蚊子草正丁醇部位的化學成分研究(Ⅰ)

鮑 和，楊 晶，王博博，陳麗婭，劉娜娜，張 睿，王 欣，高 陽，張海龍*

(1.西安交通大學第二附屬醫(yī)院藥學部，西安 710004；2.西安交通大學藥學院，西安 710061)

蚊子草Filipendulapalmata(Pall) Maxim為薔薇科蚊子草屬多年生草本植物，是鄂倫春族常用民族藥，在鄂語中又名合葉子，主要分布于我國黑龍江、吉林、內蒙古以及朝鮮、日本及俄羅斯遠東等地區(qū)[1]。蚊子草在鄂倫春族人民的傳統(tǒng)應用中常被用于治療痛風、風濕、癲癇、燒傷、凍傷以及婦科止血[2]。目前針對蚊子草的化學成分的研究較少，為了更好地對其開發(fā)利用，本課題利用硅膠柱色譜法、凝膠柱色譜法及半制備高效液相色譜法等對該植物的正丁醇部位進行化學成分研究，利用波譜技術對其結構進行鑒定，共分離鑒定出10個化合物，大多數(shù)為黃酮苷類化合物，其中有6個為首次從該植物中分離得到。本研究為深入研究該植物的藥理活性及其作用機制提供了可能，為進一步開發(fā)利用民族藥蚊子草奠定了研究基礎。

1 儀器與試藥

1.1儀器 AVANCE Ⅲ HD 400 型核磁共振儀 (德國布魯克公司)；Gel Master-3000 型全自動GPC凝膠凈化系統(tǒng)，PuriMaster-5000 型二元全自動制備色譜系統(tǒng)(上海科哲生化科技有限公司)；ME104 型分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；DLSB-5/20型低溫冷卻循環(huán)泵(鄭州長城科工貿易有限公司)；Cosmosil C18半制備型色譜柱 (250 mm×10.0 mm，5 μm，日本半井株式會社)；N-1100型旋轉蒸發(fā)儀(東京理化器械株式會社)。

1.2試藥 蚊子草采集于黑龍江省北安市通北林業(yè)局，經張海龍教授鑒定為蚊子草Filipendulapalmata(Pall) Maxim，憑證標本(編號：FP20200926)現(xiàn)保存于西安交通大學藥學院。柱層析硅膠(200～300目，青島海洋化工廠)；聚丙烯酰胺凝膠(美國通用電氣醫(yī)療系統(tǒng)貿易發(fā)展有限公司)；RP-C18柱層析填料(德國Merck公司)；核磁測定用氘代甲醇及氘代DMSO(上海務勝生物科技有限公司)；甲醇、二氯甲烷均為分析純(成都科隆化學品有限公司)。

2 提取分離

2.1蚊子草正丁醇部位的制備 取蚊子草干燥地上部分(15 kg)，用甲醇室溫冷浸后加熱回流提取3次，得蚊子草甲醇提取液，減壓濃縮得到929 g浸膏。將浸膏用適量蒸餾水分散后，分別用石油醚和乙酸乙酯除去脂溶性成分后，再用正丁醇進行萃取，正丁醇萃取液經減壓濃縮后，得到正丁醇提取物96 g。

