某鴿場新城疫病毒和禽流感病毒血清抗體合格率的分析

◆作者：杭柏林 鄧麗 劉保國 朱豫坤

◆單位：河南科技學(xué)院動物科技學(xué)院

新城疫（Newcastle disease）是由新城疫病毒（NDV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病，曾被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為A 類疫病，對養(yǎng)禽業(yè)危害甚大。禽流感（Avian influenza）是由A 型流感病毒（AIV）引起的一種傳染性疾病，可分為高致病性禽流感和低致病性禽流感。低致病性禽流感常由H9 亞型禽流感病毒引起，而高致病性禽流感常由H5 亞型和H7 亞型的禽流感病毒引起（劉金華等，2016；付如勇等，2020）。某些高致病性禽流感病毒毒株還可以引起人的感染，成為一種人獸禽共患的病原（陳媛等，2020）。因此，新城疫和禽流感是影響?zhàn)B禽業(yè)的兩個重要的傳染性疾病。疫苗免疫是預(yù)防新城疫和禽流感的重要措施。及時了解免疫后抗體水平是判斷群體對病原抵抗力的重要手段。鴿是一種重要的禽類，也常發(fā)生新城疫和禽流感等傳染性疾?。ㄍ跽夹碌龋?020；吳曉斌等，2020）。本研究主要就某鴿場的新城疫和禽流感在疫苗免疫后進(jìn)行了血清抗體檢測，分析了血清抗體水平，為新城疫和禽流感的預(yù)防提供及時的參考性意見。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 待檢樣本的來源

為了解豫北某鴿場所飼養(yǎng)的美國王鴿在免疫新城疫病毒疫苗和禽流感病毒疫苗后血清抗體水平的合格率，于疫苗免疫后14 天，隨機(jī)抽取鴿子，10 只/棟，共5 棟，用1mL 注射器從鴿翅靜脈無菌采集血液0.5~0.8mL。

1.1.2 試劑

檸檬酸鈉購自天津市博迪化工有限公司，氯化鈉購自天津市天力化學(xué)試劑有限公司。新城疫病毒和禽流感病毒的血凝抑制試驗陽性抗原均購自哈爾濱國生生物科技股份有限公司。

1.1.3 儀器

離心機(jī)（型號：TG16-WS）購自湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司， 冰箱（型號：BCD-325WKY1DPM）購自廣東海信容聲冰箱有限公司，生化培養(yǎng)箱（型號：HH-B11） 購自上海醫(yī)療器械七廠，高壓蒸汽滅菌器（型號：MJ-78A）購自上海施都凱儀器設(shè)備有限公司，移液器（型號：5-50μL） 購自大龍興創(chuàng)實驗儀器(北京)有限公司，電子天平（型號：T202B）購自常熟市天量儀器有限責(zé)任公司。

1.2 方法

1.2.1 鴿待檢血清的制備

采集的鴿子血液于3000r/min 離心10min，取上清，即為待檢的鴿血清，置于4℃或-20℃保存、待檢。

1.2.2 抗凝雞血液

從菜市場采集健康公雞的血液，用3.8%檸檬酸鈉抗凝，搖勻，置4℃保存。

1.2.3 1%雞紅細(xì)胞的制備

按照文獻(xiàn)（杭柏林等，2017）的方法制備1%雞紅細(xì)胞懸液。

1.2.4 血凝試驗和血凝抑制（HI）試驗

血凝試驗和HI 試驗按照文獻(xiàn)（杭柏林等，2017）的方法進(jìn)行。

1.2.5 結(jié)果判定

對新城疫病毒和禽流感病毒HI 抗體效價，當(dāng)HI 抗體效價≥5log2 時，認(rèn)為個體的免疫是合格的；HI 抗體效價<5log2時，認(rèn)為個體的免疫是不合格的；當(dāng)HI 抗體平均效價≥7log2時，群體免疫是合格的（焦鳳超等，2017）?？贵w的離散度用變異系數(shù)來表示，變異系數(shù)=（標(biāo)準(zhǔn)差/ 平均值）×100%，抗體的離散度≤10% 為佳（焦鳳超等，2017）。

