嚙齒類動(dòng)物局灶性腦缺血模型研究進(jìn)展

沈亞亭 白秀 王明威 張旭龍 謝西梅

腦卒中是一組急性腦循環(huán)障礙所致的局限或全面性腦功能缺損綜合征，常由腦血管阻塞或出血所誘發(fā)。其中，缺血性卒中約占總數(shù)的87%，且又以局灶性腦缺血更為多見(jiàn)[1,2]。因此制備更有效可靠的局灶性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ蛯?duì)研究人類缺血性卒中發(fā)生、發(fā)展的病理生理學(xué)機(jī)制及其防治意義重大。在對(duì)臨床卒中的異質(zhì)性進(jìn)行建模時(shí)，存在多種不同的局灶性腦缺血模型，每種模型都有其優(yōu)勢(shì)和局限性。因鼠類腦血管結(jié)構(gòu)和生理學(xué)特征與人類相似，是實(shí)驗(yàn)中最常選用的動(dòng)物。故本文將目前最常用的嚙齒類動(dòng)物局灶性腦缺血模型及其改良方法加以介紹，并討論各種模型的優(yōu)缺點(diǎn)。

1 線栓法

線栓法是一種近端大血管閉塞的模型，類似于卒中患者的大腦中動(dòng)脈M1段(即從頸內(nèi)動(dòng)脈分叉延伸至側(cè)裂)閉塞[3]。Koizum等[4]最早對(duì)該模型進(jìn)行研究和描述，不久Longa等[5]對(duì)其加以改進(jìn)后更為經(jīng)典。具體制備方法如下：首先將大鼠麻醉后仰臥位固定在手術(shù)臺(tái)上，頸部常規(guī)備皮消毒，然后沿頸部正中做一2～3 cm長(zhǎng)的切口，注意避免刺激氣管和迷走神經(jīng)，分離一側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈，并電凝切斷頸外動(dòng)脈的分支甲狀腺上動(dòng)脈和枕動(dòng)脈。線栓的插入位置，有2種方式：(1)自頸外動(dòng)脈插入線栓：先用動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈近心端，用縫合線扎緊頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，而在近心端打個(gè)松散的活結(jié)，并在兩縫線間剪開(kāi)一個(gè)微小切口，選擇合適的線栓由此進(jìn)入，稍系緊頸外動(dòng)脈近心端的結(jié)，以穩(wěn)定線栓。松開(kāi)頸內(nèi)動(dòng)脈上的動(dòng)脈夾，線栓沿此前進(jìn)，直至有輕微阻力即到大腦中動(dòng)脈起始端為止，此時(shí)再一次將頸外動(dòng)脈近心端的結(jié)系緊，松開(kāi)頸總動(dòng)脈的動(dòng)脈夾。 (2)自頸總動(dòng)脈插入線栓：結(jié)扎頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈近心端，動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，在動(dòng)脈夾近端置一打好松結(jié)的縫線備用，再在縫線近端剪一小口將線栓送入頸總動(dòng)脈過(guò)縫線后，系緊縫線以保證線栓能通過(guò)，又不見(jiàn)動(dòng)脈切口滲血，松開(kāi)動(dòng)脈夾。若制備永久性缺血模型，則直接剪短血管外的線栓，消毒，縫合頸部切口即可；若要研究缺血性再灌注損傷，則需在特定的阻塞時(shí)間后拔栓。經(jīng)頸外動(dòng)脈插入的線栓拔栓時(shí)，先將頸總動(dòng)脈近心端用動(dòng)脈夾夾閉，再解開(kāi)頸外動(dòng)脈近心端的縫線將線栓拔出，之后再將縫線扎緊，松開(kāi)動(dòng)脈夾，消毒縫合皮膚，放回籠中飼養(yǎng)；經(jīng)頸總動(dòng)脈插入的線栓拔栓時(shí)，動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈近心端，不必完全退出線栓，以免動(dòng)脈切口出血，剪去多余線栓，消毒，縫合皮膚，放回籠中飼養(yǎng)，完成造模。

