動(dòng)物疫病監(jiān)測的常用樣品采集方法及注意事項(xiàng)

吳學(xué)青 王志遠(yuǎn) 李華林

1.寧夏吳忠市利通區(qū)扁擔(dān)溝鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏吳忠751100；2.寧夏吳忠市利通區(qū)金積鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏吳忠751100；3.寧夏吳忠市利通區(qū)東塔寺鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏吳忠751100

1 監(jiān)測采樣的一般原則

1）應(yīng)該遵循適時(shí)、典型、無菌、適量和生物統(tǒng)計(jì)的原則。

2）凡是急性死亡病例、發(fā)現(xiàn)有血液凝固不良、口鼻、肛門天然孔出血、尸僵不全等疑似炭疽癥狀表現(xiàn)的，應(yīng)先采集耳尖血液制作血涂片染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)呈竹節(jié)狀排列的大桿菌確診為炭疽病的，嚴(yán)禁解剖。

3）采樣時(shí)應(yīng)先采集無菌心、肺、肝等實(shí)質(zhì)器官，再采集胃腸、糞便等容易污染的組織，避免交叉感染。

4）要根據(jù)不同的檢驗(yàn)?zāi)康囊蠛蛯Σ±某醪脚袛喾治霾杉瘶悠?。采集的病料樣品?yīng)具有代表性，采集的組織器官病變要明顯。病因不明時(shí)，可對組織器官、分泌物、排泄物等進(jìn)行全面采集。

5）采集血液、O-P 液等樣品應(yīng)提前禁食4～6 h。采集血樣應(yīng)根據(jù)不同采樣對象、檢驗(yàn)項(xiàng)目及所需血量多少采取不同方法與部位。

6）采樣時(shí)做好個(gè)人生物安全防護(hù)，穿好防護(hù)服，佩戴好口罩、帽子、膠套、手套等防護(hù)用品，避免人畜共患病感染或環(huán)境污染發(fā)生。

7）采樣數(shù)量要求：診斷時(shí)，可采樣1～3 只（頭）病死動(dòng)物的組織器官；疫苗免疫注射抗體效果主動(dòng)監(jiān)測時(shí)，免疫后21 d 每個(gè)場（戶）采集30 份血樣；種群疫病監(jiān)測凈化，制定方案確定采樣次數(shù)和采樣日期，逐頭采樣。疫情監(jiān)測或流行病學(xué)調(diào)查時(shí)，采樣數(shù)量要符合生物統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求。

2 常用監(jiān)測樣品的采集方法及技術(shù)要求

1）抗凝血：即加抗凝劑的血液，常用來作細(xì)菌或病毒檢驗(yàn)樣品。采集的血液立即與抗凝劑充分混勻，防止凝固，密封貼上標(biāo)簽，冷藏。

2）非抗凝血：即不需要加抗凝劑的血液，待血液凝固后血清析出，常用來作血清學(xué)試驗(yàn)。血清制備方法：血樣在室溫下（不能冷藏）傾斜放置2～4 h（有利于血清析出），待血液凝固自然析出血清，再經(jīng)離心機(jī)離心5 min，分離出血清，將血清移入2 mL 塑料離心管中，封口貼標(biāo)，4 ℃冷藏。若需長期保存，將血清置于-20 ℃冷凍。

3）禽泄殖腔拭子：將滅菌的拭子插入泄殖腔大約深1.5～5.0 cm 旋轉(zhuǎn)并刮取黏膜表層的組織或糞便，立即將樣品端置于含有多種抗生素、15%以上甘油的PBS 液的2 mL 離心管中，做好標(biāo)記，密封低溫保存。主要用來監(jiān)測高致病性禽流感等疫病。

4）禽喉氣管拭子：將消毒滅菌的棉拭子從口腔插入至咽的后部直達(dá)喉氣管，輕柔擦拭并緩慢旋轉(zhuǎn)，將拭子置于保存緩沖液之中。主要用來監(jiān)測高致病性禽流感等疫病。

