參草通脈復(fù)方對慢性心力衰竭大鼠心腎功能的影響研究

禮海，劉曉蕾，王懿，張艷

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是心血管疾病終末期的臨床綜合征，我國約有2 400萬人患病，CHF患病人數(shù)占三級甲等醫(yī)院心內(nèi)科同期住院患者的40%，其中60歲以上CHF患者5年生存率約為35%［1］?！秾?shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》［2］提及CHF年消耗醫(yī)療資金不少于20億人民幣。近年國內(nèi)外學(xué)者對CHF開展了大量研究，多以新藥開發(fā)為主，但藥物不良反應(yīng)仍較突出，尤其腎功能損傷較常見，致使患者依從性欠佳。而心室起搏等手段又因費(fèi)用問題而導(dǎo)致臨床推廣受限。因此，開發(fā)一種療效好、價(jià)格低、不良反應(yīng)少的治療藥物具有廣闊前景。通過近20年的不斷總結(jié)，本研究團(tuán)隊(duì)基于“腎藏精起亟”理論研發(fā)出具有活血化瘀、益氣通絡(luò)作用的參草通脈復(fù)方，其可在減少不良反應(yīng)的同時(shí)達(dá)到治療目的。本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討參草通脈復(fù)方對CHF大鼠心腎功能的影響，以期為該藥的臨床應(yīng)用提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2019年9月至2020年1月，選取60只SPF級12周齡雄性大鼠，體質(zhì)量300～350 g，均由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。飼養(yǎng)條件：室溫24～36 ℃，濕度40%～60%，適應(yīng)性喂養(yǎng)期間自由飲水喂食，每天更換水瓶。敷料每3 d更換1次，并對飼養(yǎng)空間進(jìn)行紫外線消毒。采用隨機(jī)數(shù)字表法將所有大鼠分為空白對照組、假手術(shù)組、模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組、中藥3組，每組8只。本研究經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 主要藥物與儀器 主要藥物：參草通脈復(fù)方（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑制備中心生產(chǎn)，遼藥制Z0901013），組方包括黃芪、丹參、益母草、人參、紅花、三七粉、葶藶子，配伍比例為3∶2∶2∶1∶1∶1∶1；人參養(yǎng)榮湯參照《太平惠民和劑局方》中的相關(guān)組方、用法用量進(jìn)行配伍，包括黃芪、當(dāng)歸、桂枝、（炙）甘草、陳皮、白術(shù)、人參、白芍、熟地黃、五味子、茯苓、遠(yuǎn)志、生姜、大棗，配伍比例為3∶3∶3∶3∶3∶3∶3∶9∶2∶2∶1∶2∶1∶1；左歸飲參照《景岳全書》中的相關(guān)組方、用法用量進(jìn)行配伍，包括熟地黃、山藥、枸杞、（炙）甘草、茯苓、山茱萸，配伍比例為3∶2∶2∶1∶2∶2；福辛普利鈉片（中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H19980197）。主要儀器：MS 2000多媒體化生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)（廣州市龍飛達(dá)科技有限公司生產(chǎn)），SONO S5500彩色多普勒超聲機(jī)（Agilnet 公司生產(chǎn)），全自動(dòng)生化分析儀（貝登醫(yī)療股份有限公司生產(chǎn)）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 模型制備 所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，假手術(shù)組、模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組及中藥3組大鼠禁食不禁水12 h后，予以10%水合氯醛0.5 ml/100 g進(jìn)行腹腔麻醉［3］，而后進(jìn)行氣管插管并迅速連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，設(shè)置呼吸頻率為80次/min，潮氣量為0.7 ml/kg；在左側(cè)第三、四肋間做一長1～2 cm的橫向切口，逐層鈍性分離，暴露心臟，于左冠狀動(dòng)脈前降支起源點(diǎn)3～4 mm處縫線結(jié)扎，其中假手術(shù)組大鼠結(jié)扎5 s后松開；待大鼠心電監(jiān)護(hù)顯示胸前導(dǎo)聯(lián)ST段及T波明顯異常后，將心臟歸于胸腔中，逐層縫合；而后，在大鼠切口處敷注射用青霉素鈉注射液敷料，待大鼠生命體征穩(wěn)定后予以口腔清痰，停用呼吸機(jī)。術(shù)后72 h內(nèi)，給予青霉素鈉注射液30萬U，1次/d，常規(guī)喂養(yǎng)7 d，剔除手術(shù)過程中死亡的大鼠，然后重新選取大鼠進(jìn)行造模，補(bǔ)充到相應(yīng)組中，保證每組大鼠數(shù)量始終為8只。第8天起，模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組、中藥3組大鼠飼料均減少1/3，予以3%腺嘌呤食用油10 ml/kg，并訓(xùn)練其游泳至疲乏，1次/d，檢測大鼠當(dāng)天血肌酐（serum creatinine，Scr）水平，若大鼠術(shù)后第14天Scr水平是第8天檢測值的1.0～1.5倍，則將上述游泳訓(xùn)練改為1次/3 d，共訓(xùn)練28 d。在此期間，空白對照組、假手術(shù)組大鼠均正常喂養(yǎng)。

