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    胸腺上皮性腫瘤中不同克隆號(hào)PAX8抗體的表達(dá)及臨床意義

    2021-12-03 10:38:15楊永國(guó)陳麗君
    關(guān)鍵詞:單克隆胸腺鱗狀

    楊永國(guó),陳麗君,李 媛,田 華,管 蕾

    PAX家族是一組轉(zhuǎn)錄因子,由9個(gè)成員組成(即PAX1~9),每個(gè)成員均編碼1個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,其在組織和器官的形成中起重要作用[1]。PAX8是PAX轉(zhuǎn)錄因子家族的一員,對(duì)腎臟、甲狀腺和Müllerian管起源器官的胚胎發(fā)育至關(guān)重要,同時(shí)也是這些器官組織起源腫瘤的敏感性和特異性標(biāo)志物[2]。PAX8在胸腺原發(fā)上皮性腫瘤中的表達(dá)文獻(xiàn)以PAX8多克隆抗體進(jìn)行檢測(cè)報(bào)道較多[3-8]。PAX8單克隆抗體因克隆號(hào)不同而表達(dá)各有差異,文獻(xiàn)報(bào)道較少。本文采用免疫組化EnVision兩步法檢測(cè)兩種不同克隆號(hào)的PAX8單克隆抗體在胸腺上皮性腫瘤中的表達(dá),探討兩種抗體在胸腺上皮性腫瘤中的表達(dá)及臨床意義。

    1 材料與方法

    1.1 材料收集2013年1月~2020年10月復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科存檔的胸腺上皮性腫瘤116例,包括A型胸腺瘤3例,AB型胸腺瘤11例,B1型胸腺瘤5例,B2型胸腺瘤7例,B3型胸腺瘤15例,化生性胸腺瘤2例,微結(jié)節(jié)型胸腺瘤1例,B3/鱗狀細(xì)胞癌(灰區(qū))2例,胸腺鱗狀細(xì)胞癌65例,胸腺腺癌1例,胸腺不典型類癌3例,胸腺淋巴上皮癌1例。另收集同期行PAX8檢測(cè)的甲狀腺具有胸腺樣分化的癌(carcinoma showing thymus-like differentiation of the thyroid, CASTLE)40例,肺鱗狀細(xì)胞癌29例,胸腺鱗狀細(xì)胞癌肺轉(zhuǎn)移3例。收集2015年1月~2020年10月江蘇省揚(yáng)州市江都人民醫(yī)院病理科胸腺上皮性腫瘤26例,其中A型胸腺瘤4例,AB型胸腺瘤10例,B1型胸腺瘤2例,B2型胸腺瘤3例,B3型胸腺瘤2例,胸腺鱗狀細(xì)胞癌5例。另收集卵巢上皮性腫瘤45例(黏液性腺癌4例、漿液性腺癌32例、透明細(xì)胞癌3例、子宮內(nèi)膜樣癌6例)、腎臟上皮性腫瘤14例(透明細(xì)胞癌12例,嫌色細(xì)胞癌2例)、甲狀腺乳頭狀癌4例檢測(cè)PAX8抗體的表達(dá)。所有標(biāo)本均由兩位高年資病理醫(yī)師共同閱片確診,本實(shí)驗(yàn)經(jīng)江蘇省揚(yáng)州市江都人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),患者均簽署知情同意書(shū)。

    1.2 方法標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,4 μm厚切片,HE染色。免疫組化染色采用EnVision兩步法。鼠單克隆抗體PAX8(克隆號(hào)MRQ-50)購(gòu)自CELL MARQUE公司,兔單克隆抗體PAX8(克隆號(hào)EP298)購(gòu)自福州邁新公司。HRP標(biāo)記的二抗及DAB顯色分別購(gòu)自Leica公司和福州邁新公司。復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院選用PAX8(MRQ-50)抗體和Leica公司的二抗進(jìn)行檢測(cè),江蘇省揚(yáng)州市江都人民醫(yī)院選用PAX8(EP298)抗體和福州邁新公司的二抗進(jìn)行檢測(cè)。兩個(gè)單位的免疫組化結(jié)果經(jīng)互換蠟塊檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)。

    1.3 結(jié)果判斷PAX8以細(xì)胞核棕黃色著色為陽(yáng)性。每張切片選取10個(gè)高倍視野,每高倍視野計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞。按陽(yáng)性細(xì)胞著色和所占百分比進(jìn)行判斷:腫瘤細(xì)胞無(wú)著色為陰性;腫瘤細(xì)胞核有著色,但陽(yáng)性細(xì)胞百分比<10%為弱陽(yáng)性;≥10%為陽(yáng)性。

