口腔癌患者血清UCA1、HGF、uPA水平與臨床特征和預(yù)后的關(guān)系

馮建梅 王鐘華 王芹

作者單位：河北北方學院附屬第一醫(yī)院口腔科，河北，張家口075000

口腔癌是發(fā)展中國家常見的十大癌癥之一，近年來其發(fā)病率呈遞增趨勢，且趨于年輕化，45 歲以下患者的比例甚至高達30%［1］。雖通過手術(shù)、放化療等方式讓口腔癌患者的總體療效有所提高，但5年生存率仍只在50%～60%之間［2］。既往研究表明在組織細胞發(fā)生形態(tài)變化之前，分子水平的變化早已發(fā)生異常，出現(xiàn)某些腫瘤標記物表達水平異常變化［3］。肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）是近年來關(guān)注度較高的激活腫瘤細胞增殖相關(guān)的眾多傳導通路的信號途徑之一；尿激酶型纖溶酶原激活劑（Urokinase plasminogen activator，uPA）屬于纖維蛋白溶解系統(tǒng)，對于腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移可能存在促進作用；尿路上皮癌抗原1（urethral epithelium cancer antigen，UCA1）是發(fā)現(xiàn)于膀胱癌中特異性表達的長鏈非編碼RNA 分子。國內(nèi)外已有部分研究表明上述指標在口腔頜面部腫瘤中也存在異常表達情況［4-6］，但目前的研究尚集中于對口腔中組織形態(tài)學的研究，基于此，本研究將分析口腔癌患者血清UCA1、HGF、uPA 表達情況，旨在探討其與患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取河北北方學院附屬第一醫(yī)院2016年4月至2019年4月收治的83 例口腔癌患者作為口腔癌組，其中男54 例，女29 例；平均年齡（61.87±10.34）歲。納入標準：①均符合口腔癌診斷標準［7］，存在耳部和咽喉痛、斑塊、潰瘍、頸部淋巴結(jié)腫大、口腔黏膜可變粗糙/厚或呈硬結(jié)、口腔糜爛等癥狀；CT 檢查可見翼腭窩擴大、脂肪消失等；細胞學與活組織檢查呈陽性。②在標本獲取前未進行放化療或免疫治療；③患者臨床資料完整。排除標準：①既往存在或伴有其他惡性腫瘤；②非原發(fā)于口腔的轉(zhuǎn)移癌、多原發(fā)癌；③治療后失訪者；④因非腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移原因死亡者。另選取同期體檢正常的志愿者79 例作為對照組，其中男52例，女27 例；平均年齡（60.18±11.04）歲。兩組患者性別、年齡比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準通過，受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 一般資料收集

收集患者一般資料，包括年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。根據(jù)血清UCA1、HGF、uPA 表達水平的cut-off 值將口腔癌組患者分別分為高UCA1 表達組和低UCA1 表達組、高HGF 表達組和低HGF 表達組、高uPA 表達組和低uPA 表達組，比較不同血清UCA1、HGF、uPA 表達患者生存時間［8-10］。

1.2.2 血清指標檢測

對照組于體檢當天、口腔癌組患者于入院后次日抽取空腹靜脈血5 mL。室溫下靜置30 min，以3 000 r/min 進行離心分離10 min，取上清液于40℃保存。采用熒光定量PCR 法檢測血清UCA1相對表達量，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清HGF、uPA水平，試劑盒由上海恒遠生化試劑有限公司提供，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.3 隨訪

對口腔癌組患者均進行手術(shù)治療以及術(shù)后放化療。以術(shù)后出院為觀察起點，以總生存時間（overall survival，OS，疾病診斷至末次隨訪或患者死亡）作為觀察終點，通過電話、門診復(fù)診等方法對患者及其家屬進行隨訪，隨訪截止時間為2021年4月，隨訪時間約為24 個月，無失訪人員。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 19.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計量數(shù)據(jù)以（）表示，行t檢驗，以Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，應(yīng)用Log-rank 法進行生存分析，采用Cox 風險回歸模型分析口腔癌患者預(yù)后影響因素，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清UCA1、HGF、uPA 表達水平比較

