發(fā)育期間乳鴿血清代謝物及代謝通路的變化

安 勇 計(jì) 峰 王雪敏 王 錚 張 帥

(1.河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，邯鄲 056000；2.北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100089)

鴿(Columbaliviadomestica)屬于鳥綱，鴿形目，鳩鴿科，鴿屬，是一種較早被人類馴養(yǎng)的鳥類[1-2]。鴿肉和鴿蛋營養(yǎng)價(jià)值豐富，具有多種藥用功效，民間素有“一鴿勝九雞”的說法，因此近年來鴿已發(fā)展為我國第四大家禽[3]。與其他家禽不同的是，鴿作為晚成鳥，出殼后的乳鴿最初無法獨(dú)立進(jìn)食，必須依靠親鴿通過口對口逆嘔式哺喂才能存活[4-6]。鴿乳是由親鴿嗉囊組織分泌的一種富含營養(yǎng)成分的乳酪狀物質(zhì)，隨著乳鴿日齡的增長，鴿乳逐漸與親鴿攝食的谷物混合，最后鴿乳完全被谷物取代[7-9]。已有研究表明，14日齡是乳鴿生長發(fā)育的重要轉(zhuǎn)折點(diǎn)，14日齡后乳鴿的生長強(qiáng)度和生長速度均有所下降[10]。謝鵬等[11]研究發(fā)現(xiàn)，21日齡時(shí)親鴿分泌的鴿乳減少，這是乳鴿后期生長速度變慢的主要原因。然而，現(xiàn)有研究多集中于哺育期親鴿生理狀態(tài)的變化，對乳鴿生長發(fā)育期的代謝物特點(diǎn)研究較少。因此，本試驗(yàn)應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)對14和21日齡乳鴿血清中代謝物進(jìn)行檢測，以了解乳鴿發(fā)育期生理狀態(tài)的變化，為生產(chǎn)中更好地滿足其營養(yǎng)需要提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

試驗(yàn)選取14日齡、體重(398.33±43.2)g與21日齡、體重(449.17±49.44)g的健康乳鴿各6只，試驗(yàn)乳鴿來自北京市密云區(qū)鴿場。12只乳鴿由親鴿哺喂(2+2模式)，按照日齡分為2組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只，于同一舍飼養(yǎng)，統(tǒng)一飼喂玉米、豌豆、高粱和小麥為基礎(chǔ)的配合飼料，自由采食和飲水，按常規(guī)進(jìn)行飼養(yǎng)管理，每天光照16 h，舍內(nèi)溫度控制在(22±6)℃。

1.2 樣品采集

從乳鴿的翅靜脈進(jìn)行無菌采血，然后在4 ℃下以3 000 r/min離心10 min后取血清，于-80 ℃保存以備檢測。

1.3 試劑與儀器

主要試劑：甲醇(Fisher公司，美國)、乙腈(Fisher公司，美國)、甲酸(Fisher公司，美國)、純水(Fisher公司，美國)、丙醇(Fisher公司，美國)，以上試劑均為色譜純。

主要儀器：Triple TOF5600三重四級桿質(zhì)譜(AB Sciex公司，美國)、ExionLC AD液相色譜系統(tǒng)(AB Sciex公司，美國)、HSS T3色譜柱(1.8 μm，2.1 mm×100 mm，Waters公司，美國)、JXDC-20型氮?dú)獯祾邇x(上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司)、LNG-T88型臺式快速離心濃縮干燥器(太倉市華美生化儀器廠)、Wonbio-96c型高通量組織破碎儀(上海萬柏生物科技有限公司)、SBL-10TD型超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)、Centrifuge 5430R型高速冷凍離心機(jī)(Eppendorf公司，德國)、NewClassic MF MS105DU型電子天平(梅特勒公司，瑞士)。

1.4 樣本制備

取100 μL血清樣本于2 mL離心管中，加入1顆直徑6 mm的研磨珠。用400 μL提取液(甲醇∶水=4∶1，體積比)含0.02 mg/mL的內(nèi)標(biāo)(L-2-氯苯丙氨酸)提取代謝物。樣本溶液于高通量組織破碎儀研磨6 min(-10 ℃，50 Hz)，然后低溫超聲提取30 min(5 ℃，40 kHz)。將樣本于-20 ℃靜置30 min，再離心15 min(4 ℃，13 000×g)，最后移取上清液上機(jī)分析。