    2 結(jié)果

    2.1 胸腺上皮性腫瘤和部分肺鱗狀細(xì)胞癌中PAX8(MRQ-50)的表達(dá)PAX8(MRQ-50)在胸腺上皮性腫瘤中的陽(yáng)性率:A型胸腺瘤100%(3/3)、AB型胸腺瘤72.7%(8/11)(圖1)、B1型胸腺瘤60.0%(3/5)、B2型胸腺瘤100%(7/7)、B3型胸腺瘤73.3%(11/15)、化生性胸腺瘤100%(2/2)、微結(jié)節(jié)型胸腺瘤100%(1/1)、胸腺鱗狀細(xì)胞癌73.8%(48/65)(圖2)、胸腺不典型類癌100%(3/3)、胸腺淋巴上皮癌100%(1/1)和CASTLE為57.5%(23/40);B3/鱗狀細(xì)胞癌(灰區(qū))2例和胸腺腺癌1例陽(yáng)性率為0。此外,本實(shí)驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)PAX8(MRQ-50)在轉(zhuǎn)移至肺臟的胸腺鱗癌組織中100%(3/3)陽(yáng)性。PAX8(MRQ-50)在29例肺原發(fā)鱗狀細(xì)胞癌中,僅5例呈弱陽(yáng)性,其余均陰性(表1,圖3)。

    2.2 胸腺上皮性腫瘤和腎臟、卵巢、甲狀腺上皮性腫瘤中PAX8(EP298)的表達(dá)PAX8(EP298)在胸腺上皮性腫瘤:A型胸腺瘤(0/4)、AB型胸腺瘤(0/10)(圖4)、B1型胸腺瘤(0/2)、B2型胸腺瘤(0/3)、B3型胸腺瘤(0/2)、胸腺鱗狀細(xì)胞癌(0/5)(圖5)均呈陰性。PAX8(EP298)在卵巢黏液性腺癌(1/4)、卵巢漿液性腺癌(30/32)、卵巢透明細(xì)胞癌(3/3)、卵巢子宮內(nèi)膜樣癌(6/6)、腎臟透明細(xì)胞癌(12/12)、嫌色細(xì)胞癌(1/2)、甲狀腺乳頭狀癌(4/4)(圖6)呈陽(yáng)性。

    3 討論

    PAX蛋白是由128個(gè)氨基酸組成的高度保守的結(jié)構(gòu)域,在識(shí)別特定的DNA結(jié)合位點(diǎn)后啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄,并控制基因調(diào)控[9]。PAX蛋白家族的結(jié)構(gòu)相似,分為4個(gè)亞群,其中PAX8和PAX2、PAX5同屬第Ⅱ亞群[10]。PAX8在胚胎發(fā)育過(guò)程中參與調(diào)控中樞神經(jīng)系統(tǒng)、眼睛、腎臟、甲狀腺、來(lái)自中腎管的器官以及與Müllerian管有關(guān)的器官發(fā)育[11]。研究表明,在非腫瘤性人體組織中,PAX8在腎小球壁上皮細(xì)胞、腎集合管細(xì)胞、萎縮性腎小管上皮細(xì)胞(不分腎段)和子宮頸上皮細(xì)胞、子宮內(nèi)膜、輸卵管、精囊、附睪、甲狀腺、胰島細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞中均陽(yáng)性[2]。在腫瘤組織的相關(guān)研究中,PAX8表達(dá)多見(jiàn)于甲狀腺、腎臟和Müllerian管起源的腫瘤[12-15]。既往報(bào)道PAX8在胸腺上皮性腫瘤中亦有表達(dá),該抗體有多種克隆號(hào),且表達(dá)不一致;其中多克隆抗體有較高的陽(yáng)性率且相對(duì)較穩(wěn)定[3-6],而單克隆抗體中不同克隆號(hào)表達(dá)差異較大[6-8]。本實(shí)驗(yàn)分析MRQ-50和EP298兩種單克隆抗體的表達(dá),探討PAX8不同克隆號(hào)抗體在胸腺上皮性腫瘤的特異性及診斷和鑒別診斷意義。