1.3.2 建模成功標(biāo)準(zhǔn) 多普勒超聲心動(dòng)圖檢查顯示左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）≤60%，Scr水平是造模前的2倍及以上，則提示CHF大鼠模型制備成功［3］。

1.3.3 干預(yù)方法 空白對照組、假手術(shù)組、模型組大鼠均不采用藥物治療，僅常規(guī)予以等容積的灌胃蒸餾水1.5 ml/次，2次/d。西藥組大鼠采用福辛普利鈉片治療，1.2 mg?kg-1?d-1，1次/d，為與中藥1、2、3組大鼠給藥次數(shù)保持一致，本組大鼠第2次以蒸餾水1.5 ml灌胃。中藥1組大鼠采用左歸飲治療，中藥2組大鼠采用人參養(yǎng)榮湯治療，中藥3組大鼠采用參草通脈復(fù)方治療，2次/d，藥物用量均按人鼠劑量換算公式進(jìn)行換算［4］，藥物用量（g/kg）=人的劑量（g）×0.018/動(dòng)物體質(zhì)量（kg）。各組大鼠均持續(xù)干預(yù)28 d。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 心功能指標(biāo) 分別于干預(yù)前、干預(yù)28 d后應(yīng)用多普勒超聲心動(dòng)圖檢測各組大鼠心功能指標(biāo)，包括心率、LVEF、左心室收縮末期容積（left ventricular end-systolic volume，LVESV）、左心室舒張末期容積（left ventricular end diastolic volume，LVEDV），上述指標(biāo)均連續(xù)測量3個(gè)心動(dòng)周期并取平均值。

1.4.2 腎功能指標(biāo) 分別于干預(yù)前后采集大鼠目內(nèi)眥靜脈血，3 000 r/min離心10 min（離心半徑10 cm），取上清液，置于-20 ℃環(huán)境下保存待測。應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、Scr水平，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 七組大鼠干預(yù)前心、腎功能指標(biāo)比較 七組大鼠干預(yù)前心率、LVEF、LVESV、LVEDV及BUN、Scr水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 七組大鼠干預(yù)前心、腎功能指標(biāo)比較（±s，n=8）Table 1 Comparison of indexes of cardiac and renal function before intervention among the seven groups

表1 七組大鼠干預(yù)前心、腎功能指標(biāo)比較（±s，n=8）Table 1 Comparison of indexes of cardiac and renal function before intervention among the seven groups

注：LVEF=左心室射血分?jǐn)?shù)，LVESV=左心室收縮末期容積，LVEDV=左心室舒張末期容積，BUN=血尿素氮，Scr=血肌酐

組別 心率（次/min） LVEF（%） LVESV（ml） LVEDV（ml） BUN（mmol/L） Scr（μmol/L）空白對照組 349.5±24.5 77.58±2.52 0.12±0.03 0.33±0.07 6.08±1.24 31.51±3.83假手術(shù)組 371.6±23.6 58.64±5.16 0.23±0.04 0.58±0.07 9.15±1.54 39.33±4.36模型組 383.7±26.4 43.78±7.15 0.24±0.07 0.64±0.11 32.56±6.18 61.12±4.13西藥組 384.5±24.9 43.72±7.02 0.26±0.06 0.65±0.09 31.86±6.37 61.69±6.23中藥 1 組 383.9±25.7 44.02±6.86 0.25±0.08 0.65±0.1 32.43±6.31 62.58±6.09中藥 2 組 384.2±26.1 43.93±7.07 0.24±0.09 0.66±0.12 32.15±6.08 61.77±5.96中藥 3 組 382.7±25.9 44.13±6.96 0.25±0.07 0.65±0.12 31.98±6.22 62.24±6.37 F值 3.978 63.224 8.454 20.677 78.107 94.260 P值 0.003 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 七組大鼠干預(yù)前后心、腎功能指標(biāo)的差值比較 七組大鼠干預(yù)前后心率、LVEF、LVESV、LVEDV及BUN、Scr水平的差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中中藥3組大鼠干預(yù)前后心率的差值小于假手術(shù)組、模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組；干預(yù)前后LVEF的差值小于空白對照組，但大于假手術(shù)組、模型組、中藥1組、中藥2組；干預(yù)前后LVESV的差值小于假手術(shù)組、模型組、中藥1組、中藥2組；干預(yù)前后LVEDV的差值大于空白對照組，但小于假手術(shù)組、模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組；干預(yù)前后BUN水平的差值大于空白對照組、假手術(shù)組，但小于模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組；干預(yù)前后Scr水平的差值大于空白對照組，但小于模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 七組大鼠干預(yù)前后心、腎功能指標(biāo)的差值比較（±s，n=8）Table 2 Comparison of differential value of cardiac and renal function indexes before and after intervention among the seven groups