研究表明用來(lái)誘導(dǎo)大腦中動(dòng)脈閉塞的線栓的選擇、處理和再灌注時(shí)間與梗死體積、可重復(fù)性及死亡率都有很好的相關(guān)性[6]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉常選用10%水合氯醛(350 mg/kg或0.35 ml/100 g)腹腔內(nèi)注射，且線栓的長(zhǎng)度和粗細(xì)與實(shí)驗(yàn)大鼠的體重呈正相關(guān)[7]。大多實(shí)驗(yàn)常選用體重為250～300 g的雄性大鼠，這需使用直徑為0.22～0.26 mm的且栓頭涂覆有硅酮、石蠟等的魚(yú)線效果最好，線栓的插入深度一般是(18.5±0.5) mm[8-10]。此外，也有Hamberg等[11]開(kāi)發(fā)出球囊導(dǎo)管法被認(rèn)為是線栓法的改進(jìn)術(shù)式，通過(guò)從股動(dòng)脈放置導(dǎo)絲引導(dǎo)球囊導(dǎo)管經(jīng)過(guò)升主動(dòng)脈、頸總動(dòng)脈，然后從頸內(nèi)動(dòng)脈入顱，經(jīng)由改變球囊的大小以實(shí)現(xiàn)血流的中斷與再通。又有Jungreis等[12]用導(dǎo)絲永久性阻斷大腦中動(dòng)脈并用球囊可逆性阻斷頸內(nèi)動(dòng)脈，形成腦缺血模型。這種技術(shù)，損傷小，重復(fù)性好，能夠精確控制缺血灌注時(shí)間，但是對(duì)技術(shù)手法的要求較高，且要在影像學(xué)的指引下進(jìn)行，不如線栓法使用廣泛。

臨床研究中還發(fā)現(xiàn)，人類缺血性中風(fēng)常常不是血管的完全閉塞，且大多數(shù)患者在中風(fēng)后的48 h內(nèi)會(huì)發(fā)生由于血栓連續(xù)消退而引起的部分自發(fā)性灌注，而在動(dòng)物模型中去除線栓后會(huì)出現(xiàn)迅速的再灌注量激增，這與臨床現(xiàn)象存在偏差[13]。此外，該模型也會(huì)發(fā)生一種在人類中很少見(jiàn)的現(xiàn)象，即大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞120 min或更久后會(huì)導(dǎo)致下丘腦自發(fā)性高熱，這也成為了此模型的主要缺點(diǎn)[14,15]。

2 光栓法

光栓法即通過(guò)向動(dòng)物血液注入光敏染料，然后使用特定光照射動(dòng)物腦組織表面激活光敏誘導(dǎo)劑，發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)后釋放活性氧自由基，導(dǎo)致血管內(nèi)皮過(guò)氧化損傷以及血栓形成，從而造成熒光照射區(qū)域缺血性腦損傷[16]。這一模型最初由Watson等[17]于1985年首次介紹。首先將小鼠麻醉后，俯臥固定于立體定位儀上，剃除頭頂部毛發(fā)并消毒，矢正中線縱向剪開(kāi)頭頂皮膚剝離周?chē)Y(jié)締組織，暴露顱骨以bregma點(diǎn)為基準(zhǔn)原點(diǎn)，于矢狀縫左側(cè)2.0 mm，冠狀縫后2.0 mm處為卒中模型窗口，即大腦中動(dòng)脈遠(yuǎn)端額支和頂支的Y形交界處，在解剖鏡下用高速顱骨鉆打磨暴露的顱骨至50 μm左右厚度，保持硬膜完整，直到皮層血管清晰可見(jiàn)。然后通常在尾靜脈注射孟加拉玫瑰紅染料溶液，隨后用定波冷光源 (560 nm)照射卒中窗口，形成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺血性腦損傷模型。