1.5 質(zhì)控(QC)樣本

取等體積的所有樣本提取物混合制備成QC樣本，在儀器分析過程中，每6個(gè)樣本中插入1個(gè)QC樣本，以考察整個(gè)分析過程的重復(fù)性。

1.6 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析

儀器平臺為AB SCIEX公司的超高效液相色譜串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Triple TOF)系統(tǒng)。

1.6.1 色譜條件

10 μL樣本經(jīng)HSS T3色譜柱(1.8 μm，2.1 mm×100 mm)分離后進(jìn)入質(zhì)譜檢測。流動相A為95%水+5%乙腈(含0.1%甲酸)，流動相B為47.5%乙腈+47.5%異丙醇+5%水(含0.1%甲酸)。分離梯度：0～0.1 min，流動相B從線性0升至5%；0.1～2.0 min，流動相B從線性5%升至25%；2～9 min，流動相B線性從25%升至100%；9～13 min，流動相B線性維持100%；13.0～13.1 min，流動相B線性從100%降至0；13.1～16.0 min，流動相B線性維持0。流速為0.40 mL/min，柱溫為40 ℃。

1.6.2 質(zhì)譜條件

樣本質(zhì)譜信號采集采用正負(fù)離子掃描模式，質(zhì)量掃描范圍質(zhì)荷比(m/z)：50～1 000。離子噴霧電壓，正離子電壓5 000 V，負(fù)離子電壓-4 000 V，去簇電壓80 V，噴霧氣50 psi，輔助加熱氣50 psi，氣簾氣30 psi，離子源加熱溫度550 ℃，(40±20)V循環(huán)碰撞能。

1.7 數(shù)據(jù)預(yù)處理和搜庫

上機(jī)完成之后，LC-MS原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入代謝組學(xué)處理軟件Progenesis QI(Waters公司，美國)進(jìn)行基線過濾、峰識別、積分、保留時(shí)間校正、峰對齊，最終得到一個(gè)保留時(shí)間、質(zhì)荷比和峰強(qiáng)度的數(shù)據(jù)矩陣，數(shù)據(jù)矩陣用80%規(guī)則來去除缺失值，再進(jìn)行空缺值填補(bǔ)(原始矩陣中最小值填補(bǔ)空缺值)，為減小樣本制備及儀器不穩(wěn)定帶來的誤差，用總和歸一化法對樣本質(zhì)譜峰的響應(yīng)強(qiáng)度進(jìn)行歸一化，得到歸一化后的數(shù)據(jù)矩陣。同時(shí)刪除QC樣本相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)>30%的變量，并進(jìn)行l(wèi)og10對數(shù)化處理，得到最終用于后續(xù)分析的數(shù)據(jù)矩陣。同時(shí)將MS和MS/MS質(zhì)譜信息與代謝公共數(shù)據(jù)庫HMDB(http：//www.hmdb.ca/)和Metlin數(shù)據(jù)庫(https：//metlin.scripps.edu/)進(jìn)行匹配，得到代謝物信息。

1.8 統(tǒng)計(jì)與分析

預(yù)處理后的數(shù)據(jù)上傳美吉生物云平臺(https：//cloud.majorbio.com)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。利用R軟件包ropls(Version1.6.2)進(jìn)行主成分分析(PCA)和正交最小偏二乘判別分析(OPLS-DA)，并使用7次循環(huán)交互驗(yàn)證來評估模型的穩(wěn)定性。此外，進(jìn)行student’st檢驗(yàn)分析。差異代謝物的選擇基于OPLS-DA模型得到的變量投影重要度(VIP)和student’st檢驗(yàn)P值來確定，VIP>1、P<0.05的代謝物為差異代謝物，并通過KEGG數(shù)據(jù)庫(https：//www.kegg.jp/kegg/pathway.html)進(jìn)行代謝通路注釋，獲得差異代謝物參與的通路。利用Python軟件包scipy(version 1.0.0)進(jìn)行通路富集分析，并通過Fisher精確檢驗(yàn)獲得與試驗(yàn)處理最相關(guān)的生物學(xué)途徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 LC-MS數(shù)據(jù)的特征

在14和21日齡乳鴿血清樣本中共提取到11 538個(gè)質(zhì)譜峰。經(jīng)搜庫(自建庫、Metlin、HMDB等數(shù)據(jù)庫)定性分析，共鑒定出694種代謝物，其中正離子模式鑒定到332種代謝物，負(fù)離子模式鑒定到362種代謝物。

