• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    中藥調(diào)控胞葬作用物質(zhì)基礎(chǔ)及用藥規(guī)律的研究?

    2021-12-10 06:13:02王建茹王新陸彭廣操趙齊飛王永霞朱明軍
    關(guān)鍵詞:度值靶點調(diào)控

    王建茹,李 彬,王新陸,彭廣操,趙齊飛,于 瑞,王永霞,朱明軍

    (河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,鄭州 450000)

    胞葬作用(Efferocytosis)是指胞葬細胞將死亡細胞及時清除的過程[1,2]。人體內(nèi)每天都有數(shù)十億細胞發(fā)生死亡,死亡細胞與胞葬細胞通過不同信號傳導(dǎo),促進其被及時有效的清除,介導(dǎo)各種不同的病理生理結(jié)果[3]。胞葬作用介導(dǎo)多種系統(tǒng)疾病的病理過程,在維持組織穩(wěn)態(tài)、組織修復(fù)等方面發(fā)揮著重要作用,已成為近幾年治療疾病的潛在性干預(yù)靶點和新的研究方向[3,4]。

    中藥及其復(fù)方具有多成分、多靶點、多途徑和多效應(yīng)的特點,在治療疾病方面表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢[5]。研究報道,具有益氣活血祛痰功效的中藥復(fù)方冠心康可改善動脈粥樣硬化病理過程中受損的巨噬細胞胞葬作用,其機制可能與其上調(diào)胞葬作用相關(guān)信號分子的表達有關(guān)。這提示中藥通過干預(yù)胞葬作用治療疾病具有廣闊的應(yīng)用前景[6],但目前這方面的相關(guān)研究較少。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)具有整體性和系統(tǒng)性等特點,分子對接技術(shù)是預(yù)測受體分子與配體化合物結(jié)合模式和親合力的方法,兩者聯(lián)合已被廣泛用于闡釋中藥治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)和潛在作用機制的研究中[7-9]。

    本研究以胞葬作用這一熱門表型為切入點,利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接方法,系統(tǒng)預(yù)測胞葬作用相關(guān)靶點、活性成分和中藥三者之間的復(fù)雜對應(yīng)關(guān)系,同時挖掘中藥性味歸經(jīng)的分布情況,初步探討中藥調(diào)控胞葬作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及一般用藥規(guī)律,以期為后續(xù)治療胞葬作用功能障礙相關(guān)疾病、藥物的研發(fā)以及中醫(yī)藥現(xiàn)代化等方面的研究提供一定的科學(xué)依據(jù)。

    1 對象與方法

    首先從GeneCards數(shù)據(jù)庫中獲取胞葬作用相關(guān)靶點。其次在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(traditional chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)數(shù)據(jù)庫中,以口服生物利用度(oral bioavailability,OB)≥30%、類藥性(drug-likeness,DL)≥18%為條件,篩選出作用于胞葬作用相關(guān)靶點的活性成分,并在TCMSP數(shù)據(jù)庫中匹配出包含這些活性成分的中藥,然后再利用Autodock Vina軟件進行分子對接,以驗證中藥活性成分與胞葬作用相關(guān)靶點之間映射結(jié)果的科學(xué)性和可信性;同時,利用Cytoscape軟件構(gòu)建活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)、表型-靶點-成分-中藥網(wǎng)絡(luò)進行可視化,并采用軟件中的Network Analyzer工具進行網(wǎng)絡(luò)拓撲分析,篩選關(guān)鍵網(wǎng)絡(luò)節(jié)點。最后在中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺V2.0、化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫、中國醫(yī)藥信息查詢平臺中收集已匹配出的中藥性味歸經(jīng)信息,統(tǒng)計分析其出現(xiàn)的頻次和頻率,并對中藥用藥規(guī)律進行分析,具體步驟見圖1。

    圖1 研究思路圖

    1.1 收集胞葬作用相關(guān)作用靶點

    為獲取與胞葬作用相關(guān)的作用靶點,在GeneCards數(shù)據(jù)庫(https://www.genecards.org/)中以“efferocytosis”為檢索詞進行檢索。由于不同數(shù)據(jù)庫基因代號不統(tǒng)一,需通過Uniprot數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/)對所有作用靶點名稱進行標(biāo)準化。