有學(xué)者對(duì)該模型進(jìn)行了不同的改良，如已經(jīng)開(kāi)發(fā)出使用圓形激光束及調(diào)整照明參數(shù)等方式照射卒中窗口，模仿人類腦缺血后所產(chǎn)生的半影帶[18]；也有以單個(gè)血管為靶點(diǎn)進(jìn)行造模，并盡量減少對(duì)靶血管周?chē)M織的不必要的光激活損傷，從而極大限度地提高了動(dòng)物模型與人類中風(fēng)的相關(guān)性[19]；另有研究者利用立體定向植入光學(xué)纖維束以誘導(dǎo)大鼠紋狀體或內(nèi)囊的梗死[20,21]；此外，Lu等[22,23]在自由活動(dòng)的大鼠和小鼠中成功誘發(fā)了光血栓性中風(fēng)，由此可以在沒(méi)有麻醉干擾的情況下，實(shí)時(shí)分析急性中風(fēng)的相關(guān)參數(shù)，以及研究運(yùn)動(dòng)皮層缺血和運(yùn)動(dòng)缺陷之間的聯(lián)系；Sunil等[24]則充分結(jié)合了之前技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，創(chuàng)建了在清醒小鼠中誘導(dǎo)靶向單個(gè)血管的光血栓模型，并通過(guò)激光散斑對(duì)比成像(LSCI)和行為評(píng)估，證實(shí)了該方法能夠形成可靠的功能缺陷性卒中，可以用于研究卒中后的恢復(fù)機(jī)制或測(cè)試潛在療法對(duì)恢復(fù)過(guò)程的影響。

光栓法模型是一種高度可重復(fù)的缺血模型，易于操作，侵入性小，穩(wěn)定性好，它可產(chǎn)生精確的梗死位置和大小，且具有死亡率低的優(yōu)點(diǎn)。其梗死灶大小與光敏誘導(dǎo)劑種類、劑量及特定光源的強(qiáng)度、時(shí)長(zhǎng)相關(guān)。目前廣泛應(yīng)用于缺血后神經(jīng)行為評(píng)估，并且可能對(duì)研究自由基清除機(jī)制的干預(yù)特別有用。該模型誘導(dǎo)的中風(fēng)，細(xì)胞毒性和血管源性的水腫幾乎同時(shí)出現(xiàn)，這可能與缺血性損傷和內(nèi)皮損傷的同時(shí)發(fā)生有關(guān)，而人類卒中的主要特征是細(xì)胞毒性水腫，且半影帶是人卒中后保護(hù)和治療的主要目標(biāo)，這便又引出了該模型的另一不足，即缺乏側(cè)支血流和幾乎沒(méi)有半影帶。

3 開(kāi)顱手術(shù)模型

Robinson等[25]首次制備并描述了該模型，而后Tamura等[26]對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行開(kāi)顱手術(shù)后，通過(guò)電凝閉塞大腦中動(dòng)脈近端導(dǎo)致皮質(zhì)和紋狀體梗死的模型也較為常用。具體操作：將大鼠麻醉后側(cè)臥于手術(shù)臺(tái)上，剪去一側(cè)外耳道至眼外眥之間的毛發(fā)并消毒，在這兩點(diǎn)連線的中點(diǎn)作一長(zhǎng)約2 cm的切口。用止血鉗將切口充分暴露，分離肌肉，切斷顳肌，暴露顱骨，并將顴弓離斷除去，暴露卵圓窗，用骨鉆在卵圓窗前3 mm下1 mm處鉆孔，在顯微鏡下可透過(guò)硬腦膜看見(jiàn)大腦中動(dòng)脈，垂直于嗅束上行。挑破硬腦膜，分離大腦中動(dòng)脈周?chē)闹刖W(wǎng)膜，暴露大腦中動(dòng)脈。然后將大腦中動(dòng)脈挑起后用電凝器凝閉，電凝位置在其分支豆紋動(dòng)脈之前或靠近頸內(nèi)動(dòng)脈處，從而制成腦缺血模型。

