長根菇單孢雜交育種試驗初報

黃書文 劉葉高 張文華 張煥均 陳新淇

（三明市真菌研究所，三明市三真生物科技有限公司，福建 三明 365000）

長根菇（Oudemansiella radicata）又名長根奧德蘑、長根金錢菌、茶樹菇（湖南）、草雞樅（云南）、露水雞樅、黑皮雞樅[1-3]等。長根菇當(dāng)前栽培品種都為野生馴化菌株，面臨出菇推遲、抗逆性降低等問題[4]。本研究以常規(guī)育種方法選育的‘明長17 號’和三明市三真生物科技有限公司供應(yīng)的‘明長2 號’作為親本，進(jìn)行單孢雜交育種試驗，選育出優(yōu)良菌株Cr12、Cr10，其表現(xiàn)子實體顏色深、產(chǎn)量高、口感脆嫩，值得進(jìn)一步深入研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）雜交親本菌株。長根菇明長17 號、明長2 號，由三明市三真生物科技有限公司保藏。

（2）基質(zhì)配方。①PDA 培養(yǎng)基配方：去皮馬鈴薯200 g、瓊脂20 g、葡萄糖20 g、水1 000 mL；②原種、栽培種培養(yǎng)基配方：闊葉樹木屑58%、棉籽殼20%、麥麩20%、輕質(zhì)炭酸鈣1%、蔗糖1%，含水量60%；③生產(chǎn)培養(yǎng)料配方：闊葉樹木屑37%、棉籽殼37%、麥麩25%、輕質(zhì)炭酸鈣1%，含水量62%。

（3）容器。18×180（mm）玻璃試管，90 mm培養(yǎng)皿，750 mL 玻璃瓶，17×33（cm）折角聚丙烯袋。

1.2 實驗方法

（1）親本菌株單孢分離培養(yǎng)。從本公司栽培的兩親本菌株子實體中選擇生長健壯、菌肉厚、形態(tài)完整、清潔的八分成熟子實體，采后立即于無菌條件下切去菌柄，菌褶朝下放于墊有無菌紙的培養(yǎng)皿中收集孢子。15 h 后取適量擔(dān)孢子放入無菌水中，稀釋至一定濃度，用接種環(huán)醮取孢子液涂于平板培養(yǎng)基上，密封培養(yǎng)皿，于25 ℃下避光培養(yǎng)。待出現(xiàn)直徑為3～6 mm 的菌落時，從每個獨立菌落中挑取一小塊菌絲于斜面培養(yǎng)基中央，在25 ℃下培養(yǎng)。待菌絲體生長最快的斜面培養(yǎng)基中的菌絲即將長滿斜面時，對各菌落進(jìn)行鏡檢，選出單核菌株。

（2）配對雜交。親本菌株各選取菌絲形態(tài)、色澤相似，生長速度較快的10 個單核菌絲菌株，于斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行交互配對，兩菌種塊相距20 mm，共100 個組合。兩菌落接觸后挑取交接處的菌種塊于斜面培養(yǎng)基中央，于25 ℃下培養(yǎng)。分別于3 天、13 天后測量菌絲兩個生長端之間的距離，挑選出日均生長速度≥4.0 mm 的進(jìn)行鏡檢，＜4.0 mm 的淘汰。鏡檢結(jié)果有鎖狀聯(lián)合的，進(jìn)行移植，擴大繁殖。

（3）初篩試驗。每個原種接種15 袋，設(shè)3 次重復(fù)，每重復(fù)5 袋，以親本作對照。每袋裝濕料重800 g，折干料重350 g。三層無紡布封口，121～123 ℃下蒸汽滅菌2 h，每袋接種量為30 g。培養(yǎng)條件：菌溫25 ℃，避光，CO2濃度≤0.3%，空氣相對濕度60%～70%。記錄菌絲長滿菌袋需要的天數(shù)，待所有菌袋長滿后，白天給予300 lx 光照，其他培養(yǎng)條件不變。培養(yǎng)80 天后單袋覆土出菇。菇房環(huán)境條件：溫度20～30 ℃；濕度85%～95%；光照100～300 lx；CO2濃度≤0.3%。