表2 七組大鼠干預(yù)前后心、腎功能指標(biāo)的差值比較（±s，n=8）Table 2 Comparison of differential value of cardiac and renal function indexes before and after intervention among the seven groups

注：a表示與中藥3組比較，P＜0.05

組別 心率（次/min） LVEF（%） LVESV（ml） LVEDV（ml） BUN（mmol/L） Scr（μmol/L）空白對照組 345.7±22.6 78.72±2.61a 0.11±0.03 0.31±0.05a 6.12±1.16a 32.08±4.03a假手術(shù)組 381.5±27.5a 61.14±4.42a 0.21±0.08a 0.58±0.09a 8.09±1.72a 38.27±4.14模型組 397.6±31.5a 35.75±7.85a 0.28±0.09a 0.66±0.10a 30.39±7.56a 60.23±5.12a西藥組 362.9±27.7a 64.95±3.27 0.15±0.06 0.53±0.12a 23.07±4.33a 49.39±5.83a中藥 1 組 379.2±28.1a 50.81±3.89a 0.18±0.08a 0.61±0.12a 17.23±3.24a 44.49±5.65a中藥 2 組 364.8±27.4a 54.97±4.37a 0.16±0.07a 0.55±0.10a 23.64±5.38a 48.13±6.24a中藥 3 組 343.7±20.7 65.75±2.64 0.13±0.04 0.43±0.07 12.95±3.58 37.64±5.18 F值 8.586 148.721 11.517 23.515 63.853 49.246 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

臨床治療收縮性心力衰竭多推薦血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI）、β-受體阻滯劑、醛固酮拮抗劑聯(lián)合利尿劑與強(qiáng)心劑等藥物，但較易影響腎小球?yàn)V過率等腎功能指標(biāo)，進(jìn)而導(dǎo)致腎功能惡化。此外，舒張性心力衰竭目前尚無特效藥物。有研究表明，若心排血量明顯減少，腎血流量也會(huì)相應(yīng)減少，因此心腎功能相互作用［5］。前期研究發(fā)現(xiàn)，參草通脈復(fù)方治療CHF具有較好療效［6］。本研究基于“心腎相交”“腎藏精起”理論探討參草通脈復(fù)方對CHF大鼠心腎功能的影響，以尋找治療CHF的新思路。