除電凝阻斷外，有學(xué)者還通過(guò)直接離斷和結(jié)扎制成永久性缺血模型，或者是通過(guò)微動(dòng)脈夾子、微小金屬鉤等將大腦中動(dòng)脈從腦表面抬起直至血流中斷，制成暫時(shí)性缺血模型[27]。此外，也有研究者通過(guò)相對(duì)簡(jiǎn)單的開(kāi)顱結(jié)扎術(shù)閉塞位于淺表大腦皮層的大腦中動(dòng)脈遠(yuǎn)端主干制備模型[28]。張穎等[29]對(duì)此模型進(jìn)一步改進(jìn)，即先通過(guò)顱骨鉆孔電凝大腦中動(dòng)脈，再中斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈血流15 min以建立模型，這會(huì)減少側(cè)支血流，從而鞏固缺血性損傷，可實(shí)現(xiàn)皮質(zhì)區(qū)清晰梗死灶。

該模型的主要特點(diǎn)是能夠在可視化下操作，可直接控制血管閉塞的部位和程度，如果在大腦中動(dòng)脈近端進(jìn)行閉塞，將導(dǎo)致影響皮質(zhì)和紋狀體的聯(lián)合梗死，而遠(yuǎn)端大腦中動(dòng)脈的閉塞，結(jié)合兩個(gè)頸總動(dòng)脈的短暫閉塞，只會(huì)導(dǎo)致皮質(zhì)損傷[30]。此模型具有成功率高，可重復(fù)性好，梗死面積變異性較小，且梗死灶周?chē)星逦陌胗皫У膬?yōu)點(diǎn)。因此，被廣泛用于評(píng)估急性缺血后的神經(jīng)修復(fù)及促進(jìn)神經(jīng)可塑性等方面的研究。

4 栓塞中風(fēng)模型

栓塞性中風(fēng)模型可分為微球或大球所誘發(fā)的栓塞和血栓栓塞性模型兩大類。所有種類的栓塞模型都是Kudo等[31]描述的大鼠血栓栓塞后腦卒中模型的變體。其中微球/大球誘發(fā)的栓塞中風(fēng)模型，通常使用的球體材質(zhì)有硅樹(shù)脂，膠原蛋白，二氧化鈦和葡聚糖等，微球直徑一般是20～50 μm，其誘導(dǎo)過(guò)程包括使用微導(dǎo)管經(jīng)頸外動(dòng)脈將微球注入頸內(nèi)動(dòng)脈或大腦中動(dòng)脈，并隨血液流動(dòng)進(jìn)入腦循環(huán)，進(jìn)而引起多個(gè)血管的微栓塞，最終導(dǎo)致多灶性和異質(zhì)性梗塞。大球模型常選用直徑300～400 μm的球體，與微球操作基本相似。

