.22 3.626＜0.001 C4（g/L）0.28±0.05 0.17±0.06 9.751＜0.001

2.2 兩組HPV 陽(yáng)性率表達(dá)

觀察組HPV 呈陽(yáng)性表達(dá)患者較對(duì)照組明顯更多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 兩組HPV 陽(yáng)性表達(dá)［n（%）］Table 3 Positive expression of HPV levels in the two groups［n（%）］

2.3 補(bǔ)體C3、C4 診斷價(jià)值分析

ROC 分析結(jié)果顯示，補(bǔ)體C3、C4及兩項(xiàng)聯(lián)合指標(biāo)的ROC 曲線下面積AUC 分別為0.701、0.739、0.919（P＜0.05）。由此可得，兩項(xiàng)聯(lián)合指標(biāo)價(jià)值明顯更高，其敏感度分別為91.8%、75.3%、87.7%，特異度分別為50.0%、75.0%、87.5%，cut-off 值分別為0.760、0.235、0.708（P＜0.05）。見(jiàn)表4、表5、圖1。

圖1 補(bǔ)體C3、C4及聯(lián)合指標(biāo)的ROC 曲線Figure 1 ROC curve of C3，C4 and combined indicators

表4 補(bǔ)體C3、C4 診斷價(jià)值分析ROC 曲線下面積AUC 分析Table 4 Complement C3，C4 diagnostic value analysis ROC area under the curve AUC analysis

表5 補(bǔ)體C3、C4 診斷效能分析Table 5 Efficacy analysis of C3 and C4 in diagnosing stroke outcome

3 討論

鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤是一種DNA 病毒，該病的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但有研究表示可能與HPV、炎癥因子有關(guān)［5］；如不及時(shí)治療可能會(huì)發(fā)生惡化對(duì)人的危害嚴(yán)重影響鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者的生命安全［6］，也給家庭造成了巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前，臨床治療該病的方法是鼻腔乳頭狀瘤摘除術(shù)，但其特點(diǎn)為高復(fù)發(fā)率，在手術(shù)的過(guò)程中盡量做到一次切除干凈，如術(shù)中未做到，必然會(huì)增加該病的復(fù)發(fā)率［7］。因此，鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤的早期診斷是提高預(yù)后的關(guān)鍵［8］。

補(bǔ)體是存于人體血清和組織液內(nèi)免疫的一道重要的防線［9］。當(dāng)補(bǔ)體系統(tǒng)被激活后各組分以酶原形式存在于血清中［10］，其具有殺菌、溶菌的免疫活性［11］。而補(bǔ)體C3、C4 是最為常見(jiàn)的補(bǔ)體組分［12］。在發(fā)生炎癥時(shí)，肝臟內(nèi)會(huì)產(chǎn)生較多的補(bǔ)體C3、C4；但巨噬細(xì)胞在肝外也能產(chǎn)生，且補(bǔ)體C3、C4 大于肝內(nèi)產(chǎn)生［13］。在本研究中，鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者的補(bǔ)體C3、C4水平高于無(wú)鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者，其原因可能與補(bǔ)體C3、C4大量激活有關(guān)［14］，當(dāng)炎癥反應(yīng)發(fā)生時(shí)，肝臟與巨噬細(xì)胞同時(shí)產(chǎn)生補(bǔ)體C3、C4 抵抗細(xì)菌侵入，而當(dāng)微生物以及細(xì)菌過(guò)多且無(wú)外界干預(yù)時(shí)，體內(nèi)的補(bǔ)體C3、C4 激活過(guò)度將會(huì)產(chǎn)生降低鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者抵抗細(xì)菌能力、加重炎癥、損傷組織等一系列危害［15］。在本研究中，使用散射比濁法檢驗(yàn)補(bǔ)體水平，結(jié)果顯示觀察組鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者補(bǔ)體C3、C4水平較對(duì)與照組無(wú)鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者明顯更高。補(bǔ)體C3、C4 以及二者聯(lián)合預(yù)測(cè)ROC 曲線下面積AUC 分別為0.701、0.739、0.919；補(bǔ)體C3、C4 的二者聯(lián)合預(yù)測(cè)的敏感度分別為91.8%、75.3%、87.7%；特異度分別為：50.0%、75.0%、87.5%；臨界值分別為0.760、0.235、0.708，均具有良好的敏感度、特異性。提示補(bǔ)體C3、C4 以及二者聯(lián)合均可預(yù)測(cè)檢測(cè)鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤，且其預(yù)測(cè)效能由高到低依次為聯(lián)合檢測(cè)、補(bǔ)體C4、補(bǔ)體C3，這與有關(guān)研究報(bào)道內(nèi)容一致。

HPV 是一種無(wú)囊膜的病毒，可通過(guò)母嬰感染，性交，公共泳池、浴室、馬桶等接觸感染身體表層皮膚、粘膜，其主要分布在口咽、肛周、生殖道［16］。有研究報(bào)道，百分之八十的女性都曾感染過(guò)HPV［17］，該病毒不僅潛伏期較長(zhǎng)，而且感染率極高，當(dāng)人體免疫力正常時(shí)其癥狀不顯，因自身免疫可把大多數(shù)病毒清除；但在免疫力下降時(shí)，開(kāi)始顯現(xiàn)［18］，該病會(huì)引起呼吸道癌、子宮癌、宮頸癌等疾病。目前，治療該病的方式主要以切除術(shù)為主預(yù)防為輔，其具有易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)［19］。但因早期HPV 癥狀不顯，所以檢測(cè)尤為重要。在本研究結(jié)果提示該HPV 陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果表示HPV可能與鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤的發(fā)生有關(guān)。

綜上所述，HPV 可能參與了鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤的發(fā)生；補(bǔ)體C4、補(bǔ)體C3及二者聯(lián)合均可作為鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤的診斷指標(biāo)，值得臨床應(yīng)用。但本研究屬于單中心小樣本研究，還需大樣本多中心研究、考證。同時(shí)隨訪觀察時(shí)間有限，故還有待進(jìn)一步開(kāi)展遠(yuǎn)期觀察的研究檢驗(yàn)。