2.2化合物的分離 將正丁醇提取物用硅膠(200～300目，500 g)柱色譜進行初步分離，薄層檢識合并后得到12個餾分(Bu-1～Bu-12)。取Bu-9經ODS常壓柱色譜進行分離，以甲醇-水(10∶90～100∶0)為流動相進行梯度洗脫，濃縮合并后共得到10個亞流份(Bu-9-1～Bu-9-10)。其中Bu-9-5經Sephadex LH-20以甲醇為洗脫液得到5個亞流份(Bu-9-5-1～Bu-9-5-5)，將其中的Bu-9-5-3用半制備高效液相色譜(甲醇∶水=41∶59)純化得到化合物1(20.1 mg)，Bu-9-5-5經HPLC(甲醇∶水=31∶69)制備得到化合物10(3.0 mg)。流份Bu-9-8經正相硅膠柱色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)進行分離，得到7個亞流份(Bu-9-8-1～Bu-9-8-7)，將Bu-9-8-4用HPLC(甲醇∶水=53∶47)分離得到化合物2(14.8 mg)和化合物7(2.0 mg)。流份Bu-9-10經Sephadex LH-20柱色譜以甲醇為流動相粗分離得到5個亞流份(Bu-9-10-1～Bu-9-10-5)，其中Bu-9-10-2亞流份再經HPLC(甲醇∶水=61∶39)純化得到化合物3(3.3 mg)，Bu-9-10-5經HPLC(甲醇∶水=61∶39)純化得到化合物4(5.0 mg)。Bu-9-6經正相硅膠色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)進行分離，得到5個亞流份(Bu-9-6-1～Bu-9-6-5)，其中Bu-9-6-3經半制備高效液相色譜(甲醇∶水=39∶61)分離得到化合物8(1.7 mg)，Bu-9-6-4經HPLC(甲醇∶水=38∶62)分離得到化合物5(31.3 mg)，Bu-9-6-5經HPLC(甲醇∶水=45∶55)分離得到化合物9(4.0 mg)。Bu-9-9用Sephadex LH-20 以甲醇為洗脫劑得到5個亞流份(Bu-9-9-1～Bu-9-9-5)，其中Bu-9-9-3經正相硅膠色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)進行除雜后再經HPLC(甲醇∶水=44∶56)純化得到化合物6(3.0 mg)。

3 結果

3.1化合物的結構鑒定

化合物1白色粉末，易溶于DMSO，微溶于甲醇，分子式C16H18O9。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ：6.66 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.42 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.26 (1H，s，H-3)，5.39 (1H，d，J=4.8 Hz，H-1′)，2.39 (3H，s，-CH3)。13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：182.49 (C-4)，168.87 (C-7)，163.38 (C-9)，161.63 (C-5)，157.92 (C-3)，108.80 (C-6)，105.54 (C-8)，100.28 (C-10)，99.95 (C-2)，94.95 (C-1′)，77.60 (C-5′)，76.82 (C-3′)，73.54 (C-2′)，70.02 (C-4′)，61.10 (C-6′)，20.50 (CH3)。以上數(shù)據與文獻[3]報道基本一致，故鑒定化合物1為去甲丁香色原酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2黃色粉末，溶于甲醇，分子式C20H18O11。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ：12.38 (1H，s，5-OH)，7.56 (1H，d，J=8 Hz，H-6′)，7.48 (1H，s，H-2′)，6.85 (1H，d，J=8.8 Hz，H-5′)，6.41 (1H，s，H-8)，6.20 (1H，s，H-6)，5.59 (1H，s，H-1′)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ：178.58 (C-4)，164.65 (C-7)，161.67 (C-5)，157.94 (C-9)，157.16 (C-2)，148.44 (C-4′)，144.95 (C-3′)，133.50 (C-3)，121.70 (C-6′)，121.57 (C-1′)，115.44 (C-2′)，115.04 (C-5′)，108.11 (Ara-1)，104.21 (C-10)，98.49 (C-6)，93.38 (C-8)，86.61 (Ara-4)，81.91 (Ara-2)，77.29 (Ara-3)，61.14 (Ara-5)。以上數(shù)據與文獻[4]報道基本一致，故鑒定化合物2為萹蓄苷。

化合物3黃色粉末，溶于甲醇，分子式C21H20O10。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ：7.35 (1H，d，J=1.3 Hz，H-2′)，7.29 (1H，dd，J=5.5，2.1 Hz，H-6′)，6.92 (1H，d，J=5.5 Hz，H-5′)，6.30(1H，d，J=1.3 Hz，H-8)，6.15(1H，d，J=1.3 Hz，H-6)，5.37(1H，d，J=1 Hz，H-1″)，4.29 (1H，dd，J=2.2，1 Hz，H-2″)，3.82 (dd，J=6.2，2.2 Hz，H-3″)，3.48-3.43 (1H，m，H-5″)，3.43-3.38(1H，m，H-4″)，0.97(3H，d，J=5.3 Hz，H-6″)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:178.16 (C-4)，164.20 (C-7)，160.22(C-5)，157.81 (C-2，9)，148.17 (C-4′)，145.59 (C-3′)，134.77 (C-3)，121.26 (C-1′)，120.60 (C-6′)，115.14 (C-5′，2′)，109.04 (C-10)，102.11 (C-1″)，93.51 (C-8)，98.88 (C-6)，71.79 (C-4″)，71.07(C-3″)，70.63 (C-2″，5″)，16.25(C-6″)。以上數(shù)據與文獻[5]報道基本一致，故鑒定化合物3為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物4淡黃色針狀結晶，溶于甲醇，分子式C15H10O7。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:12.51 (1H，s，5-OH)，10.80 (1H，s，7-OH)，9.39 (1H，s，3-OH)，9.62 (1H，s，3′-OH)，9.33(1H，s，4′-OH)，7.68(1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，7.55(1H，dd，J=2.1，8.5 Hz，H-6′)，6.89(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:175.95 (C-4)，164.23(C-7)，161.12(C-9)，156.83(C-2)，147.36 (C-5)，146.82(C-4′)，144.82(C-3′)，131.16(C-3)，122.75(C-1′)，120.26(C-6′)，114.82(C-2′)，114.70 (C-5′)，103.10 (C-10)，97.84(C-6)，93.01(C-8)。以上數(shù)據與文獻[6]報道基本一致，故鑒定化合物4為槲皮素。