血栓栓塞性中風(fēng)模型最常見(jiàn)的是經(jīng)由頸外動(dòng)脈向頸內(nèi)動(dòng)脈和大腦中動(dòng)脈注射基于自體血液自發(fā)形成的或由凝血酶，纖維蛋白原誘導(dǎo)的具有特定直徑和長(zhǎng)度的血塊。具體操作如下：大鼠麻醉后仰臥于手術(shù)臺(tái)上，經(jīng)頸部正中切口暴露分離一側(cè)頸總動(dòng)脈，頸外動(dòng)脈及其甲狀腺上動(dòng)脈、枕動(dòng)脈分支，頸內(nèi)動(dòng)脈及其分支翼腭動(dòng)脈。永久性電凝甲狀腺上動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)端、枕動(dòng)脈，臨時(shí)夾閉其他動(dòng)脈。將PE導(dǎo)管置入頸外動(dòng)脈腔內(nèi)，頸內(nèi)動(dòng)脈上的夾子松開(kāi)后，血栓以短暫的爆發(fā)力快速注入血管內(nèi)。然后拔出導(dǎo)管，松開(kāi)頸總動(dòng)脈和翼腭動(dòng)脈上的夾子，縫合皮膚切口。此外，還有通過(guò)顯微注射凝血酶來(lái)制備小鼠原位血栓栓塞性中風(fēng)模型，即通過(guò)開(kāi)顱手術(shù)，暴露大腦中動(dòng)脈遠(yuǎn)端分支，并用微管將純化的凝血酶注射到血管腔內(nèi)，注射部位立即形成血纖維蛋白凝塊，從而導(dǎo)致該區(qū)域灌注迅速減少，形成梗死體積穩(wěn)定、可重復(fù)性高，且死亡率低的卒中模型[32]。也有學(xué)者是將氯化鐵(FeCl3)誘導(dǎo)劑浸泡過(guò)的濾紙條直接貼附于覆蓋大腦中動(dòng)脈主干的硬腦膜上或?qū)⑵渲苯淤N附于頸總動(dòng)脈然后在機(jī)械刺激下促進(jìn)氯化鐵觸發(fā)的血栓栓塞到大腦中動(dòng)脈[33,34]。

有研究表明，在人類缺血性中風(fēng)中，約50%的病例是由于大血管動(dòng)脈粥樣硬化和動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂所致[35]，且血栓栓塞性中風(fēng)動(dòng)物模型病理學(xué)進(jìn)程與人類相似，包括細(xì)胞毒性水腫，隨后的血管源性水腫，血腦屏障的破壞，半暗帶的出現(xiàn)及炎性反應(yīng)等，因此血栓栓塞模型與臨床情況更具相似性[36]。其中血塊的大小、成分、位置對(duì)于精確地在大腦中動(dòng)脈附近形成栓塞至關(guān)重要，只有當(dāng)血塊滯留在靠近大腦中動(dòng)脈分叉處的顱內(nèi)頸內(nèi)動(dòng)脈段和大腦中動(dòng)脈段時(shí)，才能在大腦中動(dòng)脈區(qū)域?qū)崿F(xiàn)可復(fù)制的缺血性損害。此外，實(shí)驗(yàn)制備的血塊成分主要由纖維蛋白組成與人類有很大不同，且梗死的位置和梗死體積變異性較大，故根據(jù)其特性該模型常用于評(píng)估溶栓治療(rt-PA)的效果或測(cè)試新的溶栓劑。而由FeCl3化學(xué)誘導(dǎo)所制模型，則特別適用于使用激光散斑流量計(jì)或雙光子顯微鏡對(duì)大腦皮質(zhì)進(jìn)行活體實(shí)時(shí)研究。

5 內(nèi)皮素-1模型

該模型是基于內(nèi)皮素-1的應(yīng)用，它是持久有效的血管收縮肽，根據(jù)其注射的濃度不同，可以改變?nèi)毖膰?yán)重程度和持續(xù)時(shí)間以及所引起梗塞面積的不同。通常內(nèi)皮素-1給藥后，腦血流量迅速降低70%～90%，隨著注射時(shí)間的延長(zhǎng)，內(nèi)皮素-1的濃度隨之降低，血流便會(huì)逐漸恢復(fù)，因此該模型常用來(lái)模擬短暫性腦缺血的情況[37]。其操作是將內(nèi)皮素-1直接應(yīng)用于暴露的大腦中動(dòng)脈、腦表面或立體定向注射到腦實(shí)質(zhì)通過(guò)其收縮血管的特性來(lái)誘發(fā)梗塞。腦內(nèi)注射內(nèi)皮素-1會(huì)造成外側(cè)紋狀體和皮質(zhì)聯(lián)合梗死，而硬膜下靶血管給藥可導(dǎo)致僅局部皮質(zhì)缺血性損傷。此外，也有學(xué)者是將引導(dǎo)套管預(yù)先植入所要梗塞的部位，從而可將內(nèi)皮素直接注入到有意識(shí)的動(dòng)物體內(nèi)，這便能夠消除麻醉所產(chǎn)生的不良影響，并在ET-1誘導(dǎo)卒中的同時(shí)動(dòng)態(tài)觀察其引起的組織學(xué)損傷和神經(jīng)功能缺損的程度，適用于評(píng)價(jià)神經(jīng)保護(hù)藥物的療效[38,39]。