    1.2 篩選中藥的活性成分

    TCMSP是一種獨特的從系統(tǒng)水平研究中藥作用機理的平臺,包含499味草藥以及每味草藥的化合物成分(共計29000余個),針對每個化合物提供了較全面的人體吸收、分布、代謝等藥代動力學(xué)數(shù)據(jù),同時也提供了潛在活性分子靶標(biāo)及其疾病信息,形成了針對每位草藥的藥物-靶標(biāo)-疾病網(wǎng)絡(luò)。將1.1獲得的胞葬作用相關(guān)靶點輸入到TCMSP(http://tcmspw.com/tcmsp.php)中,以O(shè)B≥30%、DL≥18%為條件,篩選中藥的活性成分。

    1.3 構(gòu)建中藥活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖

    將1.1獲得的胞葬作用相關(guān)靶點和1.2獲得的中藥活性成分導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件,構(gòu)建活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖,將兩者的映射關(guān)系進行可視化,然后利用Network Analyzer工具分析網(wǎng)絡(luò)拓撲參數(shù),識別關(guān)鍵網(wǎng)絡(luò)節(jié)點。

    1.4 活性成分-胞葬作用相關(guān)靶點分子對接

    為驗證預(yù)測的胞葬作用潛在作用靶點與中藥活性成分之間相互作用關(guān)系的可信度,將胞葬作用潛在作用靶點與其所對應(yīng)的活性成分進行分子對接。首先,從蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(protein data bank,PDB,http://www.rcsb.org/pdb/)中檢索人源胞葬作用相關(guān)靶點的PDB ID號,用PyMOL軟件去除水分子和配體等,Auto dock Tools軟件加氫然后轉(zhuǎn)換成pdbqt格式。其次,從PubChem數(shù)據(jù)庫 (http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)中下載中藥活性成分的分子結(jié)構(gòu),保存為SDF格式,再用ChemBio3D進行優(yōu)化,保存為mol2格式。最后,利用Autodock Vina軟件進行分子對接,獲取結(jié)合能值,對接結(jié)果采用Discovery Studio Visualizer 4.5和PyMOL軟件進行可視化。結(jié)合能數(shù)值為負則提示活性成分與作用靶點可自由結(jié)合,數(shù)值越小說明對接體系越穩(wěn)定,對接結(jié)果越可靠。本研究設(shè)定自由結(jié)合能小于-5 kcal/mol代表結(jié)合具有顯著性,說明活性成分與靶點之間作用關(guān)系可信度高。

    1.5 構(gòu)建“表型-靶點-成分-中藥網(wǎng)絡(luò)圖”

    在excel表中分別構(gòu)建“中藥-活性成分”“活性成分-靶點”“靶點-表型”文件,并將這些文件輸入到Cytoscape3.7.2軟件中,利用Network Analyzer工具進行網(wǎng)絡(luò)拓撲參數(shù)分析,篩選出關(guān)鍵節(jié)點,并構(gòu)建“表型-靶點-成分-中藥網(wǎng)絡(luò)圖”進行可視化。最后,依據(jù)網(wǎng)絡(luò)中各節(jié)點拓撲學(xué)參數(shù)信息,初步評價中藥及其活性成分調(diào)控胞葬作用的功效強度。

    1.6 中藥獲取及其數(shù)據(jù)整理分析

    為獲取具有調(diào)控胞葬作用的中藥,將1.2中獲取的具有調(diào)控胞葬作用的中藥活性成分輸入到TCMSP數(shù)據(jù)庫中收集匹配的中藥。為分析具有調(diào)控胞葬作用中藥的用藥規(guī)律,將匹配出的中藥再輸入到中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺V2.0(http:∥www.tcmip.cn/)、化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫(http:∥www.organchem.csdb.cn/scdb/default.asp)、中國醫(yī)藥信息查詢平臺(https:∥www.dayi.org.cn/)中收集這些中藥的性味歸經(jīng)信息,并統(tǒng)計分析各個中藥性味歸經(jīng)出現(xiàn)的頻次和頻率。若中藥的性味歸經(jīng)不止1個,則要全部如實記錄。出現(xiàn)頻率=出現(xiàn)頻次/總頻次×100%。

    2 結(jié)果

    2.1 胞葬作用相關(guān)靶點的篩選

    從Gene Cards數(shù)據(jù)庫中共檢索到與胞葬作用相關(guān)的靶點73個,其中41個靶點在TCMSP數(shù)據(jù)庫中沒有收錄,8個靶點雖有收錄但無匹配的化合物,24個靶點檢索到匹配的化合物。以O(shè)B≥30%、DL≥18%為條件,對24個靶點匹配的化合物進行篩選,結(jié)果10個靶點的化合物不符合標(biāo)準,其余14個靶點匹配的化合物符合,這14個靶點即為胞葬作用的潛在靶點,在胞葬作用的過程中充當(dāng)不同角色,并發(fā)揮著不同的功能(見表1)。

