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    蜂房栓劑制備工藝及抑痔藥效學(xué)研究

    2021-12-08 03:24:33王紹仙趙若丹王瑩王玉新陳旭冰
    關(guān)鍵詞:蜂房栓劑痔瘡

    王紹仙 趙若丹 王瑩 王玉新 陳旭冰

    【摘 要】 目的:探討蜂房對(duì)痔瘡的治療作用。方法:將蜂房提取物制成栓劑,并進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)。結(jié)果:蜂房栓劑低劑量組大鼠肛周組中度紅腫,有少量分泌物,無出血和糜爛。蜂房栓劑高劑量組大鼠肛周組輕度紅腫,有少量分泌物,無出血和糜爛。低劑量組除iNOS含量顯著降低外(P<0.01),對(duì)其它炎癥因子無明顯影響,高劑量組顯著降低組織中TNF-α、IL-6、IL-1β及iNOS含量(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論:蜂房栓劑對(duì)痔瘡有一定的治療作用,其發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)是否是黃酮類化合物還需進(jìn)一步研究。

    【關(guān)鍵詞】 蜂房;栓劑;痔瘡

    【中圖分類號(hào)】R944.2?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517(2021)20-0022-03

    Prepatation of Nidus Vespae Suppository and Its Pharmacodynamics on Hemorrhoids

    WANG Shaoxian ZHAO Ruodan WANG Ying WANG Yuxin CHEN Xubing*

    College of Pharmacy, Dali University, Dali 671000, China

    Abstract:Objective In this paper, the therapeutic effect of nidus vespae on hemorrhoids was studied. Methods The suppository of extract of nidus vespae was prepared and its pharmacodynamics was evaluated. Results In the low-dose group, the perianal tissues of rats were moderately red and swollen, with a small amount of secretion, no bleeding and erosion. In the high-dose group, the perianal tissues of rats were mild red and swollen, with a small amount of secretion, no bleeding and erosion. The low dose group had no significant effect on inflammatory factors except iNOS (P<0.01), While the contents of TNF-α, IL-6, IL-1β and iNOS in high dose group were significantly decreased (P<0.05,P<0.01). Conclusion The suppository of extract of nidus vespae had certain therapeutic effect on hemorrhoids. It needs to further study whether the material basis of its effect is flavonoids.

    Key words:Nidus Vespae; Suppository; Hemorrhoids

    痔瘡是直腸下端的肛墊出現(xiàn)病理性肥大的表現(xiàn),民間常說“十人九痔”,可見痔瘡是一種常見病,其臨床表現(xiàn)為局部炎癥、水腫、疼痛、糜爛、便血,甚則脫肛[1-2]。在痔瘡的諸多治療方法中,局部給藥能直接作用于發(fā)病部位,更好地發(fā)揮藥效,是一種較理想的給藥途徑,其中以栓劑應(yīng)用最為廣泛。栓劑對(duì)初期內(nèi)痔及二、三期內(nèi)痔有止血、止痛、收斂、消炎等作用,對(duì)全身癥狀和直腸炎癥也有治療作用。蜂房是胡蜂的巢,《本草綱目》、《本草綱目彩色藥圖》記載,蜂房具有祛風(fēng)、攻毒、殺蟲、止痛的功效,可以治療痔瘡[3-4], 《神農(nóng)本草經(jīng)》也記載,蜂房能治腸痔?,F(xiàn)代研究[5]發(fā)現(xiàn),蜂房中含有黃酮類化合物,黃酮類化合物具有抗炎的作用,為古籍療法提供了一定的科學(xué)依據(jù)。為了探討蜂房對(duì)痔瘡的治療作用,本文將蜂房提取物制成栓劑,并進(jìn)行了藥效學(xué)評(píng)價(jià)。

    1 材料與儀器

    1.1 材料 金環(huán)胡蜂蜂房購自云南省大理市下關(guān)鎮(zhèn),經(jīng)云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室楊自忠教授鑒定為膜翅目(Hymenoptera)胡蜂科(Vespidae)胡蜂屬(Polistes)昆蟲金環(huán)胡蜂Vespa mandarinia Smith的蜂房。乙醇為國產(chǎn)分析純,水為蒸餾水,蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):100080-200707,中國藥品生物制品檢定所),混合脂肪酸甘油酯(批號(hào):20160928,上海源葉生物科技有限公司)。

    1.2 儀器 R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司),JY2002電子天平(上海精其儀器有限公司),METTLER TOLEDO分析天平(上海梅特勒—托利多儀器有限公司),HWS-12型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科學(xué)儀器有限公司),DHG-9030A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司),搖擺式中藥粉碎機(jī)(上海燁昌食品機(jī)械有限公司)。

    2 栓劑的制備

    2.1 浸膏的制備 取金環(huán)胡蜂蜂房(如圖1所示)1000 g,加入3000 mL 50%乙醇加熱回流提取2 h,提取液經(jīng)棉花過濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮后得浸膏,將浸膏置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)在70℃條件下烘4 h,恒重,得浸膏100 g,研磨,過80目篩,備用。

