金毛管鼻蝠在我國模式產(chǎn)地外的再發(fā)現(xiàn)
——廣東、云南和四川新記錄

鐘韋凌，張欣，吳毅，蔣學(xué)龍，石紅艷，李鋒，陳伯承，周全*，余文華*

(1.廣州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣州510006；2.中國科學(xué)院昆明動物研究所，昆明650223；3.綿陽師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川綿陽621006)

管鼻蝠屬Murina隸屬于翼手目Chiroptera蝙蝠科Vespertilionidae管鼻蝠亞科Murininae，為一類鼻孔呈管狀的樹棲型蝙蝠，常棲息于偏遠(yuǎn)且植被較好的森林內(nèi)，捕捉相對困難，研究難度大，生物學(xué)基礎(chǔ)資料匱乏。近年來國內(nèi)外學(xué)者對管鼻蝠類群的調(diào)查力度增大，全球目前已發(fā)現(xiàn)管鼻蝠40種，其中我國記錄19種，主要分布在我國南部地區(qū)(Wilson & Mittermeier，2019)。金毛管鼻蝠M.chrysochaetes為Eger和Lim(2011)利用廣西底定標(biāo)本命名的新種，之后在越南有過2次記錄報道(Kruskop，2013；Sonetal.，2015)，但在我國其他地區(qū)尚無相關(guān)記錄。目前已知該種分布區(qū)域狹窄，其模式標(biāo)本和越南標(biāo)本均采集于廣西與越南交界附近的高山(Sonetal.，2015)。2013—2014年，本研究組在廣東南嶺、云南哀牢山和四川臥龍進行翼手目多樣性調(diào)查時共采集到11只管鼻蝠，根據(jù)外形和頭骨的形態(tài)特征及線粒體細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ(COⅠ)基因的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果，將其鑒定為金毛管鼻蝠，為廣東、云南和四川3省翼手目分布新記錄。

1 研究方法

1.1 標(biāo)本采集

2013年10月在廣東省南嶺縣八寶山叉河(113°1.135′E，24°55.896′N，海拔1 016 m)使用蝙蝠豎琴網(wǎng)采集到3只小型蝙蝠(1♀：GZHU13523，2♂：GZHU13527、13531)；2014年1—6月在云南省玉溪市新平縣哀牢山的金山丫口(101°29.938′E，23°56.815′N，海拔2 369 m)采集到2只小型蝙蝠(2♂：GZHU14001、14223)，8月在四川省臥龍黑松林(103°6.937′E，30°58.312′N，海拔2 065 m)采集到 6只小型蝙蝠(2♀：GZHU14458、14497，4♂：GZHU14481、14482、14483、14485)。根據(jù)鼻部特征初步鑒定為管鼻蝠屬種類，對其進行編號、稱重和外形測量，并采集肝臟和肌肉組織保存于95%乙醇中。上述標(biāo)本現(xiàn)保存于廣州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院。

1.2 外形和頭骨測量

參照Bates和Harrison(1997)、楊奇森等(2007)的哺乳動物測量標(biāo)準(zhǔn)，對標(biāo)本進行稱重、外形和頭骨測量(JY-200電子天平，廣州艾瑞貿(mào)易有限公司，精度0.01 g；MNT-150數(shù)顯游標(biāo)卡尺，上海美耐特實業(yè)有限公司，精度0.01 mm)，外形指標(biāo)包括：體質(zhì)量(body weight，Wt)、頭體長(head and body length，HB)、前臂長(forearm length，F(xiàn)A)、耳長(ear length，E)、后足長(hindfoot length，HF)、脛骨長(tibia length，Tib)和尾長(tail length，T)。頭骨測量指標(biāo)包括：顱全長(great length of kull，GTL)、枕犬長(condylo-cannine length，CCL)、腦顱寬(breadth of braincase，BB)、顴寬(zygomatie width，ZW)、眶間寬(interorbital width，IOW)、上齒列長(maxillary tooth row length，C1-M3)、上犬齒寬(upper canine width，C1-C1)、上臼齒寬(third molar width，M3-M3)、下齒列長(mandibular tooth row length，C1-M3)和下頜長(mandibular length，ML)。所有測量數(shù)據(jù)用SPSS 26.0進行描述性統(tǒng)計。形態(tài)學(xué)比較使用的標(biāo)本信息見表1。

