IL-7和IL-15在前列腺癌患者血清以及組織中的表達(dá)水平及其臨床意義

雪合熱提·薩塔爾，迪力夏提·馬木提，阿卜杜日斯·阿卜力克木

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)第六附屬醫(yī)院 泌尿外科，烏魯木齊 830054；2.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 泌尿外科，烏魯木齊 830054)

前列腺癌是男性惡性腫瘤相關(guān)死亡的重要原因，慢性炎癥是引起前列腺癌的重要因素。有研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子是炎癥的關(guān)鍵介質(zhì)，在免疫系統(tǒng)與腫瘤的相互作用中起著關(guān)鍵作用[1]。包括IL-7和IL-15在內(nèi)的一組細(xì)胞因子共用一個受體鏈γ，細(xì)胞因子共用受體γ鏈具有調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞發(fā)育的功能，有助于支持CD4+和CD8+T細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)增殖和功能。IL-7在臨床腫瘤學(xué)的Ⅰ/Ⅱ期試驗中有著很好的應(yīng)用效果。雖然IL-15尚未用于臨床試驗，但有研究發(fā)現(xiàn)，IL-15可能在臨床相關(guān)性的惡性腫瘤治療中具有較高潛力[2-3]。鑒于前列腺癌患者血清及組織中IL-7和IL-15蛋白表達(dá)的相關(guān)研究甚少，本研究通過分析IL-7和IL-15在前列腺癌患者血清及組織中表達(dá)的差異，及其與前列腺癌侵襲性的相關(guān)性，探究IL-7和IL-15在前列腺癌發(fā)生及發(fā)展中的潛在作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料研究對象為2019年2月—11月期間就診于新疆醫(yī)科大學(xué)第六附屬醫(yī)院泌尿外科的患者，其中54例前列腺癌患者為研究組，年齡(67.2±3.4)歲；68例前列腺增生患者為正常對照組，年齡(69.7±4.6)歲。所有患者都經(jīng)過病理科確診。以上納入研究的患者均無術(shù)前放療、化療史，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者及其家屬均已簽署知情同意書。

1.2 主要試劑和儀器兔單克隆抗體IL-7(美國Abcam公司，克隆號：BVD10-40F6)，兔單克隆抗體IL-15(美國Abcam公司，克隆號：MA5-23561)，IL-7酶聯(lián)免疫試劑盒、IL-15酶聯(lián)免疫試劑盒(伊萊瑞特生物科技有限公司)，Thermo MultiskanTMGO全波長酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技公司)，徠卡DM3000數(shù)碼顯微鏡(徠卡微系統(tǒng)有限公司)。

1.3 ELISA檢測患者血清中IL-7和IL-15水平嚴(yán)格按照ELISA 試劑盒說明書要求測定2組患者血清中IL-7和IL-15水平，在酶標(biāo)儀上依序測量各孔光密度[D(450 nm)]值。

1.4 免疫組織化學(xué)法染色切片脫蠟，抗原修復(fù)，加稀釋好的IL-7和IL-15抗體(IL-7為1∶100，IL-15為1∶100)，加適量生物素標(biāo)記的二抗工作液，顯色劑顯色，自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察染色結(jié)果。前列腺組織標(biāo)本中細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)淡黃色或黃色顆粒狀著色為陽性表達(dá)，采用IPP 6.0 軟件在同等條件下檢測每張組織切片中的IL-7和IL-15表達(dá)的積分D值。

2 結(jié)果

2.1 2組患者血清IL-7和IL-15水平的比較與前列腺增生組比較，前列腺癌組患者血清IL-7和IL-15水平顯著升高(P<0.05，表1)。

表1 2組患者血清IL-7和IL-15水平的比較

2.2 2組患者組織中IL-7和IL-15蛋白陽性表達(dá)率的比較在前列腺癌和前列腺增生患者組織中，IL-7蛋白陽性表達(dá)率分別為72.16%、38.23%，IL-15蛋白陽性表達(dá)率分別為62.96%、35.29%，二者2個指標(biāo)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，圖1、表2)。

注：A. 前列腺增生組織中IL-7的表達(dá)；B.前列腺增生組織中IL-15的表達(dá)；C. 前列腺癌組織中IL-7的表達(dá)；D. 前列腺癌組織中IL-15的表達(dá)。圖1 免疫組織化學(xué)染色分析前列腺癌和前列腺增生患者組織中IL-7和IL-15的表達(dá) (×200)