（4）復(fù)篩試驗。經(jīng)初篩試驗，選出5 個雜交菌株與兩親本進(jìn)行復(fù)篩試驗，每菌株接種30 袋，設(shè)3 次重復(fù)，每重復(fù)10 袋。接種、培養(yǎng)方法同1.2（3）。

（5）特異性鑒定。將選出的菌株與兩親本進(jìn)行形態(tài)比較及拮抗試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 配對雜交菌株

配對雜交菌株中菌絲日均生長速度≥4.0 mm的有63 個，經(jīng)鏡檢，其中8 個無鎖狀聯(lián)合，其余55 個具有鎖狀聯(lián)合的菌株編號Cr01～Cr55，開展初篩試驗。

2.2 初篩試驗結(jié)果

55 個雜交菌株的初篩試驗結(jié)果如表1所示。其中，Cr03、Cr06、Cr11 等11 個菌株的菌絲日均生長速度慢，予以淘汰。剩余44 個雜交菌株栽培性狀分化明顯，菌蓋顏色深淺不一，形態(tài)有的圓整，有的具缺刻，有的反卷；子實體大小有的較均勻，有的大小不一；有的開傘快，有的開傘慢。按單朵重量大、顏色深、形態(tài)好、開傘慢等指標(biāo)綜合評定，選出表現(xiàn)最好的5 個菌株：Cr10、Cr12、Cr25、Cr37、Cr55，進(jìn)入復(fù)篩試驗。

表1 初篩試驗44 個雜交菌株的栽培表現(xiàn)

2.3 復(fù)篩試驗結(jié)果

由表2和表3可知，Cr12、Cr10、Cr55、Cr25、Cr37 及明長17 號（CK）的平均單袋產(chǎn)量分別為304 g、289.63 g、263.1 g、250.43 g、248.47 g 和242.73 g，生物學(xué)效率分別為86.86%、82.75%、75.17%、71.55%、70.99%和69.35%。5 個雜交菌株產(chǎn)量均高于親本明長17 號，以Cr12 產(chǎn)量最高，與明長17 號、Cr37、Cr25、Cr55 有極顯著差異；Cr10 次之，與明長17 號、Cr37、Cr25 有極顯著差異；Cr12 與Cr10 兩個菌株之間，以及Cr55、Cr25、Cr37、明長17 號4 個菌株之間的差異不顯著。2.4 特異性鑒定

表2 雜交菌株復(fù)篩試驗產(chǎn)量比較（Turkey 檢驗）

表3 6 個菌株產(chǎn)量方差分析表

Cr12、Cr10 與兩親本菌株的形態(tài)差異見圖1～圖4。與兩親本相比，兩個雜交菌株出菇快，朵形更大，大小更均勻，顏色介于兩親本之間，開傘速度與明長17 號相近，略慢于明長2 號。

圖1 長根菇Cr12

圖2 長根菇Cr10

圖3 明長2 號（親本）

圖4 明長17 號（親本）

由圖5、圖6可知，Cr12、Cr10 與兩親本間具有拮抗效應(yīng)，可以認(rèn)定與兩親本有明顯差異，是兩親本的雜交后代。

圖5 長根菇Cr12 與兩親本的拮抗試驗結(jié)果

圖6 長根菇Cr10 與兩親本拮抗試驗結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1 本試驗長根菇擔(dān)孢子萌發(fā)率低，明長17 號和明長2 號分別只得到12 個和11 個單核菌株；菌絲萌發(fā)速度慢，萌發(fā)時間10～45 天不等。與擔(dān)孢子7～10 天即可萌發(fā)的香菇、茶樹菇等菌類相比，差異顯著。長根菇擔(dān)孢子萌發(fā)條件尚待研究。

3.2 食用菌雜交育種中親本的選擇十分重要，而親本的單核菌株菌絲生長狀態(tài)差異較大，到底是選擇性狀各異的單核菌株，還是選擇生長快、形態(tài)好的單核菌株，也值得研究。