2.2 PCA

通過PCA可初步了解組間整體代謝差異和組內(nèi)的重復(fù)穩(wěn)定性，PCA結(jié)果可以顯示樣本間代謝組的分離趨勢，反映了樣本間代謝組的差異大小。由圖1可知，PCA模型中QC樣本緊密聚集在一起，表明本試驗(yàn)穩(wěn)定性和重復(fù)性較好。2組樣本之間有明顯的分離趨勢，說明2組樣本的代謝產(chǎn)物存在差異，且樣本全部處于95%置信區(qū)間內(nèi)。R2X為決定PCA模型質(zhì)量的主要參數(shù)，PCA正離子模型和負(fù)離子模型的R2X分別為0.669、0.533，2個(gè)參數(shù)值均大于0.5，說明PCA模型良好。

A：正離子模型PCA得分圖 PCA score graph of the positive ion model；B：負(fù)離子模型PCA得分圖 PCA score graph of the negative ion model。D0_14:14日齡乳鴿 14-day-old pigeon；D0_21:21日齡乳鴿 21-day-old pigeon；QC:質(zhì)控樣本 quality control sample。下圖同the same as below。圖1 14與21日齡乳鴿血清樣本正、負(fù)離子模型PCA得分圖。Fig.1 PCA score graphs of positive and negative ion models of serum samples from 14-and 21-day-old squabs

2.3 OPLS-DA

OPLS-DA是代謝組學(xué)數(shù)據(jù)分析中常用方法，是最小偏二乘判別分析(PLS-DA)的擴(kuò)展。OPLS-DA能夠?qū)CA中不相關(guān)的差異信息去除，然后篩選差異代謝物。OPLS-DA模型得分圖(圖2)顯示，2組樣本均在95%的置信區(qū)間內(nèi)，14日齡組和21日齡組分別分布在第1主成分(PC1)的左側(cè)和右側(cè)，說明2組樣本之間存在差異。對于OPLS-DA正離子模型，R2X=0.699、R2Y=0.996、Q2=0.370；對于OPLS-DA負(fù)離子模型，R2X=0.480、R2Y=0.996、Q2=0.507，其中R2X和R2Y分別表示所建模型對X和Y矩陣的解釋率，Q2表示模型的預(yù)測能力。理論上R2、Q2數(shù)值越接近1，說明模型越好，數(shù)值低則說明模型的擬合準(zhǔn)確性差。通常情況下，R2、Q2高于0.5較好，高于0.3即可接受，從圖2可知該模型具有較高的解釋力和預(yù)測力。為了驗(yàn)證OPLS-DA模型是否存在過擬合，對模型進(jìn)行驗(yàn)證，以確保后續(xù)結(jié)果可靠，設(shè)置檢驗(yàn)為200次，驗(yàn)證模型結(jié)果(圖3)顯示Q2截距小于R2，且Q2回歸直線呈現(xiàn)左低右高的趨勢，表明OPLS-DA模型穩(wěn)健可靠，未發(fā)生過擬合，可進(jìn)一步根據(jù)VIP分析篩選差異代謝物。

A：正離子模型OPLS-DA得分圖 OPLS-DA score graph of the positive ion model；B：負(fù)離子模型OPLS-DA得分圖 OPLS-DA score graph of the negative ion model。圖2 14和21日齡乳鴿血清樣本正、負(fù)離子模型OPLS-DA得分圖Fig.2 OPLS-DA score graphs of positive and negative ion models of serum samples from 14-and 21-day-old squabs

A:正離子模型置換檢驗(yàn)圖 displacement inspection chart of positive ion mode；B:負(fù)離子模型置換檢驗(yàn)圖 displacement inspection chart of negative ion mode。圖3 14和21日齡乳鴿血清樣本OPLS-DA模型置換檢驗(yàn)圖Fig.3 OPLS-DA model replacement test chart of serum samples from 14-and 21-day-old squabs

2.4 差異代謝物的篩選

通過OPLS-DA模型PC1的VIP及獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)的P值，尋找2個(gè)日齡乳鴿血清中的差異性表達(dá)代謝物。設(shè)置限定條件為VIP>1、FC>1或FC<1且P<0.05，篩選出的差異代謝物如表1所示。在14與21日齡乳鴿血清樣本中共篩選出71種差異代謝物(38種正離子化差異代謝物和33種負(fù)離子化差異代謝物)，其中有49種豐度顯著上調(diào)(P<0.05)，22種豐度顯著下調(diào)(P<0.05)。根據(jù)HMDB數(shù)據(jù)庫化合物分類可將差異代謝物歸為如下6種類型：類脂類分子(35種)、有機(jī)雜環(huán)化合物(6種)、有機(jī)酸及其衍生物(5種)、苯基丙氨酸和聚酮(5種)、有機(jī)氧化合物(4種)、核苷酸類似物(2種)。

