豬繁殖與呼吸綜合征的研究進(jìn)展及防控措施

張哲瑋 ，貝為成

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430070； 2.湖北洪山實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430070；3.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430070； 4.廣西揚(yáng)翔農(nóng)牧有限責(zé)任公司，廣西 貴港 537100； 5.生豬健康養(yǎng)殖協(xié)同創(chuàng)新中心，湖北 武漢 430070）

1 豬繁殖與呼吸綜合征概述

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS），也叫“豬藍(lán)耳病（Blue-eared pig disease）”。該病以母豬發(fā)情和繁殖障礙、新生仔豬高死亡率、各年齡段豬呼吸困難為主要特征[1]。1987年，美國最早發(fā)現(xiàn)該病，歐洲地區(qū)在1990年也報(bào)道存在該病，5年后我國學(xué)者郭寶清通過收集豬場(chǎng)的流產(chǎn)胎兒，并從中分離出4株毒株，研究發(fā)現(xiàn)其與經(jīng)典美洲型毒株十分相似，證實(shí)了該病在我國的發(fā)生。高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（HP-PRRSV）于2006年在我國突然暴發(fā)，對(duì)我國養(yǎng)豬業(yè)造成慘痛的經(jīng)濟(jì)損失，該病的主要特點(diǎn)為發(fā)病率和死亡率極高[2]。2012年起，PRRSV NADC30-like毒株開始在我國廣泛流行，目前已然成為國內(nèi)PRRSV流行的優(yōu)勢(shì)毒株[3]。迄今為止，PRRS已給全球養(yǎng)豬業(yè)造成慘痛的經(jīng)濟(jì)損失。

PRRSV是一種單股、正鏈、不分節(jié)段的RNA病毒，外有囊膜包裹[4]，基因組全長(zhǎng)為15 kb，編碼10個(gè)開放閱讀框（ORF）[5]。由于病毒基因組的不同，可將PRRSV劃分為2種基因型：PRRSV I型也叫歐洲型和PRRSV II型也叫美洲型，這2種基因型的核苷酸序列存在差異，其同源性只有50%～60%[6]。目前，這2種基因型均呈世界性分布[7]，其中在我國流行的為美洲型病毒?，F(xiàn)如今，全球所有養(yǎng)豬國家?guī)缀醵加蠵RRSV分布，國際獸疫局（OIE）已將其列為B類傳染病，我國將其列為二類動(dòng)物疫病，將HP-PRRSV列為一類動(dòng)物疫病。PRRS是一種高度接觸性傳染病，一般以地方流行為主，且于冬、春季節(jié)多發(fā)。PRRSV的唯一自然宿主是豬，各個(gè)品種、年齡段和性別的豬均可能感染，該病毒感染會(huì)引起妊娠母豬發(fā)熱流產(chǎn)、公豬繁殖障礙、新生仔豬高死亡率以及各年齡段豬呼吸功能障礙。感染病毒的豬可通過糞污、鼻液、唾液、乳汁、胎衣、胎兒、精液向外界不斷排毒，且排毒周期很長(zhǎng)[8]。因此，造成PRRSV蔓延的傳染源眾多，發(fā)病豬、康復(fù)豬、耐過豬均可成為PRRSV傳染源。目前，隨著規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的建立以及養(yǎng)殖者愈發(fā)科學(xué)、規(guī)范化的管理防控意識(shí)，PRRSV主要以散發(fā)流行為主，不易引起大規(guī)模的暴發(fā)，但在我國大部分養(yǎng)豬場(chǎng)仍然有該病毒存在，且主要以HP-PRRSV為主，這導(dǎo)致許多養(yǎng)豬場(chǎng)普遍存在PRRSV隱性感染或亞臨床感染，影響豬場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益，且一旦外界條件不利或并存繼發(fā)感染時(shí)，極易引起PRRSV的急性暴發(fā)，此時(shí)緊急進(jìn)行治療或者免疫，往往只是亡羊補(bǔ)牢，為時(shí)已晚，豬場(chǎng)將蒙受嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。隨著2012年P(guān)RRSV NADC30-like毒株在我國的發(fā)現(xiàn)，我國國內(nèi)已經(jīng)存在多種毒株，多種基因型，這大大增加了PRRSV流行的復(fù)雜性，也將PRRS的防控難度提高到了新的等級(jí)。