內(nèi)皮素-1模型較以往手術(shù)方法機(jī)械損傷輕微，死亡率較低，且可在淺表或深部腦區(qū)直接誘發(fā)缺血；而缺點(diǎn)則是應(yīng)用此法誘導(dǎo)的缺血發(fā)展緩慢，僅伴有輕微的水腫，且組織再灌注會(huì)根據(jù)離給藥部位的遠(yuǎn)近而產(chǎn)生不可控的變化，因此梗塞體積變異性高[40]，從而無(wú)法準(zhǔn)確模擬人類大多數(shù)中風(fēng)，可能僅對(duì)于模擬腔隙性中風(fēng)和長(zhǎng)期恢復(fù)機(jī)制的研究更有用。此外，有研究表明內(nèi)皮素-1受體和內(nèi)皮素-1轉(zhuǎn)化酶也在神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)，并且內(nèi)皮素-1的應(yīng)用可以誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖、促進(jìn)軸突的萌動(dòng)，這可能會(huì)對(duì)腦卒中后恢復(fù)機(jī)制的研究產(chǎn)生干擾[41-43]。

6 自發(fā)性卒中模型

高血壓是中風(fēng)初期和復(fù)發(fā)的主要危險(xiǎn)因素，其在腦卒中患者中的破壞性影響促使我們有必要將動(dòng)脈性高血壓動(dòng)物模型納入腦卒中的研究中。中風(fēng)研究中代表性的高血壓動(dòng)物模型有中風(fēng)易發(fā)性自發(fā)性高血壓大鼠(SHRSP)和中風(fēng)易發(fā)性腎血管性高血壓大鼠(RHRSP)，兩者都有較高的自發(fā)性中風(fēng)發(fā)生率。1963年岡本和青木開(kāi)發(fā)的中風(fēng)易發(fā)性自發(fā)性高血壓大鼠(spSHR)，類似于人類的原發(fā)性高血壓[44,45]。spSHR在出生6周后通過(guò)高鹽飲食形成高血壓，12周后迅速加重為惡性高血壓(>240 mm Hg)，從而可導(dǎo)致在紋狀體和皮層下白質(zhì)中出現(xiàn)小的皮層下梗死，梗死灶的形成是由高血壓性小血管疾病引起的，伴隨小動(dòng)脈壁增厚、纖維蛋白樣壞死和血管周?chē)g隙增大，與人類病理類似，可以很好地模擬人類腔隙性中風(fēng)[46-48]。此外，中風(fēng)易發(fā)腎血管性高血壓大鼠(RHRSP)于1998年引進(jìn)，是一種獨(dú)立于遺傳缺陷的獲得性高血壓動(dòng)物模型，屬于繼發(fā)性高血壓[49,50]。在這個(gè)模型中，當(dāng)大鼠年輕時(shí)(80～100 g)，暴露雙腎動(dòng)脈的根部并用直徑0.3 mm的環(huán)狀?yuàn)A子夾緊，血壓在雙側(cè)腎動(dòng)脈收縮后的第一周開(kāi)始升高，并在第3個(gè)月左右持續(xù)升高至180～220 mm Hg，約6個(gè)月后逐漸達(dá)到并穩(wěn)定在200～240 mm Hg。由于腦動(dòng)脈的形態(tài)和生理變化與高血壓患者相似，大鼠的自發(fā)性腦卒中發(fā)生率高于60%。但由于自然卒中的發(fā)生時(shí)間不確定，且基于腦卒中發(fā)病率隨季節(jié)變化而波動(dòng)的事實(shí)，Liu等[51]首次提出了利用環(huán)境控制室，在RHRSP中產(chǎn)生可重復(fù)的快速降溫來(lái)誘發(fā)自發(fā)性腦卒中，該方法的優(yōu)點(diǎn)是建立了與人類氣象條件相關(guān)的自然卒中動(dòng)物模型，使研究者不必等待很長(zhǎng)時(shí)間。