人參養(yǎng)榮湯具有益氣補(bǔ)血、養(yǎng)血安神的功效，該方是以八珍湯為基礎(chǔ)，可達(dá)到氣、血、神三者共調(diào)之效，但無補(bǔ)腎之能，偏重心肺氣血。而左歸飲與人參養(yǎng)榮湯相反，其重在補(bǔ)腎陰，對于心陽虛無明顯功效。CHF晚期多為心腎兩虛，故兩種方劑在治療上略顯不足。福辛普利鈉能夠改善心室重構(gòu)，降低血壓，且針對老年人及肝腎功能減退患者不需要降低劑量，能夠起到保護(hù)心功能的作用，但無法改善腎功能或治療腎功能損傷等相關(guān)疾病。參草通脈復(fù)方具有活血化瘀、益氣通絡(luò)的功效，組方中的黃芪具有較強(qiáng)的強(qiáng)心作用，能明顯升高血白細(xì)胞計(jì)數(shù)，促進(jìn)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的吞噬及滅菌功能。黃芪甲苷是黃芪中環(huán)黃芪醇型皂苷類的代表性成分，可雙向調(diào)節(jié)血壓，有效增加腎臟血流量；丹參中的主要成分丹參酮具有擴(kuò)張血管、減輕心肌負(fù)荷、提高心腎供血的功效，其抗缺氧、抗氧化作用明顯，可修復(fù)受損的心肌細(xì)胞，進(jìn)而改善心腎功能［7-8］；益母草堿是益母草提取物，小劑量使用即具有明顯的強(qiáng)心作用，可增加冠狀動(dòng)脈血流量，保護(hù)受損心肌，還可改善腎血流動(dòng)力學(xué)，增加腎血流量，因此其在治療急慢性腎衰竭、減輕水腫方面效果明顯［9-10］；人參具有強(qiáng)心、雙向調(diào)節(jié)血壓、增強(qiáng)非特異性免疫功能的功效，其主要活性成分人參皂苷Rg1、Rg3、Rb1可有效抑制近曲小管上皮細(xì)胞增殖及腎間質(zhì)纖維化，調(diào)節(jié)腎小球基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2、膠原蛋白的表達(dá)，減少尿白蛋白排泄，延緩腎小球硬化，進(jìn)而改善腎功能；紅花中的主要成分紅花苷、紅花黃色素能夠增加冠狀動(dòng)脈與腎臟血流量，改善心肌缺血，縮小梗死灶，還可雙向調(diào)節(jié)心率，進(jìn)而改善心腎功能［11-13］；三七粉中的有效成分三七皂苷可通過腎小管上皮細(xì)胞及腎成纖維細(xì)胞而作用于腎間質(zhì)，進(jìn)而抑制腎纖維化，有效清除氧自由基、調(diào)節(jié)免疫功能、改善微循環(huán)，因此其對慢性腎小球腎炎、腎病綜合征及急/慢性腎衰竭等腎臟疾病具有一定療效［8，14-15］；葶藶子的有效成分葶藶苷、糖芥苷具有強(qiáng)心、減慢心率的作用，能夠增加腎小球?yàn)V過率，促進(jìn)腎臟代謝，進(jìn)而保護(hù)腎功能，還可抑制20種真菌，尤其對革蘭陰性菌具有較好的抑制作用［16-17］。上述藥物聯(lián)合應(yīng)用，強(qiáng)心而不增加負(fù)擔(dān)，雙向調(diào)節(jié)血壓，兼顧促進(jìn)代謝，進(jìn)而有效保護(hù)腎臟［18］。

本研究結(jié)果顯示，七組大鼠干預(yù)前心率、LVEF、LVESV、LVEDV及BUN、Scr水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明大鼠CHF模型制備成功。本研究結(jié)果還顯示，中藥3組大鼠干預(yù)前后心率的差值小于假手術(shù)組、模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組；干預(yù)前后LVEF的差值小于空白對照組，但大于假手術(shù)組、模型組、中藥1組、中藥2組；干預(yù)前后LVESV的差值小于假手術(shù)組、模型組、中藥1組、中藥2組；干預(yù)前后LVEDV的差值大于空白對照組，但小于假手術(shù)組、模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組，表明與福辛普利鈉片、左歸飲、人參養(yǎng)榮湯相比，參草通脈復(fù)方對CHF大鼠心功能的改善效果更明顯。此外，中藥3組大鼠干預(yù)前后BUN水平的差值大于空白對照組、假手術(shù)組，但小于模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組；干預(yù)前后Scr水平的差值大于空白對照組，但小于模型組、西藥組、中藥1組、中藥2組，表明與福辛普利鈉片、左歸飲、人參養(yǎng)榮湯相比，參草通脈復(fù)方對CHF大鼠腎功能的改善效果更明顯。有研究表明，參草通脈復(fù)方能夠有效改善CHF大鼠腎功能，甚至改善腎衰竭癥狀［4，19-20］，本研究結(jié)果與之一致。

綜上所述，與福辛普利鈉片、左歸飲、人參養(yǎng)榮湯相比，參草通脈復(fù)方可更有效地改善CHF大鼠的心腎功能。但本研究造模時(shí)間長、觀察指標(biāo)較少，且未觀察大鼠腎臟組織學(xué)改變，今后還需要增加觀察指標(biāo)進(jìn)一步證實(shí)本研究結(jié)論。

作者貢獻(xiàn)：禮海、張艷進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，研究的實(shí)施與可行性分析；劉曉蕾、王懿進(jìn)行數(shù)據(jù)收集、整理、分析；禮海撰寫、修訂論文，進(jìn)行結(jié)果分析與解釋；張艷負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校，并對文章整體負(fù)責(zé)、監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。