    表1 胞葬作用的潛在靶點信息

    2.2 中藥活性成分的獲取

    在TCMSP數(shù)據(jù)庫中,以O(shè)B≥30%、DL≥18%,并能匹配胞葬作用的潛在靶點為條件對中藥的活性成分進行篩選,結(jié)果共獲得24個活性成分(見表2)。將24個活性成分在TCMSP數(shù)據(jù)庫中分別匹配中藥,匯總剔除重復(fù)中藥后共獲得368種藥物。368味中藥所包含活性成分的數(shù)量在1~12個之間,其中含有1個活性成分的中藥最多達102味,其次是含有6個活性成分的中藥共72味;另外,含有12個活性成分的中藥有2味分別為半枝蓮和木蝴蝶,有1味中藥(白果)含有11個活性成分(見圖2)。

    圖2 預(yù)測中藥所包含活性成分分布情況比較

    表2 中藥活性成分信息比較

    2.3 活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

    活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖由38個節(jié)點、78條邊組成,度值范圍為1~12,平均度值為2.053;網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點代表活性成分或靶點,邊表示節(jié)點間的作用或?qū)?yīng)關(guān)系,度值表示與該節(jié)點直接相互作用節(jié)點的數(shù)目,度值越大說明該節(jié)點的樞紐性越強,在整個網(wǎng)絡(luò)中的調(diào)控作用越大,生物學(xué)功能的重要性越強。

    圖3中的藍色圓形節(jié)點代表中藥活性成分,紅色六邊形節(jié)點代表胞葬作用潛在靶點;其中度值排名前8位的活性成分分別關(guān)聯(lián)2個以上的靶點;度值排名前7位的靶點分別映射2個以上的中藥活性成分。結(jié)果提示,這些活性成分和靶點較重要,可對其進一步開展深入研究。

    圖3 活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖

    2.4 分子對接結(jié)果

    結(jié)果表明,提取出的39對“活性成分-作用靶點”關(guān)系對中,胞葬作用潛在靶點與中藥相關(guān)活性成分均存在不同程度的結(jié)合,結(jié)合自由能均小于-5 kcal/mol,說明預(yù)測結(jié)果具有一定的科學(xué)性和可靠性(見表3)。結(jié)合自由能≤ -9.5 kcal/mol的3對關(guān)系對的分子對接結(jié)果示意圖,顯示活性成分與胞葬作用潛在靶點之間具有良好的親和力,兩者大多以氫鍵的形式相互作用(圖4)。

    表3 活性成分與胞葬作用相關(guān)靶點分子對接信息比較

    注:A.Baicalein-ALOX12;B.Triptolide-CD274;C.Quercetin-NFE2L2;A-1、A-2、B-1、B-2、C-1、C-2為對接空間位置的3D立體圖;A-3、B-3、C-3為對接作用的2D平面圖圖4 活性成分與靶蛋白分子對接結(jié)果示意圖(結(jié)合自由能 ≤ -9.5 kcal/mol)

    2.5 “表型-靶點-成分-中藥網(wǎng)絡(luò)圖”的構(gòu)建

    根據(jù)預(yù)測的中藥與其所含有的活性成分以及胞葬作用潛在靶點的對應(yīng)關(guān)系,初步構(gòu)建“表型-靶點-成分-中藥網(wǎng)絡(luò)圖”,該網(wǎng)絡(luò)中共含407個節(jié)點,1594條邊,度值范圍為1~7,平均度值為3.916。度值排名前3的中藥共12味占比3.26%,這些藥物除黃芩、雞血藤外,其余10味中藥所關(guān)聯(lián)的胞葬作用潛在靶點均在9個以上(見圖5、6),結(jié)果表明半枝蓮、木蝴蝶、苦參、白果、葛花、紅花、黃柏、麻黃、牛膝、山豆根這10味中藥在干預(yù)胞葬作用方面具有較大的潛在調(diào)控作用。本研究選取度值≥4的中藥及其所關(guān)聯(lián)的活性成分、胞葬作用潛在靶點重新構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖,以便直觀地展示胞葬作用潛在靶點、活性成分、中藥之間的對應(yīng)關(guān)系(如圖7),紅色菱形節(jié)點代表胞葬作用這一表型,紫色V節(jié)點代表與胞葬作用相關(guān)的潛在靶點,綠色三角形節(jié)點代表預(yù)測的能調(diào)控胞葬作用的活性成分,黃色圓形節(jié)點代表預(yù)測的具有調(diào)控胞葬作用的中藥。