該動(dòng)物模型具有以下優(yōu)點(diǎn):腦血管病理生理學(xué)與人類高血壓高度相似、造模技術(shù)簡(jiǎn)單；但也存在造模周期長(zhǎng)，卒中發(fā)生類型不確定的局限。因此也可使用RHRSP聯(lián)合以上各種造模方法制備腦缺血模型，以更好地模擬人類高血壓動(dòng)脈硬化腦卒中模型。

7 不足與展望

造模時(shí)，所選動(dòng)物的年齡、性別和動(dòng)物品系等都會(huì)對(duì)卒中模型性能和結(jié)果產(chǎn)生影響，有研究表明年齡是腦卒中動(dòng)物模型臨床前研究的關(guān)鍵因素[52]。缺血性卒中主要發(fā)生在老年人，但是目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)性中風(fēng)的活體動(dòng)物模型幾乎普遍選用年輕的成年嚙齒動(dòng)物來(lái)完成。眾所周知，老年動(dòng)物卒中后通常神經(jīng)功能損害更嚴(yán)重，且恢復(fù)能力遠(yuǎn)低于年輕動(dòng)物,因此使用年輕動(dòng)物造模與臨床實(shí)際存在偏差[53]。性別可能是影響中風(fēng)結(jié)局的另一個(gè)因素。許多研究也表明，雌性激素在年輕成年動(dòng)物中具有神經(jīng)保護(hù)作用,這可能會(huì)對(duì)卒中后神經(jīng)保護(hù)機(jī)制的研究產(chǎn)生干擾[54]。此外，即使采用相同的缺血模型制備方法，不同的菌種和同一菌種的不同菌株也可能產(chǎn)生不同的結(jié)果。例如，Sugimori等[55]發(fā)現(xiàn)，使用氪(Kr)激光誘導(dǎo)光血栓閉塞MCA,BALB小鼠和比C57BL/6小鼠相比，所產(chǎn)生的梗死灶面積更大且可重復(fù)性更高。因此，根據(jù)研究目的選擇合適的動(dòng)物品系是很重要的。除上述因素外，考慮到卒中患者往往伴有一種或多種并發(fā)癥,實(shí)驗(yàn)中可應(yīng)用高血壓品系或糖尿病品系等的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以模擬人類病情的復(fù)雜性。另外，在動(dòng)物建模過(guò)程中,注意對(duì)多種生理性變量的優(yōu)化和把控,如血流量[56]、體溫[57]、麻醉[58]等，也可增進(jìn)動(dòng)物模型與人類臨床實(shí)際的相關(guān)性。

人類腦卒中的相關(guān)認(rèn)識(shí)研究大都是通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得的，且基于動(dòng)物模型的研究也開(kāi)發(fā)測(cè)試了許多新的藥物和療法。但是由于腦血管疾病的復(fù)雜性和患者自身狀況的多樣性，試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的許多神經(jīng)保護(hù)策略未能在人類身上成功轉(zhuǎn)化，想要建立通用型動(dòng)物模型顯然也是不切實(shí)際的。因此在不斷規(guī)范和量化實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ拖嚓P(guān)操作、改進(jìn)技術(shù)的同時(shí)，研究者也要根據(jù)具體情況做綜合立體化的考量，選擇合適的造模方法，以便從動(dòng)物組織中獲取更接近人類腦卒中疾病變化真實(shí)情況的結(jié)果，從而提高實(shí)驗(yàn)中有效療法轉(zhuǎn)化為臨床治療的潛力。