細(xì)胞死活的檢測方法舉隅

曹建平

農(nóng)業(yè)上，播種之前需要檢測種子的活力;醫(yī)學(xué)上，為了檢測某一男子的生育能力，需要測定精子的活力;為了檢驗藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷力，需要測定腫瘤細(xì)胞的存活率等等.由此可見，細(xì)胞死活的鑒定在生產(chǎn)生活和醫(yī)學(xué)研究方面具有重要意義.本文簡單介紹幾種檢測細(xì)胞死活的方法，并結(jié)合部分試題進(jìn)行分析.

一、檢測方法舉隅

1.臺盼藍(lán)染色法

臺盼藍(lán)是一種陰離子型染料，它只能透過

受損細(xì)胞或死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜（質(zhì)膜），而正常的活細(xì)胞能加以排除，即死細(xì)胞著色，活細(xì)胞不著色.

2.熒光染色法

熒光素雙醋酸酯（FDA）是一種常用的動植物細(xì)胞的生活力鑒定染料.FDA本身不產(chǎn)生熒光，也無極性，能自由出入細(xì)胞.當(dāng)FDA進(jìn)入活細(xì)胞，被細(xì)胞內(nèi)的脂酶分解，產(chǎn)生有極性的、能發(fā)出熒光的熒光素，熒光素不能自由透過活細(xì)胞膜，積累在細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞產(chǎn)生綠色熒光.

3.美藍(lán)染色法

美藍(lán)是一種無毒染料，氧化型為藍(lán)色，還原型為無色，主要用于檢測酵母細(xì)胞死活.由于活細(xì)胞具有較強的還原能力，能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，因此美藍(lán)染色后活的酵母細(xì)胞無色;而死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，被染成藍(lán)色或淡藍(lán)色.

4.TTC染色法

氯化三苯基四氮唑（TTC）常用于檢測種子的生活力以及哺乳動物組織的缺血梗塞.TTC溶于水中形成無色溶液，細(xì)胞中的脫氫酶可將TTC作為受氫體，使之還原成不溶于水的紅色穩(wěn)定的三苯基甲臢（TTF）. 如果腦組織細(xì)胞或胚種細(xì)胞死亡或生活力衰退，則不能染色或染色較淺.

5.質(zhì)壁分離法

質(zhì)壁分離法主要是檢測成熟的植物細(xì)胞有無活性的方法.因為活細(xì)胞的原生質(zhì)層具有選擇透過性，所以活的成熟的植物細(xì)胞才可發(fā)生質(zhì)壁分離.

6.細(xì)胞質(zhì)流動法

細(xì)胞質(zhì)流動需要消耗細(xì)胞代謝產(chǎn)生的能量，活細(xì)胞才進(jìn)行細(xì)胞代謝，所以活細(xì)胞具有胞質(zhì)環(huán)流現(xiàn)象.

二、經(jīng)典試題賞析

例1 TTC法和紅墨水染色法是檢測種子活力常用方法，下列說法錯誤的是（? ）.

A.在TTC法中，胚被染成紅色的是具有活力的種子

B.紅墨水染色法中，胚不著色或著色很淺的是具有活力的種子

C.這兩種方法在原理上相似，均應(yīng)用了活細(xì)胞的膜具有選擇透透過性

D.在TTC染色法中，被染成紅色較深的種子細(xì)胞呼吸可能較強

解析 由于TTC能被細(xì)胞呼吸產(chǎn)生的＼[H＼]還原成紅色不溶于水的物質(zhì)，胚是種子的主要結(jié)構(gòu)，故胚被染成紅色的是具有活力的種子，A選項正確;紅墨水中的色素不是活細(xì)胞需要的物質(zhì)，如果胚被染色較深，說明胚細(xì)胞死亡;如果胚不著色或著色很淺，說明胚具有活力，B選項正確;兩種染色方法的原理不同，紅墨水利用了細(xì)胞膜的選擇透過性，根據(jù)“TTC染色法”可知，TTC染色的原理是TTC被細(xì)胞呼吸產(chǎn)生的＼[H＼]還原成不溶于水的紅色，利用的是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，C選項錯誤;細(xì)胞呼吸越強，產(chǎn)生的＼[H＼]越多，TTC被還原產(chǎn)生的紅色不溶于水的物質(zhì)越多，D選項正確.

參考答案：C

例2 在進(jìn)行植物體細(xì)胞雜交前，必須先獲得有活力的原生質(zhì)體.測定原生質(zhì)體活力的常用方法之一是熒光素雙醋酸酯（FDA）染色法，其基本原理是FDA本身無熒光，可自由通過細(xì)胞膜，經(jīng)細(xì)胞內(nèi)酯酶分解產(chǎn)生積累在細(xì)胞內(nèi)并能發(fā)出綠色熒光的熒光素.相關(guān)敘述正確的是（? ）.

A.FDA是一種大分子物質(zhì)，通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞

B.熒光素分子能以自由擴(kuò)散的方式通過細(xì)胞膜

C.實驗中配制的FDA溶液是一種低滲溶液

D.綠色熒光的強度與原生質(zhì)體的活力呈正相關(guān)

解析 根據(jù)FDA可自由通過細(xì)胞膜，確定其不是大分子物質(zhì)，A選項錯誤;根據(jù)熒光素積累在細(xì)胞內(nèi)，確定其不能自由通過細(xì)胞膜，B選項錯誤;因為原生質(zhì)體沒有細(xì)胞壁，若為低滲溶液，則原生質(zhì)體會吸水漲破，不能完成實驗，C選項錯誤;原生質(zhì)體的活力越強，酯酶活性越強，產(chǎn)生的熒光素越多，D選項正確.

參考答案：D

例3? 下列有關(guān)不同實驗中細(xì)胞死活的推測，正確的是（? ）.

A.在高倍鏡下觀察黑藻細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)緩慢流動，表明此時細(xì)胞是死細(xì)胞

B.用臺盼藍(lán)染液處理酵母菌，細(xì)胞被染成藍(lán)色，表明酵母細(xì)胞是活細(xì)胞

C.健那綠染液染色后的口腔上皮細(xì)胞，線粒體為藍(lán)綠色，表明細(xì)胞是活細(xì)胞

D.將洋蔥鱗片葉細(xì)胞置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的蔗糖溶液中未發(fā)生質(zhì)壁分離，則確定此細(xì)胞是死細(xì)胞

解析 活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)不停地流動，黑藻的細(xì)胞質(zhì)流動，表明細(xì)胞是活細(xì)胞，流動緩慢可能是溫度太低造成，A選項錯誤;活細(xì)胞的細(xì)胞膜能控制物質(zhì)進(jìn)出，使臺盼藍(lán)不能透過細(xì)胞膜，酵母細(xì)胞被染成藍(lán)色，說明細(xì)胞死亡，B選項錯誤;健那綠染液是專一性

染線粒體的活細(xì)胞染料，可以將線粒體染成藍(lán)綠色，C選項正確;將洋蔥鱗片葉細(xì)胞置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的蔗糖溶液中，細(xì)胞不能發(fā)生質(zhì)壁分離，原因可能是該蔗糖溶液濃度低于細(xì)胞液濃度或細(xì)胞是死細(xì)胞，D選項錯誤.

參考答案：C

（收稿日期：2021-07-28）