口腔癌組患者血清UCA1、HGF、uPA 表達水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組血清UCA1、HGF、uPA 表達水平比較（±s）Table 1 Comparison of the expression levels of serum UCA1，HGF and uPA between 2 groups（±s）

表1 兩組血清UCA1、HGF、uPA 表達水平比較（±s）Table 1 Comparison of the expression levels of serum UCA1，HGF and uPA between 2 groups（±s）

分組口腔癌組對照組t 值P 值n 83 79 UCA1 表達量2.46±0.62 0.64±0.25 24.277＜0.001 HGF（ng/L）386.81±49.37 187.69±25.98 31.888＜0.001 uPA（mg/L）5.64±1.47 1.67±0.52 22.688＜0.001

2.2 血清UCA1、HGF、uPA 表達水平與臨床特征的關(guān)系

不同年齡、性別的口腔癌患者血清UCA1、HGF、uPA 表達水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），不同腫瘤大小患者的血清UCA1、HGF水平比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），但低中分化、Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清UCA1、HGF、uPA表達水平明顯高于高分化、Ⅰ～Ⅱ期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，腫瘤大小為T3～T4 型患者血清uPA 表達水平高于T1～T2 型患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 血清UCA1、HGF、uPA 表達水平與臨床特征的關(guān)系（±s）Table 2 Relationship between the expression levels of serum UCA1，HGF and uPA and clinical features（±s）

表2 血清UCA1、HGF、uPA 表達水平與臨床特征的關(guān)系（±s）Table 2 Relationship between the expression levels of serum UCA1，HGF and uPA and clinical features（±s）

臨床特征年齡性別病理分級臨床分期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤大?。?0 歲≥60 歲男女低中分化高分化Ⅰ～Ⅱ期Ⅲ～Ⅳ期有無T1～T2 T3～T4 n 45 38 54 29 60 23 48 35 39 44 55 28 UCA1 表達量2.43±0.56 2.51±0.68 2.43±0.60 2.53±0.66 2.59±0.69 2.12±0.43 2.31±0.58 2.67±0.68 2.71±0.68 2.30±0.56 2.42±0.60 2.55±0.66 t 值0.588 0.699 3.042 2.596 3.011 0.902 P 值0.558 0.487 0.003 0.011 0.004 0.370 HGF（ng/L）384.15±51.55 389.95±46.79 385.32±48.15 389.60±51.63 397.40±50.57 359.19±46.22 376.59±47.72 400.82±51.62 405.16±53.31 370.54±45.87 386.41±46.87 387.61±54.29 t 值0.533 0.376 3.152 2.207 3.180 0.104 P 值0.596 0.708 0.002 0.030 0.002 0.917 uPA（mg/L）5.61±1.41 5.68±1.54 5.62±1.36 5.70±1.68 6.04±1.57 4.62±1.23 5.01±1.42 6.52±1.56 6.29±1.72 5.07±1.26 5.32±1.45 6.28±1.52 t 值0.216 0.235 3.898 4.589 3.714 2.806 P 值0.830 0.815＜0.001＜0.001＜0.001 0.006

2.3 不同血清UCA1、HGF、uPA 表達患者生存分析

隨訪期間無失訪人員，至隨訪結(jié)束，68 例患者生存，15 例患者死亡，均因原發(fā)灶復(fù)發(fā)死亡。UCA1、HGF、uPA 高表達患者生存時間明顯低于低表達患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖1。

圖1 不同血清UCA1、HGF、uPA 表達患者Kaplan-Meier曲線Figure 1 Kaplan-Meier curves of patients with different expression of serum UCA1，HGF and uPA

2.4 口腔癌患者預(yù)后影響因素的Cox 回歸分析

單因素及多因素Cox 回歸分析均證實病灶低中分化、Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及血清UCA1、HGF、uPA 的高表達均為導致口腔癌患者預(yù)后不良的獨立危險因素（P＜0.05），見表3。

表3 口腔癌患者預(yù)后影響因素的Cox 回歸分析Table 3 Cox regression analysis of the prognostic factors in patients with oral cancer