    圖5 預(yù)測中藥度值的分布情況

    圖6 預(yù)測中藥對應(yīng)胞葬作用相關(guān)靶點的分布情況

    圖7 表型-靶點-成分-中藥網(wǎng)絡(luò)圖

    2.6 中藥性味歸經(jīng)的分布情況

    368味中藥性微溫者有3味,微寒者12味,均按性溫、性寒記錄;藥味微酸者2味,微甘者1味,微辛者3味,微苦者10味,均按味甘、味辛、味苦記錄;有9味藥物未收集到歸經(jīng)信息。對中藥的性味歸經(jīng)頻次進行統(tǒng)計,發(fā)現(xiàn)藥味總頻次為587次,藥性總頻次為368次,歸經(jīng)總頻次為835次。具有調(diào)控胞葬作用的中藥在藥味方面以味苦的出現(xiàn)頻次和頻率最高,其次為味辛和味甘;在藥性方面,以性寒的出現(xiàn)頻次和頻率最高,其次為性溫和性平;在歸經(jīng)方面,以肝經(jīng)的出現(xiàn)頻次和頻率最高,其次為肺經(jīng)、胃經(jīng)(見表4圖8)。

    圖8 中藥的歸經(jīng)分布

    表4 中藥的性味分布

    3 討論

    胞葬作用由專職的和非專職的吞噬細胞(即胞葬細胞)完成,其中主要的細胞類型為巨噬細胞,胞葬細胞與死亡細胞通過它們表面的食我信號和尋我信號,以“配體-受體”的直接結(jié)合形式和“配體-調(diào)理素-受體”的間接結(jié)合形式,完成對死亡細胞的識別、捕獲、降解過程,從而抑制促炎因子和毒性分子的釋放,促進抗炎因子的釋放;同時,非食我信號分子可負性調(diào)控以上2種結(jié)合形式[10]。此外,胞葬過程還受一些非胞葬作用相關(guān)信號分子的調(diào)控[11]。本研究預(yù)測的14個胞葬作用潛在靶點中,大多為非胞葬作用相關(guān)信號分子和食我信號分子,這些靶點中白介素-6(interleukin 6,IL-6)、白介素-1β(interleukin 1 beta,IL1B)、尿激酶型纖溶酶原激活物受體(plasminogen activator urokinase receptor,PLAUR)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、白細胞分化抗原14(cluster of differentiation 14,CD14)、核轉(zhuǎn)錄NR-E2相關(guān)因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,NFE2L2)、白細胞分化抗原274(cluster of differentiation 274,CD274)的功能作用較重要,值得進一步深入研究。由于檢索數(shù)據(jù)庫的不完善,一些已經(jīng)被證實的介導(dǎo)胞葬過程的信號分子未被篩選出來,如Mer受體酪氨酸激酶(mer tyrosine kinase,MerTK)、T細胞免疫球蛋白和黏蛋白結(jié)構(gòu)域含4(t cell immunoglobulin and mucin domain containing 4,TIMD4)、乳脂球-表皮生長因子8蛋白(milk fat globule-EGF factor 8 protein,MFGE8)、白細胞分化抗原47(cluster of differentiation 47,CD47)等。

    活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)顯示,具有調(diào)控胞葬作用潛在靶點的24個中藥活性成分大多屬于黃酮類化合物、生物堿和萜類化合物,其中槲皮素(quercetin)、雷公藤甲素(triptolide)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate]、漢黃芩素(wogonin)、非瑟酮(fisetin)、芍藥苷(paeoniflorin)、胡椒堿(piperine)、青藤堿(sinomenine)在調(diào)控胞葬作用方面表現(xiàn)出明顯的潛力,成為調(diào)節(jié)劑的可能性較大。研究顯示,這8個活性成分均具有調(diào)控炎癥反應(yīng)的作用[12-18],除了青藤堿外其余7個活性成分還可調(diào)控巨噬細胞的吞噬作用[18-23],說明這些活性成分的功能作用與胞葬的作用機制相吻合,驗證了本研究的預(yù)測結(jié)果。同時值得注意的是,網(wǎng)絡(luò)中另一個活性成分花生四烯酸(arachidonic acid),其度值雖小,但已被證明是一個具有胞葬作用的抑制劑,它可通過活化Rho誘導(dǎo)細胞形態(tài)變化,從而抑制巨噬細胞的胞葬作用[24]。此外,網(wǎng)絡(luò)中多種活性成分如槲皮素、胡椒堿等在植物類食品中也被發(fā)現(xiàn),提示本研究所預(yù)測的結(jié)果可為胞葬作用功能障礙相關(guān)疾病的食療提供一定的研究思路與依據(jù)。