表2 2組患者組織中IL-7和IL-15表達(dá)水平的比較

2.3 前列腺癌組織標(biāo)本中IL-7和IL-15表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系對54例前列腺癌組織標(biāo)本中IL-7和IL-15表達(dá)水平與臨床病理特征之間的關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，IL-7和IL-15表達(dá)水平與Gleason評分、臨床分期、前列腺特異性抗原(prostate specific antigen，PSA)水平密切相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(表3)。

表3 前列腺癌組織標(biāo)本中IL-7和IL-15表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系

2.4 前列腺癌組織中IL-7與IL-15的相關(guān)性經(jīng)Spearman 相關(guān)分析，在前列腺癌組織中，IL-7和IL-15表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.415，P<0.01)。

3 討論

近年來，大量組織病理學(xué)、流行病學(xué)和分子病理學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，慢性炎癥可能在前列腺癌的發(fā)生中起重要作用[1]。IL是炎癥的重要介質(zhì)，在前列腺癌患者中，許多炎癥介質(zhì)表達(dá)上調(diào)。IL-2、IL-15和IL-7是調(diào)節(jié)淋巴穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵細(xì)胞因子[2]，它們獨(dú)特的生理功能可歸因于專有細(xì)胞因子受體鏈、細(xì)胞因子或其受體鏈的差異表達(dá)模式在不同生理環(huán)境中產(chǎn)生的信號所啟動的不同信號通路[3-4]。然而，這些研究對象大多數(shù)是晚期前列腺癌患者，在這樣的情況下，無法很好地解釋腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移及擴(kuò)散的內(nèi)在機(jī)制，如骨溶解，可能與誘導(dǎo)IL產(chǎn)生有關(guān)[5-8]。此外，腫瘤內(nèi)缺血和相關(guān)壞死引發(fā)的無菌炎癥也可以促進(jìn)IL的釋放。因此，晚期腫瘤患者提供的數(shù)據(jù)可信度不高。為探究免疫炎癥在前列腺癌早期所起的作用，本研究分別從局部(前列腺組織)和全身(血清)水平評估前列腺癌患者中IL的表達(dá)，并與前列腺增生組織進(jìn)行了比較。研究結(jié)果顯示，與前列腺增生組織相比，前列腺癌組織中促炎癥因子IL-7和IL-15的表達(dá)頻率及程度較高。

已知IL-15可由多種細(xì)胞產(chǎn)生，包括活化的巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞。IL-7是由多種基質(zhì)細(xì)胞和不同的上皮細(xì)胞(包括胸腺和腸道)產(chǎn)生的。最近，在正常前列腺上皮細(xì)胞中檢測到了IL-7的產(chǎn)生，但在轉(zhuǎn)移的前列腺上皮細(xì)胞中沒有發(fā)現(xiàn)[9]。IL-15通常由髓系活化抗原提呈細(xì)胞產(chǎn)生，包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DC[10]。然而，IL-15也被發(fā)現(xiàn)在多種其他類型細(xì)胞中表達(dá)，包括基質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞[4]。炎性因子(IL-6、IL-7和IL-15等)促進(jìn)前列腺癌患者中蛋白質(zhì)生成的機(jī)制尚不清楚。不同的微生物，包括病毒和細(xì)菌也與前列腺癌的發(fā)生有關(guān)[11]。事實上，它們的存在可能導(dǎo)致慢性炎癥。細(xì)胞死亡可能反過來激活先天免疫系統(tǒng)，由此引發(fā)的固有免疫細(xì)胞產(chǎn)生的可溶性因子，包括IL-6、IL-7和IL-15被認(rèn)為可以促進(jìn)前列腺癌的發(fā)生[12]。

有研究發(fā)現(xiàn)，IL-7通過腫瘤細(xì)胞促進(jìn)促血管生成因子的產(chǎn)生和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，IL-15也被證明能刺激“體內(nèi)”血管生成[13]。本研究結(jié)果顯示，IL-7和IL-15在前列腺癌組織中的表達(dá)水平明顯高于前列腺增生組織(P<0.05)，IL-7和IL-15的表達(dá)與臨床病理特征顯著相關(guān)(P<0.05)，且IL-7和IL-15的表達(dá)呈正相關(guān)。由此推測，IL-7和IL-15在前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程中可能有一定程度的協(xié)同作用。因此，單獨(dú)或聯(lián)合檢測前列腺癌患者血清IL-7和IL-15水平，可能有助于前列腺癌患者的療效判斷和預(yù)后觀察，這尚待進(jìn)一步研究。