    Weissferdt等[16]發(fā)現(xiàn)PAX8在胸腺殘留正常上皮細(xì)胞中呈陽(yáng)性,提示PAX8在胸腺胚胎發(fā)育中起一定作用。此外,PAX1和PAX9亦可驅(qū)動(dòng)胸腺起源的第三咽囊發(fā)育[5],PAX8多克隆抗體有可能與PAX1或PAX9發(fā)生交叉反應(yīng)呈陽(yáng)性。

    PAX基因家族成員的N末端區(qū)域具有高度的序列同源性,其中PAX8和PAX5的N端同源性為70%,增加了該區(qū)域內(nèi)交叉反應(yīng)的可能性。多克隆PAX8抗體可檢測(cè)PAX8的5種亞型(相對(duì)分子質(zhì)量分別為:3.1×104、3.4×104、4.1×104、4.3×104和4.8×104),并可能與其他PAX家族成員具有交叉反應(yīng)性[8]。因此,在無(wú)PAX8的腫瘤也有可能表現(xiàn)多克隆PAX8抗體的免疫反應(yīng)性。Toriyama等[8]認(rèn)為多克隆PAX8抗體的免疫反應(yīng)性可能是與PAX5或PAX6交叉反應(yīng)的結(jié)果,他們也認(rèn)為胸腺組織和胸腺癌細(xì)胞對(duì)單克隆PAX8無(wú)免疫反應(yīng)性。

    MRQ-50是單克隆PAX8抗體較為常用的克隆號(hào),本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該克隆號(hào)在胸腺上皮性腫瘤(胸腺瘤和胸腺癌)中有較高的陽(yáng)性率。目前研究普遍認(rèn)為抗PAX8 N端的Abs,特別是多克隆抗體,能與其他PAX轉(zhuǎn)錄蛋白發(fā)生交叉反應(yīng),如在扁桃體B淋巴細(xì)胞和胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞呈核陽(yáng)性;R?ge等發(fā)現(xiàn)在克隆號(hào)為MRQ-50、PAX8/1492和DBM15.48的單克隆抗體中同樣可見(jiàn)該交叉反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PAX8(MRQ-50)在胸腺上皮性腫瘤中的表達(dá)也進(jìn)一步印證該型號(hào)單克隆抗體存在交叉反應(yīng);同時(shí)亦發(fā)現(xiàn)PAX8(MRQ-50)在胸腺鱗狀細(xì)胞癌中有較高的陽(yáng)性率,在肺原發(fā)的鱗狀細(xì)胞癌中呈陰性。因此,PAX8(MRQ-50)在胸部腫瘤的鑒別診斷中具有重要意義和價(jià)值。

    EP298是近年針對(duì)PAX8 C末端區(qū)域的單克隆抗體,本實(shí)驗(yàn)胸腺上皮性腫瘤均呈陰性,45例卵巢癌、14例腎細(xì)胞癌和4例甲狀腺乳頭狀癌均表現(xiàn)為較高的陽(yáng)性率。近年重組單克隆抗體(EP298、SP348和ZR-1)主要針對(duì)PAX8的C端(ZR-1和EP298),均未顯示有交叉反應(yīng),本實(shí)驗(yàn)PAX8(EP298)在胸腺上皮腫瘤呈陰性也進(jìn)一步印證了該觀點(diǎn)。因此,建議使用針對(duì)PAX8的C末端區(qū)域的單克隆抗體檢測(cè)腫瘤中PAX8的表達(dá)。

    目前,文獻(xiàn)報(bào)道PAX8多克隆抗體在胸腺上皮性腫瘤中的陽(yáng)性率較高,本實(shí)驗(yàn)中PAX8(MRQ-50)在胸腺上皮性腫瘤中也具有較高的陽(yáng)性率。PAX8(MRQ-50)在肺鱗狀細(xì)胞癌中呈陰性,可資鑒別。PAX8在胸腺上皮性腫瘤中的表達(dá),可能是由于和PAX家族其他成員的N-末端區(qū)域發(fā)生交叉反應(yīng),而非真正的陽(yáng)性。PAX8(EP298)單抗針對(duì)PAX8基因C末端區(qū)域無(wú)交叉反應(yīng),在胸腺上皮性腫瘤中呈陰性。因此,PAX8可以作為胸腺上皮性腫瘤的生物學(xué)標(biāo)志物。由于PAX8抗體有多種克隆號(hào)且表達(dá)不一致,應(yīng)選用多克隆抗體或克隆號(hào)為MRQ-50的單抗輔助胸腺上皮性腫瘤的診斷或鑒別診斷。

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