綜述蜂毒的應(yīng)用

彭德粥，張真，馬振剛

（重慶市媒介昆蟲重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶市動(dòng)物生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶師范大學(xué)，重慶，401331）

蜂毒是工蜂在防御其他動(dòng)物對(duì)本身或是蜂巢進(jìn)攻時(shí)刺向敵害從蜇針排出的透明液體，分泌場(chǎng)所是毒腺和副毒腺，儲(chǔ)存于毒囊。天然的蜂毒具有芳香氣味、味苦，酸性。在室溫下很快干燥成黃褐色粉末，易溶于酸和水，不溶于乙醇?？梢酝ㄟ^(guò)DEAE-Sephadex A50 層析柱分離蜜蜂蜂毒得到有效成分[1]。

1 蜂毒的應(yīng)用概況

最早的蜂毒療法可以追溯到遠(yuǎn)古時(shí)代，早期的古人類在野外狩獵時(shí)就會(huì)被野蜂蜇傷。通過(guò)對(duì)大自然的認(rèn)識(shí)、學(xué)習(xí)和人類的不斷成長(zhǎng)，人類也逐漸意識(shí)到了蜜蜂的蜂毒能夠治療諸多疾病。在明朝就有書籍《物理小識(shí)》記載了關(guān)于“毒針”的制作方法，并且有文物記載在古埃及、古羅馬、古印度和沙俄時(shí)代均有用蜂毒治療風(fēng)濕病和關(guān)節(jié)炎的實(shí)例[2]。隨著現(xiàn)代生命科學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，很多科學(xué)家對(duì)其進(jìn)行了多方面的深入研究，而今蜂毒更多的應(yīng)用體現(xiàn)在醫(yī)學(xué)臨床，同時(shí)也有美妝和農(nóng)業(yè)的相關(guān)方面的應(yīng)用。

2 蜂毒的主要活性成分

2.1 磷脂酶A2 （Phospholipase A2,PLA2）

磷酸酯A2 是蜂毒的過(guò)敏原之一，是約占蜂毒總干重的8%～>12%的天然磷脂催化酶[3]。20 世紀(jì)50 年代，PLA2 被Kuchler 等第一次在意大利蜜蜂蜂毒中發(fā)現(xiàn)[3]。因其能夠在蜂毒溶血肽存在情況下讓紅細(xì)胞溶解，又稱“間接的溶血毒素”[4]。

2.2 蜂毒溶血肽（Melittin）

蜂毒溶血肽與蜂毒肽是同一種物質(zhì)，是蜂毒中主要的多肽，占蜂毒干重較多的一種活性成分，約占蜂毒干重的50%。它的分子生物學(xué)機(jī)理有兩個(gè)方面： （1） 膜裂解作用； （2）作用于蛋白[5]。1972 年Kindas-Mugge[6]等就利用提取的意大利蜜蜂毒腺總mRNA 并將其注入青蛙的卵母細(xì)胞中這一方法順利合成了蜂毒肽的前體蛋白（promelittin）。

目前蜂毒肽的分離純化主要是應(yīng)用色譜原理，過(guò)葡聚糖凝膠柱結(jié)合離子交換柱洗脫。隨著科研人員的不斷研究改進(jìn)，現(xiàn)在純化過(guò)程簡(jiǎn)單易操作且純度和產(chǎn)量也有了大幅度的提高[7]。

2.3 蜂毒明肽（Apamin）

蜂毒明肽占蜂毒干重的2%左右，是蜂毒活性成分中次要的多肽，是一種很強(qiáng)的神經(jīng)毒素。20 世紀(jì)末Gmachl 和Kreil 通過(guò)克隆等技術(shù)建立了西方蜜蜂工蜂毒腺的cDNA 文庫(kù)，并且得到了由46 個(gè)氨基酸殘基組成的前明肽的cDNA 序列[8]。

2.4 肥大細(xì)胞脫粒肽（Mast cell degranulating peptide，MCDP）

肥大細(xì)胞脫粒肽（又稱肽401） 是占蜂毒總干重的1%左右的重要組分。其與肥大細(xì)胞的受體結(jié)合從而促使肥大細(xì)胞活化后釋放組胺和炎性物質(zhì)。可以從cDNA 文庫(kù)中獲取MCDP原基因的cDNA 序列。