表1 形態(tài)學(xué)比較參考使用的金毛管鼻蝠標(biāo)本

1.3 系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析

取約20 mg肝臟組織用DNA試劑盒(AG通用型基因組AG21009，艾科瑞生物)提取總DNA，使用PCR技術(shù)擴增目的片段，使用引物和PCR反應(yīng)試劑設(shè)計程序擴增COⅠ基因序列(Lack & Bussche，2010；Roehrsetal.，2010；Heaneyetal.，2012；Kuoetal.，2017；Yuetal.，2020)。擴增成功的PCR產(chǎn)物送上海生工生物工程有限公司測序，篩選出617 bp的COⅠ基因。在GENEIOUS 9.1.8(Drummondetal.，2016)中目測校對與拼接比對，從NCBI-nt中下載已有的管鼻蝠屬物種COⅠ基因序列(表2)，以毛翼管鼻蝠Harpiocephalusharpia為外群，使用MUSCLE(Edgar，2004)排序所有序列，IQ-TREE 1.6.1(Nguyenetal.，2015)構(gòu)建最大似然樹，根據(jù)BIC準(zhǔn)則選擇最適替換模型TIM2+F+I+G4，自展1 000次估計節(jié)點的支持度。在MrBayes 3.2(Ronquistetal.，2012)構(gòu)建貝葉斯樹，MrModeltest 2.3(Nylander，2004)確定最佳的DNA替換模型(GTR+I+Γ)，設(shè)置參數(shù)為：建立4個馬爾可夫鏈，運行1 000萬代，采樣頻率為 1 000，丟棄前100萬代后構(gòu)建嚴(yán)格一致樹。

表2 本研究中管鼻蝠COⅠ序列的GenBank登錄號

1.4 回聲定位聲波錄制及分析

將采集到的個體獨立放置于密閉安靜的空間(5 m×4 m×3 m)中飛行，待蝙蝠適應(yīng)飛行環(huán)境穩(wěn)定飛行后，用Pettersson D500X超聲波探測儀(Pettersson Elektronik AB，瑞士)錄制超聲波。采樣頻率設(shè)置為500 kHz，分辨率為16 bit。使用超聲波分析軟件Batsound 4(Pettersson Elektronik AB)可視化聲波的時域波形圖、能量譜圖和聲譜圖，聲譜圖采用哈明窗(Hanning windows)分析，F(xiàn)FT sizes設(shè)置為512。選擇高信噪比的回聲定位聲波進行測量，測量指標(biāo)包括：持續(xù)時間(duration time，DUR)、最高頻率(highest frequency，HF)、最低頻率(lowest frequency，LF)和主頻率(dominant frequency，DF)。以上數(shù)據(jù)使用SPSS 26.0進行描述性統(tǒng)計。

2 結(jié)果

2.1 外形及頭骨特征

金毛管鼻蝠為小型管鼻蝠，前臂長29.29 mm±0.98 mm(n=11；表3)。鼻孔呈管狀，向外延長且發(fā)達。耳廓圓，后緣無明顯凹痕，耳屏基部略寬、端部尖而細(xì)長。嘴部、眼睛周圍及下巴處毛發(fā)為黑色(圖1:A)。背部和頭部的顏色相近，背毛基部黑色，中部為淺棕色，毛尖為金褐色且尖端具金屬光澤(圖1:B)。腹毛毛尖為灰白色，基部為黑色(圖1:C)。前臂覆有金色短毛。尾翼背表面、尾椎、脛骨和足部均覆蓋有基部黑色、尖端金色毛發(fā)，尾膜邊緣附著黑色短毛。

表3 金毛管鼻蝠外形及頭骨測量數(shù)據(jù)比較

該批標(biāo)本頭骨顱全長為14.09 mm±0.49 mm(n=10)，吻突驟然上升至前額，鼻吻部中間有一明顯凹槽。顴弓纖細(xì)，腦顱稍膨大圓潤，無矢狀嵴和人字嵴(圖1:D)。基蝶骨為淚滴狀的淺凹陷(圖1:E)。齒式為2.1.2.3/3.1.2.3=34。上門齒(I2、I3)等高，高度為上犬齒(C1)的2/3；上犬齒小，內(nèi)彎，短于第二上前臼齒(P4)。第一上前臼齒(P2)較小，高度為P4的1/2，齒冠面積為P4的1/3。下犬齒略高于第一下前臼齒(P2)，但基部超過P2。上頜臼齒(M1、M2和M3)具小而明顯的中附尖(圖1:D)。