化合物5白色針狀結晶，溶于甲醇，分子式C7H6O5。1H-NMR (400 MHz，CD3OD) δ:7.09(2H，s，H-2，6)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ:169.13(C-7)，145.84(C-3)，144.98(C-5)，138.21(C-4)，120.60(C-1)，108.97(C-2，6)。以上數(shù)據與文獻[7]報道基本一致，故鑒定化合物5為沒食子酸。

化合物6黃色粉末，溶于甲醇，分子式C23H22O13。1H-NMR(400 MHz，CD3OD) δ:1.81(3H，s，COCH3)，5.05(1H，d，J=5.2 Hz，H-2′)，5.31(1H，d，J=7.7 Hz，H-1″)，6.20(1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，6.41(1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.82 (1H，d，J=8.3 Hz，H-5″)，7.51(1H，d，J=2.1 Hz，H-2″)，7.64(1H，dd，J=8.5，2.1 Hz，H-6″)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:178.09 (C-4)，171.12 (COCH3)，165.30 (C-7)，161.58(C-5)，157.51(C-2)，157.09(C-9)，148.64(C-4′)，144.45 (C-3′)，134.35 (C-3)，121.71(C-6′)，121.37(C-1′)，116.26(C-5′)，114.63 (C-2′)，104.40(C-1′)，103.95(C-1′)，98.72(C-6)，93.47(C-8)，73.48(C-3′)，73.08 (C-5′)，71.50(C-2′)，68.83(C-4′)，63.12(C-6′)，19.02(COCH3)。以上數(shù)據與文獻[8]報道基本一致，故鑒定化合物6為槲皮素3-O-(6″-乙?；?-β-D-吡喃半乳糖苷。

化合物7黃色粉末，溶于甲醇，分子式C21H20O11。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:8.00(2H，d，J=4.8 Hz，H-2′，6′)，6.87 (2H，d，J=5.2 Hz，H-3′，6′)，6.56 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.29 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，5.18 (1H，d，J=4.4 Hz，H-1″)，3.16-3.71(6H，m，H2″-6″)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:178.04 (C-4)，164.68(C-7)，161.71(C-5)，160.26(C-4′)，157.51(C-9)，157.07(C-2)，133.92(C-3)，130.77(C-2′，6′)，121.25(C-1′)，114.74 (C-3′，5′)，104.25(C-10)，103.15(C-1″)，98.51(C-6)，93.35(C-8)，76.10(C-5″，C-3″)，73.92(C-2″)，69.60(C-4″)，65.80(C-6″)。以上數(shù)據與文獻[9]報道基本一致，故鑒定化合物7為山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8淡黃色油狀物，溶于甲醇，分子式C26H32O11。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.13(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，6.91(1H，d，J=5.6 Hz，H-2)，6.80 (1H，dd，J=5.2，5.2 Hz，H-6)，7.02 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，4.86 (1H，d，J=8.4 Hz，H-1)，4.74 (1H，d，J=4.0 Hz，H-7)，4.70 (2H，d，J=4.4 Hz，H-7)，4.23 (2H，dd，J=5.6，6.0 Hz，H-9)，3.84 (2H，m，H-9′)，3.11 (1H，m，H-8)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:149.55 (C-4)，147.72 (C-3)，146.08 (C-4)，145.92 (C-3′)，136.06(C-1)，132.35(C-1)，118.66(C-6)，118.39(C-6′)，116.59(C-5)，114.68(C-5′)，110.20(C-2)，109.56(C-2)，86.09 (C-7)，85.69(C-7)，71.32(C-9)，71.27(C-9′)，55.01(3，5-OCH3)，54.13(C-8，8′)，53.95 (3′，5′-OCH3)，101.42(C-1″)，76.80(C-5″)，76.44(C-3″)，73.50(C-2″)，69.92(C-4″)，61.10(C-6″)。以上數(shù)據與文獻[10]報道基本一致，故鑒定化合物8為松脂醇-4-O-吡喃葡萄糖苷。

