飼料中玉米赤霉烯酮檢測(cè)方法概況

高琳 王磊

（天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心 300193）

目前關(guān)于飼料中玉米赤霉烯酮（Zearalenone）的檢測(cè)方法很多，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，不僅可以定性判斷飼料中是否存在玉米赤霉烯酮，還可以對(duì)其進(jìn)行精準(zhǔn)定量，為飼料安全提供技術(shù)保障。

1 薄層層析法

薄層層析法（Thin Layer Chromatography，TLC）是較早用于檢測(cè)玉米赤霉烯酮的試驗(yàn)方法，也是飼料中玉米赤霉烯酮檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法之一。TLC 的工作原理為待檢樣品通過提取、柱層析、洗脫、濃縮、薄層分離后，在紫外光下（波長(zhǎng)為365nm）會(huì)出現(xiàn)黃綠色或藍(lán)紫色熒光，根據(jù)其在薄層上顯現(xiàn)的最低檢出量即可測(cè)定待檢樣品玉米赤霉烯酮含量。TLC 操作簡(jiǎn)便、成本低、可定性定量判斷，但由于樣品前期處理復(fù)雜，樣品純化難度高，結(jié)果分析耗時(shí)，受操作者個(gè)人主觀判斷的影響較大，結(jié)果的準(zhǔn)確度及靈敏度不高，因此，TLC 已不能很好地滿足現(xiàn)代檢測(cè)要求，應(yīng)用受到一定限制。謝賢慶等利用TLC方法對(duì)飼料霉變引發(fā)豬流產(chǎn)和死亡的飼料進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TLC 檢測(cè)玉米赤霉烯酮含量為2000ug/kg[1]。羅雪云等對(duì)玉米和小麥中玉米赤霉烯酮進(jìn)行加測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，薄層板上的最低檢出量為0.04ug，小麥和玉米200ppb 的回收率分別為85%～100%和7%～100%[2]。

2 氣相色譜法

氣相色譜法（Gas Chromatography，GC）是一種對(duì)易揮發(fā)而不發(fā)生分解的化合物進(jìn)行分離與分析的色譜技術(shù)，可以同時(shí)檢測(cè)多種不同的鐮刀菌毒素，GC 檢測(cè)飼料中玉米赤霉烯酮的優(yōu)勢(shì)在于應(yīng)用范圍廣、檢測(cè)回收率高、檢測(cè)靈敏度強(qiáng)，可定量定性分析玉米赤霉烯酮，但檢測(cè)儀器成本較高，限制了GC 技術(shù)的推廣。溫肇霞等研究發(fā)現(xiàn)，GC 檢測(cè)3 種不同鐮刀菌毒素，各毒素回收率均在85%以上[3]。李楠等利用毛細(xì)管色譜柱在規(guī)定的氣譜條件下對(duì)飼料和谷物中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）、二醋酸蹜草鐮刀菌烯醇（DAS）、T-2 毒素和玉米赤霉烯酮毒素4 種不同的鐮刀菌毒素進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)GC 檢測(cè)能完全分離這4 種不同的鐮刀菌毒素衍生物，且穩(wěn)定性能搞，其中玉米赤霉烯酮的檢測(cè)限達(dá)到1.5×10-8g[4]。

3 高效液相色譜法

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用且結(jié)果可靠性極高的一種真菌毒素加測(cè)方法。HPLC 檢測(cè)原理為基于適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相條件，選擇適宜的色譜柱，分離待檢樣品毒素，再利用紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器或電化學(xué)檢測(cè)器等不同檢測(cè)儀器將被分析組在柱流出液中濃度的變化轉(zhuǎn)化為光學(xué)或電學(xué)信號(hào)，最后計(jì)算出色譜峰的面積，即可獲得待檢樣品毒素含量。HPLC 是一種可批量處理，結(jié)果可定性、定量分析，檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)、準(zhǔn)確度、靈敏度高，是檢測(cè)范圍廣泛的檢測(cè)技術(shù)。實(shí)際操作時(shí)要根據(jù)不同真菌毒素的性質(zhì)對(duì)試驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。

4 超高效液相色譜法

超高效液相色譜法（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）基于HPLC 技術(shù)原理和理論，利用超小粒徑填料色譜柱及超高壓輸液泵，在超高速度運(yùn)轉(zhuǎn)下仍然具有高分離性和靈敏度的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)，適合于微量樣本或樣本中微量玉米赤霉烯酮的檢測(cè)，可準(zhǔn)確定量飼料中玉米赤霉烯酮含量。蘇碧玲等利用UPLC 檢測(cè)玉米油中玉米赤霉烯酮含量，樣品用84%乙腈水溶液提取，經(jīng)BDS HYPERSIL C18 色譜柱分離，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，UPLC 檢測(cè)方法具有樣品處理簡(jiǎn)單、靈敏度高、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)。