2 防控措施

目前，PRRS已成為全球養(yǎng)豬業(yè)面臨一大困擾，而我國作為養(yǎng)豬大國，每年因其造成的經(jīng)濟(jì)損失慘痛。然而，現(xiàn)階段依然沒有理想的治療手段，只能通過運(yùn)用科學(xué)、合理的疫苗免疫加上生物安全、環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)、管理等綜合防控措施來減輕PRRSV的感染與傳播。但疫苗免疫還存在著諸多問題，針對(duì)PRRS的有效藥物仍未問世，所以有關(guān)PRRS的防控一直以來都是研究的熱點(diǎn)。

2.1 疫苗免疫

2.1.1 PRRSV滅活疫苗

滅活疫苗是指細(xì)菌或病毒經(jīng)大量培養(yǎng)，通過物理或化學(xué)方法將其滅活，添加佐劑后制備的疫苗，操作簡(jiǎn)便，保護(hù)力較好。自PRRSV被發(fā)現(xiàn)以來，商品化的PRRSV滅活疫苗得到大量應(yīng)用，我國和美洲地區(qū)國家主要應(yīng)用ReproCyc? PRRSPLE、Ingelvac PRRS?MLV、Ingelvac PRRSATP?和Fostera?PRRS來防范PRRSV-II型的發(fā)生[9]。目前我國常用的PRRSV滅活疫苗除上述之外，還有CH-1a株滅活疫苗，主要是由哈爾濱維科等生產(chǎn)的針對(duì)經(jīng)典型PRRSV的國內(nèi)唯一上市的滅活疫苗，以及由農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心分離的HP-PRRSV NVDC-JXA1株制備成的滅活疫苗等[10]。滅活疫苗的缺點(diǎn)極為明顯，單次免疫劑量大、免疫次數(shù)多和免疫產(chǎn)生期長(zhǎng)，不適宜用于仔豬免疫。然而，豬場(chǎng)PRRSV難以根除的一個(gè)重要原因就是仔豬和架子豬帶毒。故單使用滅活疫苗無法控制與清除PRRSV的流行。

2.1.2 PRRSV弱毒疫苗

弱毒疫苗也稱為減毒活疫苗，指用自然篩選或人工致弱的弱毒株，經(jīng)體外培養(yǎng)后制備的一種活疫苗。2006年，我國暴發(fā)了HP-PRRSV，由于造成損傷慘痛，國家將其列入強(qiáng)制免疫范疇，這將PRRSV的疫苗研制推向了高潮，PRRSV商品化弱毒疫苗CH-IR株、R98株相繼投 放，隨 后JXAl-R、HUN4-F112、TJM-F92等弱毒疫苗相繼問世，截止到目前，僅國內(nèi)弱毒疫苗的種類就多達(dá)7種[11]。然而，隨著PRRSV疫苗的亂用、濫用，致使PRRS的防控不僅沒有得到改善，反而出現(xiàn)免疫豬群不穩(wěn)定現(xiàn)象增多以及疫苗毒株毒力返強(qiáng)的情況[12]，與此同時(shí)，弱毒疫苗的廣泛使用還增加了PRRSV基因組的發(fā)生變異以及野毒與疫苗毒重組的可能性[13]。2012年以來暴發(fā)的PRRSV NADC30-like毒株與美國NADC30毒株高度同源，且有研究表明該毒株極易與其他毒株發(fā)生重組[14]，這大大增加了PRRS的防控難度。