3 討論

腫瘤細胞的浸潤、轉(zhuǎn)移被認為是導致癌癥治療后復(fù)發(fā)、死亡等不良預(yù)后的重要原因。近年來，隨著腫瘤分子生物學的深入研究，參與口腔癌發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移的分子調(diào)控機制被逐漸揭示。HGF 是一種可促進肝細胞DNA 合成與增殖的營養(yǎng)因子，可由腫瘤組織的細胞外基質(zhì)經(jīng)蛋白水解酶降解后釋放。已有研究表明HGF 通過持續(xù)激活信號通路，從而參與腫瘤細胞的多種病理過程［11］。Yasui 等人［12］發(fā)現(xiàn)HGF 在口腔癌癌組織的陽性表達率明顯高于癌旁組織，并認為過表達的HGF與口腔癌的惡性進展有關(guān)。uPA 是一種蛋白水解酶，與HGF 可協(xié)同發(fā)揮作用。UCA1是一種長鏈非編碼RNA，在消化和泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤中存在明顯的表達差異，其異常表達可促進腫瘤細胞的增殖轉(zhuǎn)移，增強腫瘤在人體的轉(zhuǎn)移能力。

本研究發(fā)現(xiàn)，口腔癌組患者血清UCA1、HGF、uPA 表達水平均顯著高于對照組，提示口腔癌患者血清HGF、uPA 和UCA1水平存在明顯的高表達現(xiàn)象。Gao 等［13］也發(fā)現(xiàn)口腔鱗癌患者血清HGF含量明顯高于健康人，且經(jīng)治療后無瘤生存患者相比于殘余瘤患者血清HGF 含量明顯降低。本研究發(fā)現(xiàn)低中分化、Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清UCA1、HGF、uPA 表達水平相對更高，腫瘤大小為T3-T4 型患者血清uPA 表達水平相對更高，表明血清HGF、uPA 和UCA1水平與口腔癌的發(fā)生、發(fā)展均存在一定的聯(lián)系，與董愛芬［14］、劉兵等［15］研究結(jié)果類似。實體腫瘤的生長離不開血管提供的氧和營養(yǎng)物質(zhì)，而一些通過血管轉(zhuǎn)移的腫瘤也需要充足的血管。有學者認為，腫瘤細胞在乏氧條件下大量表達C-MET 蛋白，當C-MET 蛋白與HGF 結(jié)合后，進而顯著增加腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力；而uPA 可調(diào)節(jié)纖溶酶的活性，促使纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，從而促進細胞外基質(zhì)的降解，促進HGF 的合成，進而與HGF 相互作用，共同促進口腔癌的演進［16］。也有研究發(fā)現(xiàn)在口腔癌的血管生長過程中，血管的內(nèi)皮細胞可通過uPA 的表達與內(nèi)皮細胞表面的受體結(jié)合，有利于血管的長入，促進淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移［17］。目前已有研究發(fā)現(xiàn)UCA1 具有促進腫瘤細胞的耐藥性和轉(zhuǎn)化能力，并能夠通過調(diào)節(jié)caspase-3 來抑制腫瘤細胞的凋亡［18］。本研究發(fā)現(xiàn)UCA1、HGF、uPA 高表達患者生存時間明顯低于低表達患者，且病灶低中分化、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及血清UCA1、HGF、uPA 的高表達均為導致口腔癌患者預(yù)后不良的獨立危險因素。但目前國內(nèi)尚無關(guān)于UCA1、HGF、uPA 高表達與口腔癌預(yù)后關(guān)系的相關(guān)研究，仍待于后續(xù)論證結(jié)論。推測其原因可能與血清HGF、uPA 和UCA1的高表達會促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，而癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移是導致患者死亡的主要原因有關(guān)。故對于血清HGF、uPA 和UCA1 高表達的患者，后續(xù)應(yīng)加強監(jiān)測，配合放化療等方法提高其預(yù)后。

綜上所述，口腔癌患者血清HGF、uPA 和UCA1水平的高表達與癌癥的病理分級、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，同時也是導致患者預(yù)后不良的獨立危險因素，有望成為口腔癌疾病嚴重程度判斷以及預(yù)后評估的重要生物標志物。