結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)用于肺結(jié)核診斷的臨床價(jià)值分析

葉雨?yáng)|

（廣西壯族自治區(qū)胸科醫(yī)院，廣西 柳州，545005）

結(jié)核病屬于臨床較為常見(jiàn)的傳染性疾病，主要由于機(jī)體感染致病菌（結(jié)核分枝桿菌）所致，可累及至機(jī)體多個(gè)臟器，其中以肺部感染結(jié)核最為多見(jiàn)[1]。肺結(jié)核患者主要臨床表現(xiàn)包括咳嗽、咳痰、低熱（午后顯著）、咯血、胸痛及胸悶或呼吸困難等[2]。結(jié)核病是由T細(xì)胞介導(dǎo)的保護(hù)性免疫反應(yīng)與病理學(xué)免疫反應(yīng)調(diào)控失衡所引發(fā)的免疫疾病，人體免疫功能特別是細(xì)胞免疫狀態(tài)對(duì)本病發(fā)生起到一定誘導(dǎo)作用，并在病程進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[3]。故通過(guò)檢測(cè)結(jié)核感染T細(xì)胞變化情況可為臨床疾病診斷提供一定依據(jù)。本研究對(duì)我院肺結(jié)核患者開(kāi)展結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)，并探討其臨床診斷價(jià)值，內(nèi)容如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年9月～2020年9月我院115例疑似肺結(jié)核患者與98例非結(jié)核患者；甲組男女比例68：47，年齡18～65歲，均值（41.54±3.65）歲；乙組男女比例58：40，年齡 19～64歲，均值（41.56±3.62）歲，以上一般資料（P＞0.05），此項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：均符合肺結(jié)核臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；所有受檢者均知情同意參與本次實(shí)驗(yàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：檢測(cè)不合格者；合并其他病毒性感染者；入組前應(yīng)用免疫抑制劑者。

1.2 方法 所有受檢者均接受痰涂片抗酸染色鏡檢：抗酸桿菌染色嚴(yán)格依據(jù)《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》開(kāi)展相關(guān)操作，試劑由珠海貝索公司提供。隨后開(kāi)展T-SPOT.TB檢測(cè)：嚴(yán)格按照購(gòu)自廣州迪澳醫(yī)療科技有限公司的T-SPOT.TB試劑盒相關(guān)說(shuō)明書(shū)執(zhí)行規(guī)范操作，測(cè)定方法為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法。采集受檢者靜脈血4mL，室溫（18～22℃）放置4h內(nèi)完成分離，標(biāo)本內(nèi)加入生理鹽水混勻后再加至淋巴細(xì)胞分離液內(nèi)，于22℃、1800g離心20min后分離得到單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）；提取PBMCs細(xì)胞層，使用RPMI-1640培養(yǎng)液補(bǔ)齊至12mL進(jìn)行10min離心，棄上清、再補(bǔ)齊至5mL經(jīng)吹打沉淀重懸后開(kāi)展10min離心，棄上清、加入1mL無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。重懸細(xì)胞沉淀后，取10μL細(xì)胞懸液加入0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液中，混勻后取混合液加入血球計(jì)數(shù)板，顯微鏡下計(jì)數(shù)；無(wú)血清培養(yǎng)基配置至少400μL的細(xì)胞懸液（濃度為2.5×106個(gè)/ml）待用。

1.3 觀察指標(biāo) （1）T-SPOT.TB陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：參照試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)抗原A和（或）抗原B孔內(nèi)反應(yīng)結(jié)果實(shí)施判定，①陰性對(duì)照孔沒(méi)有或不超過(guò)10個(gè)斑點(diǎn)而陽(yáng)性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)超過(guò)20個(gè)；②陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為0～5時(shí)且（抗原A或抗原B孔的斑點(diǎn)數(shù)）-（陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）≥6；③陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為6～10個(gè)時(shí)，待測(cè)樣本應(yīng)為抗原A或抗原B斑點(diǎn)數(shù)≥2倍的陰性對(duì)照孔的斑點(diǎn)數(shù)，符合以上標(biāo)準(zhǔn)判斷為陽(yáng)性，即有反應(yīng)性[5]。其中6～10個(gè)斑點(diǎn)數(shù)表示輕度陽(yáng)性、11～50個(gè)表示明顯陽(yáng)性、>50個(gè)表示超強(qiáng)陽(yáng)性。（2）敏感度=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）*百分比；特異性=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）*百分比；診斷準(zhǔn)確率=（真陽(yáng)性+真陰性）*百分比[6]。

1.4 數(shù)據(jù)處理 運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 21.0計(jì)算數(shù)據(jù)，[n（%）]表示計(jì)數(shù)資料，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有意義。

2.結(jié)果

2.1 兩組受檢者T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果比較 甲組受檢者T-SPOT.TB檢測(cè)A抗原及B抗原陽(yáng)性率顯著高于乙組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），如表1所示：