5 生物學(xué)檢測(cè)法

生物學(xué)檢測(cè)法是檢測(cè)飼料中玉米赤霉烯酮毒素存在與否及毒性強(qiáng)弱的一種基本方法，具有操作簡(jiǎn)便、儀器成本低、耗時(shí)短等特點(diǎn)，可以應(yīng)用于大量飼料樣品玉米赤霉烯酮毒素的初步篩選。如對(duì)禾谷鐮孢菌中玉米赤霉烯酮生物合成途徑中的必需基因PKS4 設(shè)計(jì)特異性引物，通過檢測(cè)PKS4 基因間接檢測(cè)禾谷鐮孢菌玉米赤霉烯酮毒素存在與否，同時(shí)結(jié)合ELISA 檢測(cè)方法對(duì)玉米赤霉烯酮毒素進(jìn)行定性和定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCR 方法可以穩(wěn)定擴(kuò)增出1076bp，該片段和PKS4 基因（NCBI 登錄號(hào)DQ019316）相同區(qū)段序列相似性達(dá)99.63%，建立了一種快速篩選小麥籽粒中玉米赤霉烯酮污染的檢測(cè)方法。

6 免疫學(xué)檢測(cè)方法

免疫學(xué)檢測(cè)方法的檢測(cè)原理主要基于抗原抗體反應(yīng)，包括化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）、電化學(xué)發(fā)光免疫分析（Electro-Chemiluminescence Immunoassay，ECL）、免疫層析方法（Lateral Flow Immunoassay，LFIA）、酶聯(lián)免疫吸附分析（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）、膠體金免疫層析方法（Colloidal Gold Immunoassay，CGIA）、免疫熒光（Immunofluorescence，IF）和免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）等。吳才章等基于CLIA 技術(shù)建立了一種真菌毒素低濃度檢測(cè)方法，該系統(tǒng)檢出限為0.1ug/kg，樣品加標(biāo)回收率超過90%，標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)為0.9965，系統(tǒng)檢測(cè)玉米赤霉烯酮的線性范圍為0～60ug/kg。ELISA 檢測(cè)技術(shù)是一種成本低、耗時(shí)短、操作簡(jiǎn)單，可定量定性分析玉米赤霉烯酮含量的快速檢測(cè)手段，廣泛應(yīng)用于飼料中生物毒素、致病菌和農(nóng)業(yè)殘留等成分的檢測(cè)。王文琣等利用間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA 檢測(cè)技術(shù)對(duì)飼料及其原理中玉米赤霉烯酮含量進(jìn)行檢查，通過試驗(yàn)優(yōu)化研制出一種玉米赤霉烯酮ELISA 試劑盒，和德國(guó)拜發(fā)檢測(cè)試劑盒比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)不同的試劑盒對(duì)樣本陰陽(yáng)性判定基本一致，自行開發(fā)的ELISA 試劑盒玉米赤霉烯酮檢測(cè)限為100ug/kg，回收率為78.5～115.0%。金玉等基于免疫層析技術(shù)研制出一種用于檢測(cè)糧食和飼料中玉米赤霉烯酮金納米花免疫層析卡，該方法獲得的檢測(cè)靈敏度是傳統(tǒng)玉米赤霉烯酮納米金免疫層析檢測(cè)卡的6 倍，與ELISA 檢測(cè)方法相比，結(jié)果的總符合率為90.5%，可快速篩查玉米赤霉烯酮污染程度低的飼料和糧食樣本。

7 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，玉米赤霉烯酮的傳統(tǒng)檢測(cè)方法主要有TLC、GC和HPLC 等技術(shù)，隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，試驗(yàn)室常用UPLCMS/MS 來提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度，但這種聯(lián)合技術(shù)成本高、操作復(fù)雜，無法適應(yīng)大規(guī)模的樣本篩查工作。膠體金免疫層析、ELISA 能滿足大批量樣品篩查，且耗時(shí)短、檢測(cè)結(jié)果特異性較高，但結(jié)果的重復(fù)性和靈敏度需要進(jìn)一步提高。生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)如熒光定量方法實(shí)現(xiàn)了微量玉米赤霉烯酮的檢測(cè)，省時(shí)、成本低，便于日?？焖俸Y查。因此，在今后玉米赤霉烯酮檢測(cè)中可以加大對(duì)生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的推廣和應(yīng)用，讓玉米赤霉烯酮檢測(cè)更加精準(zhǔn)、便捷。