    2.2 總黃酮含量的測(cè)定

    2.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密稱取0.0106 g蘆丁,加入適量50%乙醇完全溶解后轉(zhuǎn)移至25 mL的棕色容量瓶中,定容,備用。

    2.2.2 顯色方法 取待測(cè)樣品溶液1 mL于l0 mL比色管中,加50%乙醇定容至2.0 mL。加入5%的亞硝酸鈉溶液0.5 mL,混勻,靜置6 min后加入10%的硝酸鋁溶液0.5 mL,混勻,靜置6 min后再加入4%的氫氧化鈉溶液4.0 mL,用50%的乙醇定容,靜置15 min后測(cè)定吸光度。取1 mL 50%乙醇溶液作為待測(cè)樣品按上述操作配制空白對(duì)照溶液[5]。

    2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL于10 mL棕色容量瓶中,按上述顯色方法顯色后,在360 nm波長處測(cè)定吸光度值。每個(gè)樣品重復(fù)操作3次取平均值,以濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[5]。

    2.2.4 總黃酮含量的測(cè)定 取0.02 g浸膏溶于10 mL甲醇溶液中,取1 mL溶液按上述操作步驟測(cè)定吸光度值,測(cè)3次取平均值,將吸光度值帶入回歸方程,得到總黃酮的濃度,計(jì)算出總黃酮的含量為0.39 mg/g。

    2.3 主藥劑量確定 露蜂房浸膏粉在每枚栓中的含量根據(jù)總黃酮的含量和臨床栓劑質(zhì)量確定。

    2.4 栓劑的制備

    2.4.1 純基質(zhì)栓的制備 將10 g混合脂肪酸甘油酯置于蒸發(fā)皿中,70 ℃條件下水浴加熱至熔化,灌入涂有液體石蠟油的栓模中,靜置凝固,削去溢出部分,啟模(如圖2所示),選取5枚稱重分別為0.98、0.95、0.96、0.94、0.97 g,平均栓重G為0.96 g。

    2.4.2 含藥栓的制備 將混合脂肪酸甘油酯置于蒸發(fā)皿中,70 ℃條件下水浴加熱至熔化,再加露蜂房浸膏粉,灌入涂有液體石蠟油的栓模中,靜置凝固,削去溢出部分,啟模(如圖3所示),選取5枚稱重分別為1.24、1.23、1.21、1.22、1.20 g,平均栓重M為1.22。

    2.4.3 計(jì)算置換價(jià) 根據(jù)公式DV=W/[G-(M-W)]計(jì)算置換價(jià),W為一枚含藥栓中的平均含藥質(zhì)量,經(jīng)計(jì)算置換價(jià)為1.62。

    2.4.4 處方最大含藥量確定 稱取3份20 g混合脂肪酸甘油酯于70℃條件下水浴加熱至熔化,分別加入5 g、10 g和15 g露蜂房浸膏粉,灌入涂有液體石蠟油的栓模中,靜置凝固,削去溢出部分,啟模,分別得到含主藥20%、33%和43%的栓劑。以外觀、成型和硬度為指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià),選擇最大含藥量為33%。

    2.4.5 融變時(shí)限 將自制蜂房栓3枚,分別置于融變儀中測(cè)定融變時(shí)限。3枚蜂房栓均在(22±2)內(nèi)融化、軟化,符合油脂性基質(zhì)要求。

    3 蜂房栓對(duì)痔瘡的作用

    3.1 材料

    3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠,6周齡,SPF級(jí),購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,動(dòng)物合格證號(hào):S(湘)2016-0002。25 ℃室溫喂養(yǎng),給予大鼠專用標(biāo)準(zhǔn)飼料、純凈水,自由取食飲水,所有實(shí)驗(yàn)研究均符合中國倫理委員會(huì)有關(guān)動(dòng)物研究指導(dǎo)原則。

    3.1.2 藥品及試劑 IL-1β試劑盒(批號(hào):20170901)、IL-6 試劑盒(批號(hào):20170901)、TNF-α試劑盒(批號(hào):20170901)、iNOS試劑盒(批號(hào):20170901)等均購自南京建成生物工程研究所。

    3.2 方法

    3.2.1 分組 50只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為空白組、模型組、治療組高、低劑量組和陽性藥組(消炎痛栓組),每組10只。

    3.2.2 造模 空白組大鼠未處理,其余組用水合氯醛行腹腔麻醉。模型組和實(shí)驗(yàn)組均用浸吸巴豆油混合液的棉球插入麻醉后的大鼠肚門內(nèi),將大鼠頭朝上提起直立,10 s后拔出[6]。