2.2 分子鑒定

本研究擴增出11條617 bp的COⅠ序列，構(gòu)建的最大似然樹和貝葉斯樹均顯示，本研究中的11號標(biāo)本與金毛管鼻蝠模式標(biāo)本序列(GenBank登錄號：HM540986；模式產(chǎn)地：中國廣西)聚為高支持度的一支(自展值：99，后驗概率：1；圖2)。因此，分子結(jié)果支持本研究標(biāo)本鑒定為金毛管鼻蝠。

2.3 回聲定位聲波特征

本研究分析了飛行狀態(tài)下6只金毛管鼻蝠(四川: 4♂，2♀)共25個回聲定位脈沖，其回聲定位聲波類型為調(diào)頻型、單諧波(圖3)。飛行狀態(tài)下(n=25)，聲波主頻率為99.17 kHz±8.29 kHz(90.70～110.10 kHz)，諧波頻率從127.40 kHz±6.17 kHz(114.00～134.00 kHz)下調(diào)至66.36 kHz±8.80 kHz(54.00～83.00 kHz)，脈沖持續(xù)時間為1.96 ms±0.34 ms(1.40～2.70 ms)。

3 討論

本研究采集標(biāo)本與金毛管鼻蝠模式標(biāo)本(Eger& Lim，2011)在背部毛發(fā)顏色、耳廓形態(tài)等特征均相吻合。在度量學(xué)指標(biāo)上，除前臂長略大于模式標(biāo)本外，其余指標(biāo)基本相符?；贑OⅠ基因序列構(gòu)建的分子進化樹也支持將上述標(biāo)本鑒定為金毛管鼻蝠。目前在我國南部區(qū)域分布的管鼻蝠種類中，與金毛管鼻蝠分布相近且體型相似的種類有菲氏管鼻蝠M.feae、艾氏管鼻蝠M.eleryi、水甫管鼻蝠M.shuipuensis和金管鼻蝠M.aurata(Eger & Lim，2011；Sonetal.，2015；王曉云等，2016)。其中，菲氏管鼻蝠和水甫管鼻蝠在毛色上與金毛管鼻蝠有較明顯的區(qū)別：金毛管鼻蝠背部多覆有金黃毛發(fā)，菲氏管鼻蝠背面毛發(fā)整體為灰褐色；水甫管鼻蝠頸部腹面附有明顯的橘黃色毛發(fā)，金毛管鼻蝠不具這一特征。金管鼻蝠和艾氏管鼻蝠在外形毛發(fā)上與金毛管鼻蝠相近，容易混淆，但金毛管鼻蝠背毛的金黃色毛尖多于前二者，背毛和腹毛毛基顏色更深，為黑色。在頭骨方面，艾氏管鼻蝠的C1高于P4，而金毛管鼻蝠與金管鼻蝠的C1與P4接近等高，此外，在頭骨側(cè)面，金毛管鼻蝠的前額突然向顱骨傾斜，使頭骨呈圓頂狀，但另2種為逐漸傾斜的前額。基于上述形態(tài)學(xué)特征，基本可將這5種近似的管鼻蝠予以鑒別，但準(zhǔn)確的種類鑒定建議借助分子系統(tǒng)學(xué)方法。

金毛管鼻蝠飛行狀態(tài)下發(fā)出單諧波、調(diào)頻性聲波，主頻率高(四川：99.17 kHz±8.29 kHz)，調(diào)頻帶寬，聲脈沖寬度短。蝙蝠科超聲波的頻率高低與其獵物的體積大小呈負(fù)相關(guān)(Wilkinson，1995；馮江，2001)，四川臥龍屬于岷山山地，植被復(fù)雜(施小剛等，2017)，故金毛管鼻蝠可能在枝葉密集處、灌木叢等復(fù)雜的環(huán)境中近距離掠食體型較小的昆蟲。

迄今為止，國內(nèi)金毛管鼻蝠僅在廣西底定有 1號模式標(biāo)本報道(Eger & Lim，2011)，國外僅越南有2次新記錄報道(各1號標(biāo)本，Kruskop，2013；Sonetal.，2015)，研究數(shù)據(jù)缺乏、調(diào)查記錄少，種群數(shù)量、趨勢等各類數(shù)據(jù)均未知。本次報道該種在廣東、云南和四川3地的新發(fā)現(xiàn)，豐富了該珍稀蝙蝠匱乏的基礎(chǔ)生物學(xué)資料，擴大了其分布范圍，由原來僅在越南和廣西交界的高山點狀分布擴大至中國南部分布。但該物種的實際分布范圍、遺傳學(xué)特征、瀕危情況仍未知，亟需進一步開展研究。