2.1.3 PRRSV基因工程疫苗

近些年，大量國內(nèi)外學(xué)者開始著手于有關(guān)PRRSV基因工程疫苗的研究。基因工程疫苗指把人工合成的遺傳物質(zhì)通過DNA重組生物技術(shù)定向地插入酵母菌、細(xì)菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，使之充分表達(dá)后經(jīng)純化制成的疫苗，主要包括以下幾種：DNA疫苗、活病毒載體疫苗、基因缺失疫苗、亞單位疫苗。DNA疫苗也叫核酸疫苗，是一種將與真核表達(dá)載體重組的編碼某種病原微生物攜帶的特定抗原的外源基因，直接導(dǎo)入動(dòng)物機(jī)體刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而獲得相應(yīng)免疫保護(hù)力的方法。已有研究表明DNA疫苗不僅能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，還能夠有效產(chǎn)生細(xì)胞免疫[15]。國內(nèi)學(xué)者周丼祥等的研究表明，使用滅活疫苗免疫機(jī)體產(chǎn)生的抗體水平明顯高于DNA疫苗[16]。DNA疫苗發(fā)展?jié)摿艽螅湓谏扯拘?、自身免疫病以及環(huán)境安全方面存在隱患。目前，以甲病毒復(fù)制子為基礎(chǔ)發(fā)展起來的一種安全、高效、針對(duì)性極強(qiáng)的“自殺性”DNA疫苗逐漸興起，這為PRRS新型DNA疫苗的研制提供了方向?；畈《据d體疫苗是利用基因工程技術(shù)將PRRSV重要免疫原性基因與異源病毒蛋白重組結(jié)合所制成的一種疫苗，其誘導(dǎo)的免疫保護(hù)力持久。目前，關(guān)于以腺病毒、皰疹病毒、痘病毒等為表達(dá)載體的PRRSV活載體疫苗已屢見不鮮,也有關(guān)于將PRRSV作為或病毒載體的研究。仇玉等將PRRSV M蛋白、GP5蛋白和GP5-M融合蛋白重組到雞痘病毒中表達(dá)，動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明該方法得到的GP5-M融合蛋白對(duì)能刺激機(jī)體產(chǎn)生的體液免疫和細(xì)胞免疫水平明顯高于其他兩組蛋白[17]。Tian D等將豬流感病毒（SIV）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）的抗原基因重組到PRRSV（DS722）株，進(jìn)而制備成多組分活載體疫苗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該疫苗具有免疫保護(hù)力[18]。近年來，隨著生物信息學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，活病毒載體疫苗發(fā)展很快，雖存在很多未知，但活病毒載體疫苗在PRRSV疫苗研究中仍具有巨大潛力等待挖掘?；蛉笔б呙缡侵竿ㄟ^基因工程技術(shù)將強(qiáng)毒株的重要毒力基因缺失或者突變，致使其變?yōu)槿醵局?，該方法能夠保證疫苗具有較為完整的免疫原性，且能夠區(qū)分疫苗毒和野毒感染，易于鑒別診斷?，F(xiàn)在已上市的最成功的基因缺失疫苗是gE基因缺失的豬偽狂犬病毒（PRV）疫苗，但PRRSV基因缺失疫苗的發(fā)展卻步履維艱。Hu P等人的研究證實(shí)，缺失掉日本乙型腦炎病毒（JEV）DNA復(fù)制子，將PRRSV GP5/M嵌合到缺失位置開發(fā)出的疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的免疫反應(yīng)良好[19]。但基因缺失疫苗最大的問題就是安全性的問題，疫苗突變返強(qiáng)現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，但隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，相信PRRSV基因缺失疫苗的研制會(huì)進(jìn)一步發(fā)展。亞單位疫苗又叫組分疫苗，是一種將細(xì)菌或病毒保護(hù)性抗原導(dǎo)入受體菌或細(xì)胞高效表達(dá)后與佐劑混勻制成的疫苗，安全穩(wěn)定性較高，但免疫保護(hù)力一般。D.J.Plana等證實(shí)PRRSV GP3和GP5蛋白能提供良好保護(hù)力，可作為PRRSV重組亞單位疫苗的候選基因[20]。劉義等利用原核表達(dá)技術(shù)，大量制備PRRSV N蛋白，并將其制備成亞單位疫苗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)N蛋白能提供免疫保護(hù)但效果不佳[21]。亞單位疫苗的免疫力持續(xù)時(shí)間較短，且使用時(shí)必須搭配佐劑使用才有較好效果，故選擇合適的疫苗佐劑尤為關(guān)鍵。Peng J等通過對(duì)比4種不同的疫苗佐劑，結(jié)果顯示黃芪/芽孢桿菌佐劑對(duì)疫苗有免疫增強(qiáng)的作用，在后續(xù)的研究中，他又證實(shí)了泰山馬尾松花粉多糖天然佐劑（TPPPS）能夠使得PRRSV亞單位疫苗引起的免疫力增強(qiáng)[22]。大量的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)很多細(xì)胞因子都有潛力成為亞單位疫苗的佐劑，因此篩選最佳的亞單位疫苗佐劑將是后續(xù)研究的熱點(diǎn)。