表1 14和21日齡乳鴿血清中的差異代謝物Table 1 Differential metabolites in serum of 14 and 21 day-old squabs

續(xù)表1序號No.差異代謝物Differentialmetabolites變量投影重要度VIP差異倍數(shù)FCP值P-value8磷脂酰膽堿[18∶2(9Z,12Z)/20∶4(8Z,11Z,14Z,17Z)]PC[18∶2(9Z,12Z)/20∶4(8Z,11Z,14Z,17Z)]1.121.040.0249反式,反式黏糠酸Trans-trans-muconicacid1.481.100.00510JanthitremC1.031.040.03911溶血磷脂酰膽堿[22∶4(7Z,10Z,13Z,16Z)]LysoPC[22∶4(7Z,10Z,13Z,16Z)]1.271.050.01212溶血磷脂酰膽堿(O-18∶0)LysoPC(O-18∶0)1.151.050.03813甘油磷酸膽堿Glycerophosphocholine1.221.080.029144′-羥基-R-苯丙酮4′-hydroxy-R-phenprocoumon1.371.120.03115諾孕酯Norgestimate1.010.950.0151616-溴-9E-十六碳烯酸16-bromo-9E-hexadecenoicacid2.161.450.02717Rieslingacetal1.160.860.03718棕櫚酰左旋肉堿Palmitoyl-L-carnitine1.261.070.03319草木犀甙Melilotin2.751.790.00820溶血磷脂乙醇胺[20∶4(8Z,11Z,14Z,17Z)/0∶0]LysoPE[20∶4(8Z,11Z,14Z,17Z)/0∶0]1.161.050.01321溶血磷脂酰膽堿[18∶2(9Z,12Z)]LysoPC[18∶2(9Z,12Z)]2.561.470.00822N-油?；拾彼酦-oleoylglycine3.232.380.00723D-葡萄糖基二氫鞘氨醇D-glucosyldihydrosphingosine1.691.190.03324BakkenolideB2.271.610.0482512-OAHSA3.514.240.00226神經(jīng)酰胺(d18∶1/22∶0)Ceramide(d18∶1/22∶0)1.001.050.04827磷脂酰乙醇胺[22∶5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)/22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)]PE[22∶5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)/22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)]1.541.170.03628鞘磷脂(d18∶1/14∶0)SM(d18∶1/14∶0)1.291.120.04829磷脂酰絲氨酸[16∶0/24∶1(15Z)]PS[16∶0/24∶1(15Z)]1.581.200.02530硬脂酰肉堿Stearoylcarnitine1.221.070.03631心磷脂[a-13∶0/i-24∶0/18∶2(9Z,11Z)/i-20∶0][rac]CL[a-13∶0/i-24∶0/18∶2(9Z,11Z)/i-20∶0][rac]1.320.920.02632油酰基肉堿Oleoylcarnitine1.441.070.01233(±)-Myristoylcarnitine1.811.160.00334癸?；笮鈮ADecanoyl-L-carnitine2.922.390.01435羥脯氨酰異亮氨酸Hydroxyprolyl-isoleucine1.060.940.01036異丁酰肉堿Isobutyrylcarnitine1.821.290.01937蜀黍苷Dhurrin2.060.680.028383-ethyl-2-(1-pyrrolidinyl)-2-cyclopenten-1-one1.820.780.0263917-十八碳炔酸17-octadecynoicacid1.241.040.01840谷氨酸組氨酸Histidinyl-glutamate2.170.670.02941山茶皂甙元BCamelliageninB2.140.680.02442磷脂酰絲氨酸[20∶5(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)/24∶1(15Z)]PS[20∶5(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)/24∶1(15Z)]1.101.050.02243環(huán)氧樟腦醛Epoxycampholenicaldehyde1.481.220.01744N-阿魏?；種b-feruloyltryptamine2.300.670.044