5）鼻腔拭子：主要用來監(jiān)測羊小反芻獸疫、非洲豬瘟等疫病。用滅菌的棉拭子伸入鼻腔采集分泌物，隨即將拭子置于有雙抗的PBS 保存液中，密封低溫保存。

6）牛羊O-P 液（咽食道分泌物）：探杯在采樣前經(jīng)0.2%檸檬酸或1%～2%氫氧化鈉溶液中浸泡3～5 min，再用與動(dòng)物體溫一致的清水沖洗探杯后使用，每采集完1 頭后，探杯要進(jìn)行消毒并反復(fù)清洗以防止酸堿灼傷動(dòng)物食道。采樣時(shí)要保定好動(dòng)物，將探杯隨吞咽動(dòng)作小心插入食道5～10 cm 處，輕輕來回抽動(dòng)2～3 次，然后將探杯拉出，取出5～10 mL O-P 液，倒入含有等量細(xì)胞培養(yǎng)液或磷酸緩沖液的滅菌瓶或離心管中，充分搖勻密封，冷藏送檢。主要用于PCR試驗(yàn)，監(jiān)測動(dòng)物口蹄疫等疫病。

7）皮膚樣品：活體動(dòng)物的病變皮膚，如有新鮮的水泡皮、結(jié)節(jié)、痂皮等可直接剪取3～5 g，置于保存液中。疑似口蹄疫發(fā)病后期，采樣直接取舌體皮膚檢測效果好。

8）實(shí)質(zhì)器官：動(dòng)物心、肺、肝、脾、腎、淋巴結(jié)等實(shí)質(zhì)器官，病料要求新鮮、無污染。必須采用無菌操作技術(shù)和已消毒的配套器械，若器械污染，在取組織樣品之前，應(yīng)用酒精燈火焰消毒手術(shù)刀、剪、鑷等器械，所采樣品分別放入滅菌袋中，密封貼標(biāo)，注明動(dòng)物、組織名稱、日期，防止病料相互感染，冷藏送檢。若運(yùn)送時(shí)間較長，可作冰凍狀態(tài)保存。

9）腸管的采集：在病變腸管兩端用縫合線扎緊打結(jié),從結(jié)扎線外側(cè)端剪斷，把該段腸管放置于滅菌袋或器皿中，冷藏送檢。

10）牛、羊腦采集：主要用于海綿狀腦病的監(jiān)測。在枕骨大孔處用剪刀剪開腦硬膜，目的是便于插入采樣勺。然后用食指伸入枕骨大孔中，沿著腔壁轉(zhuǎn)1 圈，目的是分離切斷腦髓與腔壁相連的神經(jīng)和血管，以便于腦髓順利挖出。緊貼枕骨大孔的腔壁插入采樣勺，以免破壞腦髓。插入5～7 cm 深度（羊腦則為4 cm），然后扳住勺子手柄，往外挖出腦組織，延腦即可完整取出，注意腦組織采樣需在動(dòng)物死亡之后盡快采集并-70 ℃冷凍保存。

3 樣品采集、保存、記錄、運(yùn)送環(huán)節(jié)注意事項(xiàng)

1）心、肝、腎等實(shí)質(zhì)器官采樣，必須包括病灶及臨近正常組織，以便于對照。死亡動(dòng)物要盡快采樣，夏天高溫不能超過6 h，冬天不得超過24 h。

2）血液、O-P 液等樣品在采集前禁食8～12 h，可少量飲水，以免胃內(nèi)容物反流污染O-P 液。

3）樣品信息記錄要填寫完整：所有樣品都要認(rèn)真填寫采樣表，包括場戶名、場址、畜種、年齡、聯(lián)系人及電話、采樣數(shù)量、名稱、編號、養(yǎng)殖規(guī)模、免疫情況、臨床表現(xiàn)、發(fā)病數(shù)量、死亡數(shù)量及時(shí)間、治療用藥記錄、飼料類型等。不同樣品應(yīng)獨(dú)立密封包裝，樣品標(biāo)簽用記號筆注明樣品名稱、編號、采樣日期，采樣人和被采樣單位簽字或蓋章確認(rèn)，應(yīng)將采樣表及所采樣品一起送實(shí)驗(yàn)室。

4）樣品保存：血清、咽-泄殖腔拭子等樣品為便于保存，可加入青霉素、鏈霉素防止腐敗、抑制雜菌繁殖。

5）樣品運(yùn)送：采集的樣品以最快最直接的途徑送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。樣品24 h 內(nèi)送達(dá)，可放在4 ℃冷藏箱內(nèi)運(yùn)送；24 h 內(nèi)不能送達(dá)的可把樣品進(jìn)行冷凍，并以此狀態(tài)運(yùn)送。