    分子對接技術(shù)可快速有效地預(yù)測指定蛋白與配體之間的結(jié)合模式和結(jié)合自由能,進而指導(dǎo)研究者對其功能及作用機制進行深入探索研究[25,26]。本研究分子對接的結(jié)果顯示,39對“活性成分-作用靶點”關(guān)系對的結(jié)合自由能均小于-5.0 kcal/mol,這提示中藥活性成分與胞葬作用潛在靶點之間具有良好的結(jié)合力;其中Baicalein-ALOX12、Triptolide-CD274、Quercetin-NFE2L2的結(jié)合自由能均小于-9.5 kcal/mol,這3對關(guān)系對相互之間大多以氫鍵的形式結(jié)合,表現(xiàn)出最強的結(jié)合能力,具有深入開發(fā)研究的價值。研究顯示,黃芩素(Baicalein)為ALOX12的天然選擇性抑制劑[27],雷公藤甲素(triptolide)能負性調(diào)控CD274的表達[28],槲皮素(quercetin)可正性調(diào)控NFE2L2的表達[29]。這些研究進一步驗證了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測的“活性成分-作用靶點”關(guān)系對的可靠性。

    在中藥篩選方面,網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測共有368味中藥與胞葬作用相關(guān)聯(lián),其中半枝蓮、木蝴蝶、苦參、白果、葛花、紅花、黃柏、麻黃、牛膝、山豆根的度值均在5以上,其所關(guān)聯(lián)的胞葬作用潛在靶點均在9個以上,提示這10味中藥在調(diào)控胞葬作用方面表現(xiàn)出較大的潛力,尤以半枝蓮最為重要。頻次頻率分析結(jié)果顯示,與胞葬作用相關(guān)的中藥大都歸肝經(jīng)、肺經(jīng),藥味多為苦、辛,藥性以寒、溫為主,這提示胞葬作用的機制與中醫(yī)肝經(jīng)、肺經(jīng)、味苦、味辛、性寒、性溫的關(guān)系密切相關(guān)。中醫(yī)陰陽五行學(xué)說認為,肺屬金,金曰從革,有沉降、肅殺、收斂等性質(zhì)或作用,為陽中之陰;肝屬木,木曰曲直,有生長、升發(fā)、條達、舒暢等性質(zhì)或作用,為陰中之陽。這一理論認識與頻次頻率分析的與胞葬作用相關(guān)聯(lián)的368味中藥性味歸經(jīng)規(guī)律結(jié)果不謀而合。此外,中醫(yī)學(xué)認為肝藏血主疏泄,肺朝百脈主治節(jié),兩者的相互作用關(guān)系集中體現(xiàn)在調(diào)控全身氣機升降和氣血運行方面,因此胞葬作用功能障礙的中醫(yī)病機可能為氣機不暢、氣血失和,遣方用藥時需注重調(diào)暢氣機、調(diào)和氣血。

    綜上所述,本研究以胞葬作用這一方興未艾的疾病表型為切入點,利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對接、數(shù)據(jù)挖掘方法,較為系統(tǒng)地探討了中藥干預(yù)胞葬作用潛在的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其用藥規(guī)律,發(fā)現(xiàn)與調(diào)控胞葬作用相關(guān)的中藥大多歸肝經(jīng)、肺經(jīng),性味多為寒、溫、苦、辛,中藥活性成分多屬于黃酮類化合物、生物堿和萜類化合物。本研究結(jié)果在一定程度上可為中醫(yī)臨床遣方用藥治療胞葬作用功能障礙相關(guān)疾病以及進一步開展探索性實驗研究提供了借鑒,助力中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究。由于分子對接等信息技術(shù)的不全面以及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)所采用的數(shù)據(jù)庫未能實時更新,可能會導(dǎo)致研究預(yù)測結(jié)果的客觀性、精準性與實際情況出現(xiàn)偏頗;此外,本文尚未兼顧中藥炮制、煎煮等處理對中藥所含化合物之間相互作用的影響。因此,本研究在一定程度上具有一定的局限性,其結(jié)果仍需后續(xù)基礎(chǔ)實驗和臨床試驗研究的進一步觀察與佐證。