2.2 綜合防控措施

2.2.1 構(gòu)建完善的豬場(chǎng)生物安全體系

首先，要提高防控意識(shí)。豬場(chǎng)工作人員應(yīng)充分認(rèn)識(shí)到PRRSV的危害巨大，以及通過建立完善的生物安全體系防控傳染性疾病的重要意義。PRRSV可以經(jīng)多種傳播途徑感染，包括：糞污、鼻腔分泌物、唾液、血液、精液、乳汁、流產(chǎn)胎兒、胎衣和被污染的水源、飼料、器械用具以及攜帶有PRRSV的場(chǎng)內(nèi)外工作人員等。因此，豬場(chǎng)應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行消毒和隔離工作。選擇脂溶性消毒劑，對(duì)豬圈進(jìn)行徹底的清潔與消毒，夏季高溫，應(yīng)相應(yīng)增加消毒次數(shù)，適當(dāng)增加藥量以保證消毒效果[23]，定期對(duì)糞便進(jìn)行處理并消毒。對(duì)入場(chǎng)的所有人員、車輛、物資等必須經(jīng)過嚴(yán)格的清洗消毒、隔離程序。要確立明確的臟區(qū)和凈區(qū)，存在污染風(fēng)險(xiǎn)或風(fēng)險(xiǎn)較大的區(qū)域?yàn)榕K區(qū)，已清潔無污染風(fēng)險(xiǎn)或污染風(fēng)險(xiǎn)較小的區(qū)域?yàn)閮魠^(qū)，PRRS陽性豬場(chǎng)更應(yīng)注意PRRS陰性豬群和陽性豬群間的有效距離，并做好嚴(yán)格消毒與預(yù)防措施。要加強(qiáng)工作人員的生物安全培訓(xùn)，做到每個(gè)人自覺遵守生物安全相關(guān)規(guī)定，積極執(zhí)行相關(guān)措施。例如，工作人員應(yīng)減少在場(chǎng)內(nèi)的流動(dòng)，需要在不同生產(chǎn)區(qū)域走動(dòng)時(shí)，應(yīng)根據(jù)情況嚴(yán)格消毒，注射用針頭應(yīng)堅(jiān)持更換，對(duì)注射部位要及時(shí)消毒，對(duì)豬群進(jìn)行疫苗免疫時(shí)，要遵從注射器針頭“一針一頭豬”的原則，避免引發(fā)感染。此外，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)豬群的飼養(yǎng)管理，嚴(yán)把飼料關(guān)等。適宜的豬舍溫度、合理的飼養(yǎng)密度、良好的通風(fēng)、采光環(huán)境、均衡的營(yíng)養(yǎng)、適當(dāng)增加維生素含量都有利于提高豬群的免疫力。其次，要建立完善的豬場(chǎng)內(nèi)外生物安全體系。豬場(chǎng)的地理位置應(yīng)遠(yuǎn)離居民區(qū)，且與其他養(yǎng)殖場(chǎng)或屠宰場(chǎng)保持2 km以上的有效距離，對(duì)外來的人員、物資與車輛要執(zhí)行嚴(yán)格的入場(chǎng)程序，配置本場(chǎng)內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)車，避免外車入內(nèi)。還應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)化洗消中心，配置專業(yè)人員對(duì)車輛進(jìn)行清潔、消毒以及徹底的烘干。明確臟區(qū)和凈區(qū)，凈道和污道，正常情況下應(yīng)保持從凈區(qū)到臟區(qū)，凈道到污道的單向流動(dòng)，情況特殊出現(xiàn)交叉時(shí)，要嚴(yán)格進(jìn)行清理消毒。嚴(yán)格執(zhí)行全進(jìn)全出的飼養(yǎng)管理制度，推進(jìn)兩點(diǎn)式或多點(diǎn)式的飼養(yǎng)管理體系。最后，要定期進(jìn)行疫病檢測(cè)和免疫監(jiān)測(cè)。相關(guān)工作人員應(yīng)每天定時(shí)巡查豬舍，密切觀察豬群健康狀況。對(duì)PRRS陰性豬場(chǎng)，應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行主動(dòng)監(jiān)測(cè)。一旦豬場(chǎng)出現(xiàn)異常豬只，應(yīng)全部進(jìn)行采樣檢測(cè)；對(duì)健康的豬群，定期進(jìn)行抽樣檢測(cè)，并且還應(yīng)定期對(duì)豬場(chǎng)環(huán)境進(jìn)行采樣與監(jiān)測(cè)。對(duì)于PRRS陽性豬場(chǎng)，要防止疫情擴(kuò)散，對(duì)發(fā)病豬只進(jìn)行“拔牙式”的剔除，禁止人員、物品的流動(dòng)。此外還應(yīng)重點(diǎn)分析PRRS感染軌跡，調(diào)查感染原因，并及時(shí)進(jìn)行處理。