    3.2.3 給藥 陽性對(duì)照組和受試藥組分別給予消炎痛栓和蜂房栓劑,加熱融化后,按大鼠重量制成小塊納入大鼠肛門,并用膠布固定。除空白組和模型組外,其余組于造模6 h后開始給藥,共給藥2次,每次間隔6 h。末次給藥6 h后,動(dòng)物處死取肛周組織。

    3.2.4 取材 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,以棉簽插入肛門為指引,沿肛周0.5 cm環(huán)形分離肚門,深至直腸上1.0~1.5 cm,剪斷腸管,冰浴上充分研磨,離心后取其上清液移至管中放入冰箱保存。

    3.3 結(jié)果

    3.3.1 肛周組織形態(tài)改變 空白組大鼠肛門回縮,無水腫等異常情況;模型組大鼠肛周組可見紅腫,大量分泌物,偶見輕度糜爛,未見出血點(diǎn)。陽性藥組大鼠肛周組織仍有輕度紅腫,但無分泌物、糜爛和出血。蜂房栓劑低劑量組大鼠肛周組中度紅腫,有少量分泌物,無出血和糜爛。蜂房栓劑高劑量組大鼠肛周組輕度紅腫,有少量分泌物,無出血和糜爛。如表1。

    3.3.2 蜂房栓劑對(duì)TNF-α、IL-6、IL-1β和iNOS含量的影響 與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠組織中TNF-α、IL-6、IL-1β及iNOS含量顯著升高(P<0.01)。與模型對(duì)照組相比,陽性組大鼠組織中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS含量顯著降低 (P<0.01),低劑量組除iNOS含量顯著降低外(P<0.01),對(duì)其它炎癥因子無明顯影響,高劑量組顯著降低組織中TNF-α、IL-6、IL-1β及iNOS含量(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果見表2。

    4 討論

    栓劑形式給藥既可以避免胃酸和消化道酶對(duì)藥物的破壞,又可以避免藥物對(duì)胃黏膜的刺激,同時(shí)能直接作用于病灶部位而迅速發(fā)揮作用,提高患者的生活質(zhì)量,栓劑在腔道給藥中尤其具有優(yōu)勢(shì)[7]。栓劑的制備過程中,基質(zhì)的選擇尤為重要,在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)分別選用水溶性基質(zhì)聚乙二醇(PEG)和脂溶性基質(zhì)混合脂肪酸甘油酯為栓劑基質(zhì),以外觀、成型和硬度為指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)混合脂肪酸甘油酯為基質(zhì)制備的栓劑優(yōu)于聚乙二醇為基質(zhì)制備的栓劑,因此選擇混合脂肪酸甘油酯為栓劑基質(zhì)。民間常用蜂房喂牛、馬等牲畜來預(yù)防疾病?!侗静菥V目》記載,蜂房可以治療痔瘡,但對(duì)其抑痔作用的藥效學(xué)研究未見報(bào)道。為進(jìn)一步深入挖掘蜂房的藥用價(jià)值,本研究將蜂房提取物制成栓劑,并進(jìn)行了初步的藥效學(xué)評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)蜂房栓劑明顯減輕痔周組織的炎癥反應(yīng),模型動(dòng)物肛周紅腫范圍明顯縮小,分泌物減少,炎癥因子顯著降低,結(jié)果證明蜂房栓劑對(duì)痔瘡有一定的治療作用,在治療痔瘡上具有開發(fā)價(jià)值。另有報(bào)道稱其藥效作用物質(zhì)可能為黃酮類化合物[5,8],蜂房藥效物質(zhì)基礎(chǔ)至今仍不明確,還需進(jìn)一步研究。

    參考文獻(xiàn)

    [1]譚志平. 痔科消炎膏與馬應(yīng)龍痔瘡膏治療痔腫痛的療效比較[J]. 廣東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2020, 38(4):466-468.

    [2]馬東云,董艷敏,宋帥,等.? 針刺“痔點(diǎn)”、頭頂部反應(yīng)點(diǎn)配合隔藥灸臍法治療痔瘡27例[J]. 中國針灸,2020, 40(1):48-48.

    [3]李時(shí)珍. 本草綱目[M].重慶:重慶大學(xué)出版社,1994.

    [4]邱德文,吳家榮,夏同珩. 本草綱目彩色藥圖[M]. 貴陽:貴州科技出版社,1998.

    [5]李超.天然蜂巢黃酮類化合物的鑒定和活性研究[D]. 長春:長春工業(yè)大學(xué),2015.

    [6]張媛. 廣痛消泡沬氣霧劑治療肛門水腫模型的實(shí)驗(yàn)研究及炎性痔的臨床觀察[D]. 北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2014.

    [7]木巴拉克·伊明江,程雪梅,娜祖克·阿不都,等. 沒食子栓劑成型工藝研究 [J]. 中國中藥雜志,2017, 42(16):3136-3142.

    [8]王景晨. 一株鏈霉菌與蜂巢化學(xué)成分的研究[D]. 石家莊:河北大學(xué),2016.

    (收稿日期:2021-03-08 編輯:陶希睿)

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