    猜你喜歡
    度值靶點調(diào)控
    探討公路項目路基連續(xù)壓實質(zhì)量檢測技術(shù)
    維生素D受體或是糖尿病治療的新靶點
    中老年保健(2021年3期)2021-12-03 02:32:25
    腫瘤免疫治療發(fā)現(xiàn)新潛在靶點
    如何調(diào)控困意
    經(jīng)濟穩(wěn)中有進 調(diào)控托而不舉
    中國外匯(2019年15期)2019-10-14 01:00:34
    無線傳輸中短碼長噴泉碼的度分布優(yōu)化算法*
    微博網(wǎng)絡(luò)較大度值用戶特征分析
    科技傳播(2016年17期)2016-10-10 01:46:58
    順勢而導(dǎo) 靈活調(diào)控
    SUMO修飾在細胞凋亡中的調(diào)控作用
    心力衰竭的分子重構(gòu)機制及其潛在的治療靶點
    久久人人97超碰香蕉20202| 捣出白浆h1v1| 这个男人来自地球电影免费观看 | 一个人免费看片子| 欧美xxⅹ黑人| 一级片'在线观看视频| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲国产精品国产精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美精品一区二区免费开放| 精品少妇久久久久久888优播| 少妇 在线观看| tube8黄色片| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品国产三级专区第一集| 国产男人的电影天堂91| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美黑人精品巨大| 亚洲精品自拍成人| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久久国产欧美日韩av| 夫妻性生交免费视频一级片| 成人国产av品久久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 操美女的视频在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 嫩草影视91久久| 十八禁网站网址无遮挡| 日韩伦理黄色片| 午夜免费鲁丝| 国产精品蜜桃在线观看| 久久久久久久久久久免费av| 又大又黄又爽视频免费| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲精品一区蜜桃| 男女免费视频国产| 欧美另类一区| 一区二区三区激情视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲五月色婷婷综合| 欧美黑人精品巨大| 黄片无遮挡物在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 激情视频va一区二区三区| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲av国产av综合av卡| 国产成人av激情在线播放| 国产乱来视频区| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 伦理电影免费视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 国产男女内射视频| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 男女高潮啪啪啪动态图| 美女视频免费永久观看网站| 成人亚洲精品一区在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| av网站免费在线观看视频| 高清av免费在线| 国产片特级美女逼逼视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 99国产精品免费福利视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 制服人妻中文乱码| 久久久久久免费高清国产稀缺| 尾随美女入室| 成人手机av| 欧美中文综合在线视频| 在线观看www视频免费| 久久亚洲国产成人精品v| 午夜日本视频在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲国产精品999| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 久久久精品94久久精品| 国产一级毛片在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 日韩制服骚丝袜av| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品国产一区二区三区四区第35| 成年美女黄网站色视频大全免费| 777米奇影视久久| 欧美国产精品va在线观看不卡| 搡老岳熟女国产| 亚洲七黄色美女视频| 精品午夜福利在线看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久狼人影院| 91国产中文字幕| 国产99久久九九免费精品| 欧美 日韩 精品 国产| 久久精品人人爽人人爽视色| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久精品久久久久久久性| 亚洲在久久综合| 又大又黄又爽视频免费| av女优亚洲男人天堂| 另类亚洲欧美激情| 久久精品久久久久久噜噜老黄| netflix在线观看网站| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 精品第一国产精品| 精品亚洲成a人片在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 精品午夜福利在线看| 一级a爱视频在线免费观看| 国产精品国产av在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲成人手机| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 日本欧美国产在线视频| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产精品成人在线| av在线播放精品| 乱人伦中国视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| av又黄又爽大尺度在线免费看| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 国产精品偷伦视频观看了| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产成人啪精品午夜网站| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩大码丰满熟妇| 两个人看的免费小视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 十八禁人妻一区二区| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久99一区二区三区| 亚洲欧洲日产国产| 国产深夜福利视频在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 天堂8中文在线网| www.自偷自拍.com| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 日日啪夜夜爽| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久青草综合色| 91成人精品电影| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久免费观看电影| av国产久精品久网站免费入址| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美日韩一级在线毛片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲精品一二三| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 久久国产亚洲av麻豆专区| 丁香六月天网| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲成人手机| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 99久久精品国产亚洲精品| 老司机影院成人| 亚洲国产精品999| bbb黄色大片| 亚洲国产精品一区三区| 97精品久久久久久久久久精品| 青春草视频在线免费观看| 国产精品成人在线| 一级毛片我不卡| 一区福利在线观看| 精品一区二区免费观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 