2.2.2 制定完善的免疫程序，科學(xué)合理的使用疫苗免疫仍舊是目前防控PRRS最為經(jīng)濟(jì)有效的措施

選擇疫苗免疫時(shí)，應(yīng)根據(jù)不同豬場(chǎng)的具體情況選用最具針對(duì)性、適用于本場(chǎng)的疫苗進(jìn)行免疫，同時(shí)，疫苗的免疫順序和次數(shù)尤為關(guān)鍵。PRRS陰性豬場(chǎng)，禁止免疫PRRSV疫苗，應(yīng)把重心放在豬場(chǎng)生物安全體系建設(shè)上，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，優(yōu)化種豬繁育模式供給，嚴(yán)防PRRSV傳入。PRRS陽性場(chǎng)，切勿盲目使用PRRSV弱毒疫苗，要根據(jù)不同的感染狀態(tài)決定是否進(jìn)行疫苗免疫。對(duì)于PRRS穩(wěn)定感染狀態(tài)場(chǎng)，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行消毒措施，徹底實(shí)現(xiàn)各生產(chǎn)階段的全進(jìn)全出，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，最大程度限制PRRSV引起的繼發(fā)感染。能夠有效控制病情的情況下最好不使用疫苗免疫或只使用滅活疫苗，以免造成毒株返強(qiáng)，引發(fā)疫情；對(duì)于PRRS不穩(wěn)定感染狀態(tài)場(chǎng)，應(yīng)進(jìn)行全面調(diào)查，對(duì)本場(chǎng)分離的PRRSV毒株進(jìn)行全基因組測(cè)序鑒定，明確疫情的“真兇”，制定合理的免疫程序，選擇用同源毒株的弱毒疫苗進(jìn)行免疫，同時(shí)做好其他免疫抑制病的防控工作。僅使用現(xiàn)有的疫苗無法有效控制PRRSV的感染，因此還應(yīng)做好生物安全防控措施，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。

2.2.3 群封閉飼養(yǎng)與區(qū)域性逐步凈化

國際獸疫局（OIE）網(wǎng)站曾公布多種毒株共存、母豬群飼養(yǎng)管理不當(dāng)以及仔豬混群飼養(yǎng)等問題是造成豬群內(nèi)PRRSV循環(huán)傳播的關(guān)鍵因素，而造成PRRS難以徹底根除的原因正是PRRSV的循環(huán)傳播。因此，解決以上幾個(gè)問題是防控和清除PRRSV的關(guān)鍵。歐美國家PRRS的防控經(jīng)驗(yàn)表明豬群閉群飼養(yǎng)以及PRRSV的逐步凈化是防控該病的重點(diǎn)。研究表明，PRRSV雖能夠在豬體內(nèi)長(zhǎng)期存在，但最終會(huì)被機(jī)體清除，一般持續(xù)感染的時(shí)間在6～7個(gè)月[24]。因此有人提出了“群封閉飼養(yǎng)”的概念，其核心理念為PRRS陽性場(chǎng)使用同源毒株弱毒疫苗對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)所有豬只進(jìn)行免疫，這樣能夠使整個(gè)豬群同時(shí)獲得免疫力，然后封閉豬群，禁止后備豬進(jìn)入種豬群，同時(shí)淘汰PRRS陽性種豬，結(jié)合豬場(chǎng)的實(shí)際情況，采用不同的閉群時(shí)間，一般為200～250 d。這樣能夠有效抑制PRRSV在豬場(chǎng)的傳播，使豬場(chǎng)PRRS感染處于穩(wěn)定狀態(tài)，后續(xù)引種必須保證引入PRRS陰性豬，這是也實(shí)現(xiàn)PRRSV區(qū)域性逐步凈化的關(guān)鍵點(diǎn)。

3 結(jié)語與展望

2018年8月非洲豬瘟在我國遼寧沈陽暴發(fā)，進(jìn)而席卷全國，致使我國養(yǎng)豬業(yè)幾乎遭受滅頂之災(zāi)，但非洲豬瘟的出現(xiàn)也對(duì)我國未來動(dòng)物疫病防控思路產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響，同時(shí)也將為疫病的凈化按下加速器。在非洲豬瘟的影響下，養(yǎng)豬業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)徹底重洗，較小規(guī)模、養(yǎng)殖水平較低的養(yǎng)殖場(chǎng)將加速被淘汰，而“規(guī)模適度，重效益、重生態(tài)、重傳染病防控、重高效智能將是我國養(yǎng)殖業(yè)的未來”。在防控非洲豬瘟恢復(fù)生豬生產(chǎn)的大背景下，如果我們能夠從增強(qiáng)豬場(chǎng)生物安全等級(jí)，改善豬舍環(huán)境，優(yōu)化種豬繁育模式，嚴(yán)把后備母豬入群前的保健與檢測(cè)，執(zhí)行科學(xué)合理的疫苗免疫程序等方面著手，相信在防控好非洲豬瘟的同時(shí)，PRRS的防控也一定會(huì)取得令人滿意的成績(jī)。