2.5 透明質(zhì)酸酶（Hyaluronidase，Hya）

透明質(zhì)酸酶無(wú)直接毒性，是蜂毒的主要過(guò)敏原之一。因其能夠協(xié)助蜂毒進(jìn)入動(dòng)物組織內(nèi)滲透和擴(kuò)散，又被稱為蜂毒的“擴(kuò)散因子”[9]。Gmachl 和Kreil 通過(guò)克隆和測(cè)定編碼基因，獲得了含有編碼Hya 完整的基因序列[8]。

除了上述的具有代表性的活性酶類和多肽物質(zhì)，蜂毒中還含有具有靜和降壓等作用的鎮(zhèn)靜肽和如多馬胺和組織胺等多種生物胺類。

3 蜂毒的應(yīng)用

3.1 蜂毒在醫(yī)藥和臨床上的應(yīng)用

蜂毒療法在古籍就有詳細(xì)的記載，用帶有蜂毒的蜜蜂蜇刺患者的皮膚從而達(dá)到治療的效果。隨著現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展，蜂毒注射液是一種典型的治療手段，它既保留了蜂毒的有效成分又降低了有害成分對(duì)身體的不良反應(yīng)[10]。

3.1.1 抗菌作用

潘凌子[11]等通過(guò)倍比稀釋法和牛津杯法表明了蜂毒溶血肽對(duì)細(xì)菌和真菌有很強(qiáng)的殺傷能力，并且闡明了其抑菌效果與溫度和pH值相關(guān)。蜂毒肽的N 端（主要為疏水區(qū)域）和C 端（主要為親水區(qū)域） 兩者能夠形成兩親性的α- 螺旋結(jié)構(gòu)從而破壞細(xì)菌的生物膜結(jié)構(gòu)，進(jìn)而造成內(nèi)容物漏出殺死微生物。有研究表明適當(dāng)降低N 端疏水區(qū)疏水氨基酸的疏水性可以提高抗菌作用同時(shí)還可降低其溶血作用[12]。

3.1.2 抗腫瘤

近年來(lái)，有研究表明蜂毒抗腫瘤的主要機(jī)制如下： （1） 增加瘤細(xì)胞放療敏感性；（2） 抑制瘤細(xì)胞血管生成； （3） 直接殺傷腫瘤細(xì)胞； （4） 誘導(dǎo)瘤細(xì)胞凋亡； （5） 增強(qiáng)免疫[13]。目前Melittin 已經(jīng)被證實(shí)了能夠誘導(dǎo)眾多癌細(xì)胞系的凋亡，同時(shí)它還影響著癌細(xì)胞的增殖、壞死和癌細(xì)胞的遷移、轉(zhuǎn)化以及侵害，其主要是通過(guò)阻斷金屬激酶的啟動(dòng)子而抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲。蜂毒被認(rèn)為是天然免疫系統(tǒng)的激動(dòng)劑，促進(jìn)腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的啟動(dòng)和聚集，產(chǎn)生針對(duì)腫瘤細(xì)胞相關(guān)抗原的反應(yīng)就需要先天免疫的激活，從而驅(qū)動(dòng)了Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生。近期就報(bào)道了一個(gè)患難治性的脂肪肉瘤的病人通過(guò)蜂毒的配合治療最終得到了有效控制，且在16 個(gè)月后復(fù)查未發(fā)現(xiàn)有復(fù)發(fā)現(xiàn)象[14]。

3.1.3 治療風(fēng)濕病

臨床研究表明蜂毒中的多肽活性分子能夠改變血管的通透性、減緩白細(xì)胞的遷移以及阻礙前列腺E2 的合成，臨床上常用來(lái)治療風(fēng)濕病[2]。

3.1.4 治療高血壓

蜂毒中的鎮(zhèn)靜肽具有鎮(zhèn)靜和降壓等藥理作用，同時(shí)PLA2 也具有降壓的作用。據(jù)報(bào)道PLA2 一般應(yīng)用于臨床治療癥狀性的高血壓和高血壓疾病，其主要原因在于組織胺的釋放改變了外周的阻力[15]。

3.1.5 預(yù)防人的HIV 感染

用以毒攻毒的方法可以預(yù)防HIV 病毒的感染。蜂毒顆?？衫卫蔚毓潭ㄔ贖IV 病毒的蛋白質(zhì)外殼上并釋放Melittin 在其保護(hù)性外殼上刺穿缺口，這樣就可以大大減少病毒的數(shù)量[16]。