最近最新中文字幕免费大全7| 水蜜桃什么品种好| 最近中文字幕2019免费版| 夫妻午夜视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 一区二区三区精品91| 亚洲国产欧美网| 美女午夜性视频免费| 免费高清在线观看视频在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产在线视频一区二区| 大码成人一级视频| 制服人妻中文乱码| 嫩草影视91久久| 亚洲av欧美aⅴ国产| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产在线一区二区三区精| a级毛片在线看网站| 中文字幕av电影在线播放| 天天影视国产精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| av不卡在线播放| 欧美激情 高清一区二区三区| 69精品国产乱码久久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| 精品国产乱码久久久久久男人| 制服人妻中文乱码| 青春草视频在线免费观看| 观看av在线不卡| av不卡在线播放| 亚洲久久久国产精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 性色av一级| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久热在线av| 一区福利在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久人人爽人人片av| 黑丝袜美女国产一区| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产又爽黄色视频| 极品人妻少妇av视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 黄频高清免费视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲精品一二三| 最近最新中文字幕免费大全7| 激情视频va一区二区三区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产淫语在线视频| 亚洲精品乱久久久久久| 三上悠亚av全集在线观看| 永久免费av网站大全| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久久精品免费免费高清| 成人国产麻豆网| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 91成人精品电影| 国产精品一国产av| 日韩 亚洲 欧美在线| 天天添夜夜摸| 免费观看性生交大片5| 午夜福利乱码中文字幕| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产在线一区二区三区精| 一区二区三区精品91| 超碰成人久久| 欧美最新免费一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩制服骚丝袜av| 18禁观看日本| 亚洲美女黄色视频免费看| www日本在线高清视频| 成年人免费黄色播放视频| 国产男女内射视频| 国产xxxxx性猛交| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 在线看a的网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲免费av在线视频| 国产精品久久久久久久久免| 91国产中文字幕| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久精品国产综合久久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产视频首页在线观看| 久久婷婷青草| 777米奇影视久久| 国产深夜福利视频在线观看| 日韩伦理黄色片| 亚洲三区欧美一区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产片特级美女逼逼视频| 久久国产精品大桥未久av| 黄色怎么调成土黄色| 国产av一区二区精品久久| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 久热爱精品视频在线9| 99国产综合亚洲精品| 色视频在线一区二区三区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品三级大全| 欧美97在线视频| 99热网站在线观看| av线在线观看网站| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产精品久久久久久精品古装| 美女大奶头黄色视频| 国产在视频线精品| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 天美传媒精品一区二区| 免费看不卡的av| 大片电影免费在线观看免费| 午夜影院在线不卡| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 悠悠久久av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲国产精品成人久久小说| 中文字幕人妻丝袜制服| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产在线免费精品| 国产1区2区3区精品| 久久av网站| 精品一区在线观看国产| av视频免费观看在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久精品国产a三级三级三级| 婷婷色综合大香蕉| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 日本午夜av视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产老妇伦熟女老妇高清| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲四区av| 国产熟女欧美一区二区| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美xxⅹ黑人| 精品第一国产精品| 深夜精品福利| 91老司机精品| 尾随美女入室| 午夜免费鲁丝| 黄色视频不卡| 午夜福利视频精品| 夫妻性生交免费视频一级片| 丰满少妇做爰视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲国产最新在线播放| 在线天堂最新版资源| 午夜日韩欧美国产| 久久久国产精品麻豆| 亚洲精品久久午夜乱码| 91精品三级在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 另类亚洲欧美激情| 国产亚洲最大av| 一区二区日韩欧美中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲国产欧美网| 成年人免费黄色播放视频| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲男人天堂网一区| 久久ye,这里只有精品| 午夜免费观看性视频| 午夜激情久久久久久久| 一区福利在线观看| 精品一区在线观看国产| 国产伦理片在线播放av一区| 久久久久久久精品精品| 精品酒店卫生间| 日本av手机在线免费观看| 欧美av亚洲av综合av国产av | 国产在线一区二区三区精| 国产精品一国产av| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲成人国产一区在线观看 | 下体分泌物呈黄色| 亚洲精品视频女| 一级a爱视频在线免费观看| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲欧美一区二区三区国产| 只有这里有精品99| 丰满饥渴人妻一区二区三| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲av综合色区一区| 男人操女人黄网站| 三上悠亚av全集在线观看| 日韩伦理黄色片| 亚洲专区中文字幕在线 | 日韩视频在线欧美| 国产激情久久老熟女| 日韩电影二区| 黑人猛操日本美女一级片| 一区福利在线观看| 在线观看国产h片| 1024香蕉在线观看| 中国国产av一级| 人妻一区二区av| 校园人妻丝袜中文字幕| 美女高潮到喷水免费观看| 美女福利国产在线| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| a级毛片黄视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 99热全是精品| 亚洲天堂av无毛| 欧美 日韩 精品 国产| 免费在线观看黄色视频的| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 精品亚洲成a人片在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 人妻 亚洲 视频| 中文字幕最新亚洲高清| 久久鲁丝午夜福利片| 丁香六月欧美| 人体艺术视频欧美日本| 曰老女人黄片| 亚洲人成电影观看| 三上悠亚av全集在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 999精品在线视频| 又大又黄又爽视频免费| 波多野结衣av一区二区av| 色综合欧美亚洲国产小说| 男女无遮挡免费网站观看| 国产精品三级大全| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| a级片在线免费高清观看视频| 久久综合国产亚洲精品| 久久久国产精品麻豆| 国产在视频线精品| av.