2 結(jié)果與分析

2.1 HI 抗體的平均效價

各棟鴿舍的HI 抗體平均效價結(jié)果如圖1 所示。從圖1 中可以看出，對新城疫病毒HI 抗體平均效價而言，5 棟鴿舍中僅有1 棟鴿舍是合格的，合格率僅為20%；對禽流感病毒H5 亞型HI抗體平均效價而言，5 棟鴿舍全部合格，合格率為100%；對禽流感病毒H7 亞型HI 抗體平均效價而言，5 棟鴿舍僅有2 棟鴿舍是合格的，合格率為40%，有1棟鴿舍接近合格。這表明，該鴿群新城疫病毒和禽流感病毒H7亞型的免疫效果不是很好，需要加強(qiáng)免疫。

圖1 新城疫病毒和禽流感病毒HI 抗體的平均效價

2.2 抗體的個體合格率與變異系數(shù)

各棟鴿舍HI 抗體的個體合格率和變異系數(shù)分析結(jié)果如表1所示。從表1 中可以看出，對新城疫病毒而言，僅1 棟鴿舍的鴿全部合格，最低的僅20%的鴿是合格的，但離散度均不佳，最高的達(dá)68.32%；對禽流感病毒H5亞型而言，5 棟鴿舍的鴿全部合格，2 棟鴿舍的離散度較佳；對禽流感病毒H7 亞型而言，2 棟鴿舍的鴿全部合格，最低的有70%的鴿是合格的，離散度稍偏高。這同樣表明，該鴿群新城疫病毒和禽流感病毒H7 亞型的免疫效果均不好，應(yīng)及時加強(qiáng)免疫。

表1 新城疫病毒和禽流感病毒HI 抗體的個體合格率和變異系數(shù)

3 討論

新城疫和禽流感是危害養(yǎng)鴿業(yè)的兩種重要疾病。許多鴿場常使用疫苗進(jìn)行免疫以預(yù)防新城疫和禽流感的發(fā)生。新城疫病毒的疫苗有弱毒活疫苗和滅活疫苗（宋亞鵬等，2017）。新城疫弱毒活疫苗常?？梢酝ㄟ^滴鼻點眼或飲水的方式進(jìn)行免疫，操作上較為快捷、方便。因此，大多數(shù)養(yǎng)鴿場常選擇新城疫病毒弱毒疫苗進(jìn)行點眼滴鼻免疫或飲水免疫。在本研究所調(diào)查的鴿場就是應(yīng)用了新城疫病毒弱毒疫苗進(jìn)行了免疫。從檢測結(jié)果來看，該鴿場鴿群針對新城疫病毒的免疫效果較差，初步認(rèn)為該鴿場鴿群近期內(nèi)如受到新城疫病毒的感染將可能發(fā)生新城疫。

禽流感的預(yù)防亦常常通過疫苗免疫進(jìn)行（趙旭東等，2020）。臨床上常常根據(jù)養(yǎng)殖環(huán)境中出現(xiàn)的禽流感病毒亞型選擇不同的亞型疫苗來進(jìn)行預(yù)防免疫。目前，市場上禽流感病毒的疫苗主要是滅活疫苗。預(yù)防高致病性禽流感主要是針對H5 亞型和H7 亞型的毒株。在本研究中，該鴿場主要注射了H5 亞型和H7 亞型的禽流感病毒滅活疫苗。從檢測結(jié)果來看，該鴿場鴿群針對禽流感病毒H5 亞型的免疫效果較好，但對禽流感病毒H7 亞型的免疫效果稍差，初步認(rèn)為該鴿場鴿群在短期內(nèi)能有效抵抗禽流感病毒H5 亞型的感染，但不能有效抵抗禽流感病毒H7 亞型的感染。

綜合以上分析結(jié)果，我們建議鴿場應(yīng)認(rèn)真做好新城疫和禽流感的疫苗免疫接種工作，并認(rèn)真做好抗體水平檢測與分析，及時補(bǔ)種疫苗。

參考文獻(xiàn)：（略）