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    一起小鵝瘟病例的鑒定

    2017-04-04 12:16:11隋增亮山東省高密市朝陽街道辦事處農(nóng)林站261500
    山東畜牧獸醫(yī) 2017年2期
    關(guān)鍵詞:小鵝雛鵝小腸

    隋增亮 (山東省高密市朝陽街道辦事處農(nóng)林站 261500)

    一起小鵝瘟病例的鑒定

    隋增亮 (山東省高密市朝陽街道辦事處農(nóng)林站 261500)

    小鵝瘟作為養(yǎng)鵝業(yè)常見、多發(fā)的高致死性疾病,每年都會造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。山東沂南地區(qū)養(yǎng)鵝密度較大,近來該地區(qū)雛鵝發(fā)生急性傳染性疾病,死亡率高達(dá)90%,病鵝起初精神委頓,后期食欲廢絕,嚴(yán)重下痢,迅速死亡。死前發(fā)生雙腿麻痹、癱瘓、角弓反張、抽搐不止等神經(jīng)癥狀。剖檢可見皮下組織充血、全身脫水、心臟、肝臟腫大,小腸后端可見明顯的纖維性混合物栓塞,初步診斷為小鵝瘟。設(shè)計針對性引物,通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增出目的條帶,最終鑒定為小鵝瘟。小鵝瘟病毒(Goose parvovirus,GPV)是由小鵝瘟病毒引起的一種傳染性疾病,表現(xiàn)為急性敗血癥。4~20日左右的雛鵝易發(fā)生感染,死亡率很高,隨著雛鵝日齡的增長發(fā)病率和死亡率逐漸減低。根據(jù)發(fā)病時間長短不同可分為3種類型,最急性型、急性型和亞急性型。發(fā)病的雛鵝表現(xiàn)為全身敗血癥、稀瀉。1周內(nèi)的雛鵝死亡率為100%。沂南地區(qū)一養(yǎng)殖戶,養(yǎng)鵝2000只,在2016年4月份感染某急性傳染病,死亡率達(dá)91%。筆者對該病進(jìn)行系統(tǒng)鑒定。

    1 材料和方法

    1.1 材料 山東省沂南縣一鵝場送檢病死鵝數(shù)只; DNA提取試劑盒購Qiagen公司;Taq酶購自上海生物工程公司;瓊脂糖凝膠回收試劑盒為Qiagen公司產(chǎn)品;其它試劑均為國產(chǎn)或進(jìn)口分析純試劑。

    1.2 臨床癥狀及剖檢觀察 通過詢問和到場觀察鵝群情況,并剖檢觀察病死鵝臨床癥狀。病鵝起初表現(xiàn)為精神低迷、進(jìn)食量銳減、羽毛黯淡無光、鼻分泌物異常增加,然后嚴(yán)重下痢、排出有氣泡的黃綠色或者黃白色水樣糞便。大部分病死鵝在死前發(fā)生雙腿麻痹、癱瘓、角弓反張、抽搐不止等神經(jīng)癥狀。

    1.3 病毒基因組的提取 按試劑盒步驟提取鵝小腸研磨液DNA。

    1.4 PCR擴(kuò)增 設(shè)計合成針對病毒VP3蛋白的引物,如下1對引物F:5′-CCAAGCTACAACAACCACATCTAC-3′R:5′-CTGCGGCAGGGCATAGACATCCGAC-3′。上述引物由大連寶生物工程公司合成。然后取0.1μg的病毒DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增,采用50μl的PCR體系:DNA0.1μg,10×PCR buffer 5μl,25mM MgCl2 3μl,10mM dNTP 1μl,上游引物和下游引物各25pmol,Taq酶0.5U,加滅菌超純水至50μl,經(jīng)94℃ 5min 變性,然后94℃ 1min,55℃ 1min,72℃ 2min,30個循環(huán)擴(kuò)增,72℃10min延長,4℃保存。

    1.5 PCR產(chǎn)物測序 將PCR產(chǎn)物送上海生物工程公司測序。將反饋序列在NCBI中的Nuclear acid blasting進(jìn)行序列比對。

    2 結(jié)果

    2.1 剖檢結(jié)果 剖檢可見皮下組織充血,全身脫水,心臟、肝臟腫大,小腸后段內(nèi)可見明顯的纖維性混合物栓塞,小腸充血、出血。該癥狀符合典型小鵝瘟特征表現(xiàn)。

    2.2 PCR鑒定結(jié)果 提取組織DNA后使用特異性引物擴(kuò)增,核酸膠鑒定有明顯陽性條帶,將條帶PCR產(chǎn)物公司測序,將反饋序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中比對,發(fā)現(xiàn)與小鵝瘟VP3蛋白同源性99.8%。因此,鑒定該鵝場感染小鵝瘟。

    3 總結(jié)

    目前對于小鵝瘟并沒有有效的治療方法,防制該病一般都是加強(qiáng)免疫和科學(xué)的管理。通常用高免血清和卵黃抗體做被動免疫,也有用弱毒疫苗或者滅活強(qiáng)毒疫苗做主動免疫,免疫情況良好。基本經(jīng)過免疫的鵝群都不會發(fā)病,通過免疫就基本可以阻止該病的暴發(fā)和流行。

    S858.33

    B

    1007-1733(2017)02-0039-01

    2016–09–29)

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