表1 兩組受檢者T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果比較[n（%）]

2.2 兩種檢驗(yàn)方式與金標(biāo)準(zhǔn)比對(duì) 痰涂片檢查結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)得出真陽(yáng)性81例，假陽(yáng)性6例，真陰性8例，假陰性20例；T-SPOT.TB檢測(cè)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)得出真陽(yáng)性93例，假陽(yáng)性1例，真陰性13例，假陰性8例，如表2、3所示：

表2 痰涂片檢查與組織病理學(xué)檢查結(jié)果比對(duì)結(jié)果

表3 T-SPOT.TB檢測(cè)與組織病理學(xué)檢查結(jié)果比對(duì)結(jié)果

2.3 不同檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽(yáng)性與陰性預(yù)測(cè)值 T-SPOT.TB檢測(cè)的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽(yáng)性與陰性預(yù)測(cè)值均高于痰涂片檢查，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），如表4所示：

表4 兩種檢驗(yàn)方式的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽(yáng)性與陰性預(yù)測(cè)值比較[n（%）]

3.討論

既往采用的抗酸染色盡管具有良好的特異度，但其陽(yáng)性率偏低。臨床所有肺結(jié)核患病群體中涂陰肺結(jié)核占比可達(dá)40%-60%，如何早期明確診斷、及時(shí)對(duì)涂陰肺結(jié)核開(kāi)展針對(duì)性治療成為目前控制結(jié)核病傳播的關(guān)鍵[7]。穿刺病理組織檢測(cè)存在有創(chuàng)性、患者耐受性差、病變部位等問(wèn)題，導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到一定限制；且與其他肉芽腫病變的鑒別難度也較大。結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)存在耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)的弊端，例如羅氏培養(yǎng)至少需要8周才可明確標(biāo)本是否為陽(yáng)性，嚴(yán)重影響臨床治療的開(kāi)展。故積極探索更為科學(xué)且高效的檢查方法以明確臨床診斷顯得尤為必要。

研究指出，肺結(jié)核患者疾病發(fā)生與發(fā)展與機(jī)體T淋巴細(xì)胞比例密切相關(guān)；而淋巴細(xì)胞比例失衡可受到多種因素影響，其中激素及免疫抑制藥物應(yīng)用對(duì)機(jī)體T細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用，從而破壞外周血T細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡[8]。石衛(wèi)武[9]等學(xué)者報(bào)道中，T-SPOT.TB在活動(dòng)性結(jié)核病診斷中具有良好的輔助作用，結(jié)核病陽(yáng)性率（85.71%）、疑似結(jié)核病陽(yáng)性率（72.31%）及非結(jié)核病陽(yáng)性率（28.63%）存在明顯差異。T-SPOT.TB檢測(cè)開(kāi)展期間結(jié)核分枝桿菌特異性抗原對(duì)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生刺激，促使其大量釋放IFN-T，可重點(diǎn)檢測(cè)活細(xì)胞的功能；且刺激原ESAT-6、CFP-IO抗原基因均嚴(yán)格限制于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群及4種非結(jié)核分枝桿菌，一定程度上保證試驗(yàn)的特異度。本研究結(jié)果顯示，T-SPOT.TB檢測(cè)的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽(yáng)性與陰性預(yù)測(cè)值均顯著高于痰涂片檢查，分析原因可能為T(mén)-SPOT.TB檢測(cè)主要通過(guò)刺激致敏淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ，與微孔板上的IFN-γ抗體結(jié)合后借助顯色反應(yīng)后進(jìn)行結(jié)果判定；且該試驗(yàn)不易受到外界因素（如T淋巴細(xì)胞數(shù)量、非結(jié)核桿菌及卡介苗）的影響、靈敏度較高。本研究中，甲組A抗原及B抗原陽(yáng)性率均高于乙組，充分說(shuō)明T-SPOT.TB檢測(cè)能夠有效區(qū)分肺結(jié)核與非結(jié)核患者。此外，還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，高斑點(diǎn)數(shù)時(shí)A抗原陽(yáng)性率相對(duì)較高，其認(rèn)為A抗原斑點(diǎn)數(shù)可能與結(jié)核活動(dòng)性存在相關(guān)性[10]。不過(guò)值得注意的是，T-SPOT.TB檢測(cè)活動(dòng)性結(jié)核病的敏感度及特異度可能受抗酸染色及培養(yǎng)結(jié)果、結(jié)核病灶部位、陳舊性結(jié)核病灶、非結(jié)核分枝桿菌感染等因素影響，故臨床醫(yī)師診斷仍需結(jié)合臨床進(jìn)行綜合分析。

綜上所述，T-SPOT.TB檢測(cè)在臨床應(yīng)用后獲得滿(mǎn)意效果，不僅能夠顯著提高肺結(jié)核患者的陽(yáng)性檢出率，且具有較高的敏感度，特異性良好，從而有助于臨床診斷準(zhǔn)確率提高，值得臨床采納與推廣。