3.1.6 緩解阿爾茨海默病

有研究人員在對(duì)小鼠的認(rèn)知功能的研究中發(fā)現(xiàn)蜂毒明肽能夠顯著地提高阿爾茨海默病小鼠的認(rèn)知能力。實(shí)驗(yàn)中先通過(guò)給小鼠注射藥物Aβ25－35 從而構(gòu)建AD 模型小鼠，兩周之后再向AD 模型小鼠體內(nèi)注射不同劑量的蜂毒明肽，連續(xù)五天。結(jié)果表明：可能由于Aβ 表達(dá)量的減少和ImAHP 含量的降低，蜂毒明肽對(duì)Aβ25－35 構(gòu)建的患有阿爾茨海默病的小鼠具有保護(hù)作用，所以蜂毒明肽在未來(lái)可能有望用于治療人類的阿爾茨海默病[17-18]。

3.1.7 用于治療其他疾病

蜂毒除了用于上述疾病的治療外，臨床試驗(yàn)表明蜂毒還可用于抗輻射和治療心血管疾病、支氣管哮喘、乙型病毒性肝炎、紅斑狼瘡、肩周炎、乳腺增生和帶狀皰疹等多種疾病，值得臨床的大力推廣應(yīng)用[19-26]。

3.2 蜂毒的美容作用

隨著許多蜂產(chǎn)品被用于美妝行業(yè)，蜂毒的美容效果也逐漸受到了人們和美妝行業(yè)開發(fā)商的重視。蜂毒的美容作用主要有以下幾個(gè)方面。

（1） 對(duì)痤瘡的療效：蜂毒可有效地改善患者面部黑頭粉刺和閉口粉刺等癥狀，主要是通過(guò)對(duì)皮膚表面的細(xì)菌進(jìn)行抑制生長(zhǎng)而實(shí)現(xiàn)的。

（2） 除皺紋作用：用蜂毒乳液涂抹于人的臉上，可以有效地改善面部皺紋面積大、數(shù)量多等問(wèn)題。

（3） 防曬作用：降低由于紫外線引發(fā)的一些蛋白酶的表達(dá)，還能促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞的損傷修復(fù)。

（4） 美白作用：蜂毒對(duì)黑色素瘤的生成和酪氨酸活性及相關(guān)蛋白表達(dá)起抑制作用[27-28]。

3.3 蜂毒在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用

王宏亮[29]通過(guò)用不同濃度的蜂毒肽對(duì)玉米幼苗進(jìn)行噴灑，發(fā)現(xiàn)了蜂毒肽不僅對(duì)玉米的病原微生物有著抑制和殺害作用，還能夠有效地提高玉米的相應(yīng)指標(biāo)。如顯著提高了葉綠素、可溶性糖和蛋白的含量等，還可啟動(dòng)多種防御酶的活性，增強(qiáng)植株的抗病能力。若將蜂毒肽基因通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)入到植物體內(nèi)得到轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物，此類轉(zhuǎn)基因植株不僅抗菌抗病還能夠提高一定的作物產(chǎn)量[4]。所以，對(duì)于開發(fā)并利用蜂毒肽作為生物農(nóng)藥具有較大意義。

4 展望

蜂毒作為一種應(yīng)用廣泛的生物素，一方面對(duì)多種疾病有很好的療效，但是由于蜂毒的有效成分提純的工藝還不夠完善和成熟，對(duì)其應(yīng)用研究、開發(fā)和利用還不夠深入，實(shí)際上運(yùn)用于臨床和制藥的情況仍然還是占少數(shù)；另一方面由于其主要成分具有刺激性，蜂毒能給人們帶來(lái)健康的同時(shí)也帶來(lái)了不良反應(yīng)等，這些問(wèn)題還有待解決。為了能夠更多更好地為臨床服務(wù)，可以在其適用范圍內(nèi)進(jìn)行正確合理地開發(fā)。我國(guó)擁有非常豐富的蜜蜂資源，能夠給蜂毒的正確開發(fā)利用提供相當(dāng)廣闊的前景，隨著蜂毒研究和開發(fā)的深入，相信蜂毒能夠安全有效地造福人類社會(huì)。