豬圓環(huán)病毒3型檢測方法研究進展

尹佳彤，馬湘海，袁晨陽，成 豫

(西北農林科技大學動物醫(yī)學院，陜西 楊凌 712100)

0 引言

豬圓環(huán)病毒目前已知有3個血清型，分別為豬圓環(huán)病毒1型(PCV1)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)、豬圓環(huán)病毒3型(PCV3)。PCV1一般被認為不致??；PCV2能夠引起豬皮炎腎病綜合征(PDNS)、斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、呼吸系統(tǒng)疾病、繁殖障礙疾病等；PCV3感染嚴重危害豬群體健康。本文就PCV3近年來檢測方法研究進展進行綜述，以期為PCV3檢測和研究提供參考。

1 分子生物學檢測

近年來，除了常規(guī)PCR方法外，還有套式PCR、熒光定量PCR、雙重PCR、環(huán)介導等溫擴增技術等檢測技術被應用于PCV3檢測。

1.1 常規(guī)PCR

常規(guī)PCR廣泛應用于病毒核酸的檢測，是診斷動物疾病的重要方法。姜玲玲等通過不斷優(yōu)化PCR反應體系和反應條件，建立了PCV3 PCR檢測方法。該方法具有較高靈敏度，能特異擴增出長度為649 bp的目的片段，擴增的最低模板量為0.143 ng/μL，用該PCR檢測方法對屠宰場送檢的376份樣品進行檢測，PCV3平均陽性率達12.9%[1]。該方法對PCV3具有良好的檢測效果。

1.2 套式PCR

套式PCR可以降低在錯誤片段上配對和擴增的概率。張靜等使用2對特異性引物，通過兩輪PCR反應進行DNA片段擴增，建立了PCV3套式PCR檢測方法，該檢測方法僅對PCV3檢測陽性，最低檢測限為17.4拷貝/μL的質粒模板，特異性強、敏感度高、簡便易操作，適用于PCV3臨床樣品檢測[2]。

1.3 熒光定量PCR

熒光定量PCR重復性和穩(wěn)定性良好。徐朋麗等根據(jù)Rep基因高度同源保守區(qū)，設計1對引物，建立了檢測PCV3的SYBR Green Ⅰ 熒光定量PCR方法，該方法PCV3最低檢測值為21.9拷貝/μL[3]。陳如敬等同樣基于Rep基因設計特異性引物及探針，建立了TaqMan實時熒光定量PCR方法，該方法適用于PCV3檢測，其中PCV3的最低檢測值為42.2拷貝/μL[4]。暢通等則根據(jù)PCV3 Cap基因核苷酸序列，建立了一種高靈敏度的TaqMan熒光定量PCR檢測方法[5]。

1.4 雙重PCR

雙重PCR檢測方法能夠很好解決2種病毒混合感染時的檢測問題。溫海京等不斷優(yōu)化PCV2和PCV3 的PCR檢測方法條件，建立了一種針對PCV2和PCV3的雙重PCR檢測方法。該方法檢測PCV2、PCV3的靈敏度分別是610拷貝/μL、800拷貝/μL，高于已有報道，雖然較各自單獨PCR檢測率稍低，但并無顯著差異，適用于早期快速檢測PCV2與PCV3[6]。趙宇等建立了一種針對PCV3和豬偽狂犬病毒(PRV)的雙重PCR檢測方法。其引物設計與合成是基于PRV gE和PCV3 Rep基因保守區(qū)域。該方法檢測PRV和PCV3的極限分別為502.0拷貝/μL和91.2拷貝/μL[7]。

1.5 環(huán)介導等溫擴增技術

環(huán)介導等溫擴增技術(LAMP)具有檢出率高、檢驗條件方便的優(yōu)點。朱小甫等根據(jù)PCV3全基因序列，設計了4條引物，建立了檢測PCV3的LAMP方法。此種LAMP方法檢測限為10個拷貝/μL的質粒模板，利用此方法和常規(guī)PCR方法檢測84份樣品，兩種方法符合率達到97.6%。而LAMP方法操作更加簡便，能夠用于PCV3現(xiàn)場檢驗[8]。

2 血清學檢測

血清學檢測方法目前主要有原位雜交技術(ISH)、免疫組織化學技術(IHC)、間接酶聯(lián)免疫吸附實驗(iELISA)、間接免疫熒光(iIFA)等。

PCV3 Cap蛋白在PCV3血清學檢測方法中起到重要作用。葛玉鳳等建立了一種PCV3重組Cap蛋白間接ELISA抗體檢測方法。陽性檢測血清樣品OD450≥0.363，陰性檢測血清樣品OD450≤0.315。該方法靈敏度高，操作簡便，對PCV3抗體的最低檢出效價可達1:25 600[9]。何博等將PCV3 ORF2基因截短表達，將純化后的重組蛋白作為包被抗原，建立了檢測PCV3抗體的間接ELISA方法[10]。陳如敬等以PCV3去核定位信號 Cap蛋白作為抗原建立了檢測PCV3抗體的間接ELISA檢測方法[11]。

3 結語

豬圓環(huán)病毒病對于豬養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展有著重大影響，PCV3作為近年來新發(fā)現(xiàn)的病毒，其在生產上的危害不能被忽視。目前對于PCV3的各項研究正處于積極探索階段，相信隨著研究的深入，能夠建立更加靈敏及簡便的PCV3的檢測方法。各大養(yǎng)殖場在日常管理中也要加強對于PCV3的檢測，做到早預防、早檢測、早治療，最大限度控制疫病的傳播，減小經(jīng)濟損失。