在线天堂| 丝袜脚勾引网站| 亚洲精品自拍成人| 欧美日韩亚洲高清精品| 桃花免费在线播放| 人妻 亚洲 视频| 人人澡人人妻人| 在线天堂中文资源库| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲五月色婷婷综合| 国产 一区精品| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 成人国产麻豆网| 丁香六月天网| 欧美少妇被猛烈插入视频| 考比视频在线观看| av在线播放精品| 人体艺术视频欧美日本| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲av中文av极速乱| 蜜桃国产av成人99| 七月丁香在线播放| 亚洲人成网站在线观看播放| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 9191精品国产免费久久| 久久99一区二区三区| 国产日韩欧美视频二区| 在线观看免费午夜福利视频| 91成人精品电影| 欧美中文综合在线视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩欧美精品免费久久| a级毛片在线看网站| 老汉色∧v一级毛片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产日韩欧美亚洲二区| 激情五月婷婷亚洲| av有码第一页| 国产片特级美女逼逼视频| 国产精品偷伦视频观看了| 自线自在国产av| 777米奇影视久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 黄色毛片三级朝国网站| 51午夜福利影视在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 香蕉国产在线看| 十八禁高潮呻吟视频| 午夜久久久在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 丝袜美足系列| 精品福利永久在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产一区二区在线观看av| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产高清国产精品国产三级| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲一区中文字幕在线| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲国产精品国产精品| www.熟女人妻精品国产| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 大香蕉久久成人网| 日日啪夜夜爽| 国产亚洲最大av| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 亚洲精品在线美女| 99热网站在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产免费视频播放在线视频| 精品福利永久在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 午夜激情久久久久久久| 国产探花极品一区二区| 最近手机中文字幕大全| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 免费观看性生交大片5| 黄频高清免费视频| 丝袜脚勾引网站| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 秋霞在线观看毛片| 国产精品国产三级专区第一集| 久久精品久久久久久久性| 国产国语露脸激情在线看| 国产xxxxx性猛交| 色视频在线一区二区三区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 欧美成人午夜精品| 亚洲av男天堂| 亚洲视频免费观看视频| 精品久久久精品久久久| 国产精品偷伦视频观看了| 涩涩av久久男人的天堂| 国产一区二区 视频在线| 国产精品av久久久久免费| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲免费av在线视频| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美乱码精品一区二区三区| 永久免费av网站大全| 18禁动态无遮挡网站| 国产亚洲欧美精品永久| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲欧美清纯卡通| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| videos熟女内射| 久久久久人妻精品一区果冻| 丝袜美腿诱惑在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 好男人视频免费观看在线| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲图色成人| 国产精品一区二区在线不卡| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲国产av影院在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久免费观看电影| 乱人伦中国视频| 国产高清国产精品国产三级| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲av综合色区一区| 国产男人的电影天堂91| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品免费视频内射| 日日撸夜夜添| a级片在线免费高清观看视频| 最近手机中文字幕大全| 一区在线观看完整版| 欧美在线黄色| 午夜福利视频精品| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 丝袜喷水一区| av在线播放精品| 国产精品 国内视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 精品免费久久久久久久清纯 | 成人亚洲精品一区在线观看| 韩国av在线不卡| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 捣出白浆h1v1| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲视频免费观看视频| 日韩免费高清中文字幕av| 哪个播放器可以免费观看大片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 1024视频免费在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产av国产精品国产| 1024视频免费在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 久久97久久精品| 国产黄色免费在线视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 中文字幕av电影在线播放| 又大又爽又粗| 日本欧美视频一区| 精品少妇内射三级| 街头女战士在线观看网站| 亚洲第一av免费看| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产日韩欧美在线精品| 中文字幕av电影在线播放| 这个男人来自地球电影免费观看 | 欧美精品av麻豆av| 免费观看av网站的网址| 999久久久国产精品视频| 在线观看国产h片| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲伊人色综图| 人人澡人人妻人| 人成视频在线观看免费观看| 丝袜在线中文字幕| 伦理电影免费视频| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 最近中文字幕2019免费版|