續(xù)表1序號No.差異代謝物Differentialmetabolites變量投影重要度VIP差異倍數(shù)FCP值P-value45(E)-8-羥基-2-辛烯-4,6-二炔酸(E)-8-hydroxy-2-octene-4,6-diynoicacid1.721.130.01246肌腱蛋白1-3Kinetensin1-31.581.170.00347S-腺苷蛋氨酸S-adenosylmethionine1.601.120.015482-(阿拉伯糖基氨基)-3-(葡糖基氨基)丙烷腈2-(arabinosylamino)-3-(glucosylamino)propanenitrile1.751.100.00049磷脂酰乙醇胺[15∶0/20∶2(11Z,14Z)]PE[15∶0/20∶2(11Z,14Z)]1.490.940.03050脫氧尿苷Deoxyuridine2.031.440.02251磷脂酰乙醇胺[P-16∶0/14∶1(9Z)]PE[P-16∶0/14∶1(9Z)]2.111.300.02452溶血磷脂酰膽堿(16∶0)LysoPC(16∶0)1.930.790.009535,7-二羥基-2’,6-二甲氧基異黃酮-7-鼠李糖苷5,7-dihydroxy-2’,6-dimethoxyisoflavone-7-rhamnoside1.771.180.02754紅藻膠Furcelleran1.531.200.04855L-棕櫚酰肉堿L-palmitoylcarnitine2.701.970.0235620-羥基-PGF2a20-hydroxy-PGF2a2.541.900.019573-dehydrosphinganinium(1+)1.641.310.034581-棕櫚酰甘油磷酸肌醇1-palmitoylglycerophosphoinositol1.071.080.01859Taraxacolide1-O-b-D-glucopyranoside1.250.880.03560十二烷基肉堿Dodecanoylcarnitine2.622.000.01061磷脂酰絲氨酸[18∶1(11Z)/20∶2(11Z,14Z)]PS[18∶1(11Z)/20∶2(11Z,14Z)]2.000.740.04162矮牽?；ㄋ?-龍膽二糖苷Petunidin3-gentiobioside2.391.590.039639,12-十六烷二?；鈮A9,12-hexadecadienoylcarnitine1.720.780.01664HebevinosideX2.130.720.037654-羥基苯甲醛4-hydroxybenzaldehyde1.410.900.01966谷氨酰色氨酸Glutamyltryptophan1.541.100.01667磺酰膽堿甘氨酸Sulfolithocholylglycine1.650.870.04868乙丙嗪Ethopropazine1.870.850.027693-甲基二氧吲哚3-methyldioxyindole1.760.780.046703-甲基戊二酸3-methylglutaricacid1.680.820.00271多巴醌Dopaquinone1.520.890.033

2.5 KEGG通路富集分析

利用KEGG數(shù)據(jù)庫對差異代謝物進(jìn)行注釋，發(fā)現(xiàn)14與21日齡乳鴿血清樣本中71種具有顯著差異的代謝物共注釋到29條代謝通路。由表2可知，富集差異代謝物較多且顯著的通路主要有甘油脂代謝、醚脂代謝、糖基磷脂酰肌醇(GPI)-錨定生物合成。

表2 14與21日齡乳鴿血清差異代謝物KEGG通路富集分析Table 2 Enrichment analysis of KEGG pathway in serum of 14-and 21-day-old squabs

3 討 論

代謝組學(xué)是對生物體代謝物進(jìn)行定性定量分析，并尋找代謝物與生理和病理變化相對關(guān)系的研究[12]。按研究的目的，代謝組學(xué)又可分靶向和非靶向，其中非靶向代謝組學(xué)能從整體反映代謝物的變化，全面地挖掘小分子代謝物，有利于發(fā)現(xiàn)新的代謝物和新的代謝通路[13]。利用非靶向代謝組學(xué)技術(shù)對14和21日齡乳鴿血清樣本進(jìn)行分析，總共篩選出71個(gè)顯著差異代謝物，包括類脂類分子(35種)、有機(jī)雜環(huán)化合物(6種)、有機(jī)酸及其衍生物(5種)、苯基丙氨酸和聚酮(5種)、有機(jī)氧化合物(4種)、核苷酸類似物(2種)。