化合物9黃色粉末，溶于甲醇，分子式C19H30O7。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:5.87(1H，s，H-4)，5.78(1H，dd，J=4.4，4.4 Hz，H-7)，5.64 (1H，dd，J=6，6.4 Hz，H-8)，4.40 (1H，dd，J=5.2，4 Hz，H-2′)，4.34 (1H，d，J=5.2 Hz，H-1′)，3.60(2H，m，H-6′)，3.20(1H，m，H-9)，3.17-3.01(3H，m，H-4′，H-5′，H-3′)，2.66(1H，d，J=6.4 Hz，H-6)，2.38(1H，s，H-2)，2.06(1H，s，H-2)，1.85(3H，s，H-10)，1.30(3H，d，J=6.4 Hz，H-13)，1.00 (6H，d，J=10.4 Hz，H-11，H-12)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:200.65 (C-3)，164.49(C-5)，136.83(C-7)，127.43(C-8)，124.72(C-4)，101.05(C-1′)，76.69(C-3)，76.59(C-9)，75.57(C-2′)，73.86(C-3′)，70.10(C-4′)，61.27(C-6′)，55.36(C-6)，47.17(C-2)，35.71(C-1)，26.64(C-12)，26.20(C-11)，22.36(C-10)，19.63(C-13)。以上數(shù)據與文獻[11]報道基本一致，故鑒定化合物9為3-氧代-α-紫羅蘭醇-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10棕黃色油狀物，溶于水，微溶于甲醇，分子式C15H17O10。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.60 (1H，d，J=10.8 Hz，H-7′)，7.12(1H，s，H-2′)，7.01 (1H，d，J=4.4 Hz，H-6′)，6.91 (1H，d，J=2.0 Hz，H-5′)，6.36 (1H，d，J=10.0 Hz，H-8′)，4.21 (1H，dd，J=2.8，5.6 Hz，H-4)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ：175.78 (C-1)，147.28 (C-4′)，146.41 (C-7′)，144.39 (C-3′)，126.90 (CH，C-1′)，122.73 (CH，C-6′)，116.12 (C-5′)，115.00 (C-8′)，73.76 (C-5)，72.95 (C-2)，70.22 (C-3)，66.80 (C-4)，64.88 (C-6)。以上數(shù)據與文獻[12]報道基本一致，故鑒定化合物10為5-O-反式-咖啡?；咸烟侨┧?。

4 討論

民族藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥文化的一部分，在歷史上發(fā)揮了重要作用，應得到進一步的繼承和發(fā)揚，尤其是作為沒有文字記載的人數(shù)較少的少數(shù)民族常用藥，如不及時加以整理、研究和發(fā)展，有失傳的危險。本課題組對民族藥，尤其是東北地區(qū)的鄂倫春族民族藥的化學成分和藥理活性開展了一系列的研究工作[13-20]，蚊子草作為鄂倫春族的民間常用藥，具有治療痛風及風濕的功效，還具有一定的抗炎活性。同時，因其具有特殊的香味，東北地區(qū)及俄羅斯遠東地區(qū)人們也將新鮮采集的蚊子草腌制后食用。但目前針對該植物化學成分的研究較少，尤其是對其強極性化學成分的研究更少。本文針對蚊子草正丁醇部位的強極性成分，運用各種色譜技術尤其是高效液相色譜技術進行研究，分離鑒定出了10個化合物，大部分為黃酮類及其苷類化合物，其中6個化合物為首次從該植物中分離得到，對該植物正丁醇部位化學成分的進一步研究正在進行中。本研究為進一步開發(fā)利用我國東北地區(qū)的民族藥藥用資源提供了科學依據。