S-腺苷蛋氨酸(S-adenosyl methionine,SAM)是蛋氨酸的活性形式，為機(jī)體內(nèi)重要的甲基供體，參與DNA、RNA、脂質(zhì)和神經(jīng)遞質(zhì)等化合物的甲基化反應(yīng)[14]。SAM在機(jī)體生理功能和生化反應(yīng)中起到不可替代的重要代謝與調(diào)控作用[15]。此外，SAM直接參與多胺的形成，促進(jìn)細(xì)胞的生長和蛋白質(zhì)的合成[16]。蛋白質(zhì)是生長發(fā)育最基本的營養(yǎng)成分之一，本試驗(yàn)中，與14日齡乳鴿相比，21日齡乳鴿血清中SAM含量顯著上調(diào)，這可能表明隨著日齡增長機(jī)體蛋白質(zhì)的合成增加。馮艷等[17]研究指出，SAM可以調(diào)控肌肉發(fā)育，通過促進(jìn)蛋白質(zhì)合成并抑制其降解，使其在體內(nèi)沉積,從而提高畜禽骨骼肌肌肉產(chǎn)量。另有研究表明，飼糧中添加蛋氨酸可以顯著提高乳鴿的胸肌和腿肌的產(chǎn)量[18]，這可能與SAM促進(jìn)肌肉發(fā)育的作用相關(guān)。他人關(guān)于乳鴿生長規(guī)律的研究也發(fā)現(xiàn)，乳鴿在21日齡較14日齡胸肌產(chǎn)量有顯著提高[19]，這與本試驗(yàn)中21日齡乳鴿血清中SAM含量顯著增加相符合。但SAM在乳鴿體內(nèi)的作用方式及機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

肉堿是一種在肝臟、腎臟和大腦中合成的類維生素化合物，是動物脂肪酸代謝的一個(gè)重要因素[20]。已知肉堿最重要的代謝功能是將脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞的線粒體中進(jìn)行脂肪酸氧化[21]。L-棕櫚酰肉堿、硬脂酰肉堿是肉堿的長鏈?；舅嵫苌ァＥc14日齡乳鴿相比，21日齡乳鴿血清L-棕櫚酰肉堿、硬脂酰肉堿的含量顯著增加，這表明乳鴿生長后期脂肪酸氧化增強(qiáng)，從而釋放能量供乳鴿生長發(fā)育利用。

本試驗(yàn)中代謝物KEGG注釋化合物分類最多的是磷脂類，主要有溶血磷脂酰膽堿[20∶4(5Z,8Z,11Z,14Z)]、溶血磷脂酰膽堿(P-18∶0)、磷脂酰膽堿[18∶2(9Z,12Z)/20∶4(8Z,11Z,14Z,17Z)]、溶血磷脂酰膽堿[22∶4(7Z,10Z,13Z,16Z)]、溶血磷脂酰膽堿[18∶2(9Z,12Z)]、磷脂酰乙醇胺[22∶5(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)/22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)]、磷脂酰乙醇胺[15∶0/20∶2(11Z,14Z)]、溶血磷脂酰膽堿(16∶0)。磷脂是構(gòu)成生物膜脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的主要成分，具有抗氧化、刺激細(xì)胞生長、免疫調(diào)節(jié)、促進(jìn)羽毛生長等生理作用[22-23]。在生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，乳鴿在后期生長發(fā)育過程中羽毛生長速度最快。除磷脂酰乙醇胺[15∶0/20∶2(11Z,14Z)]、溶血磷脂酰膽堿(16∶0)外，其余6種代謝物在21日齡乳鴿血清中的豐度均顯著上調(diào)。這可能與乳鴿生長發(fā)育后期代謝生成大量磷脂以滿足羽毛快速生長有關(guān)。綜上所述，乳鴿發(fā)育后期(14～21日齡)血清中S-腺苷蛋氨酸、L-棕櫚酰肉堿、硬脂酰肉堿和磷脂類代謝物質(zhì)發(fā)生了顯著的變化。上述結(jié)果有助于了解乳鴿發(fā)育期生理狀態(tài)的變化，為生產(chǎn)中更好地滿足其營養(yǎng)需要提供參考。

4 結(jié) 論

① 本試驗(yàn)應(yīng)用非靶向代謝組學(xué)方法研究了乳鴿生長發(fā)育期間(14和21日齡)血清中小分子代謝物的變化，共有71種差異代謝物被鑒別出，其中49種顯著上調(diào)，22種顯著下調(diào)，且S-腺苷蛋氨酸、L-棕櫚酰肉堿、硬脂酰肉堿和磷脂類代謝物質(zhì)發(fā)生了顯著的變化。

② 通過代謝通路富集研究發(fā)現(xiàn)，甘油脂代謝、醚脂代謝、糖基磷脂酰肌醇-錨定生物合成等14條代謝通路發(fā)生顯著改變。